地塞米松刺激豬內皮細胞對豬單核源樹突狀細胞內源性抗原遞呈分子表達水平的影響

王 瑩，吳 晗，李志軍，張永紅，李煥榮，李秋明*

(1.北京農學院動物科學技術學院，北京 102206；2.北京市動物疫病預防控制中心，北京 102600)

血管內皮細胞(VEC)可通過調節白細胞運輸、炎性因子產生和與MHC-II分子相關的抗原遞呈，使宿主對傳染因子發生應答[1]。地塞米松(DSMS)是一種人工合成的糖皮質激素，普遍作為抗炎、抗過敏藥使用[2]。有研究顯示，地塞米松直接作用于單核細胞，對其分化具有明顯的抑制作用[3]，并且內皮源IL-8可在早期抑制體外培養的MoDC成熟[4]。

那么DSMS作用于內皮細胞后，使內皮源IL-8的分泌量降低，是否會間接對MoDC遷移與內源性抗原遞呈功能有影響尚未見報道。本研究將模擬DSMS進入機體后刺激VEC，分別與分化和未分化的MoDC進行共培養，通過熒光定量PCR和多功能酶標儀檢測，研究DSMS刺激VEC對MoDC遷移能力與抗原遞呈功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

細胞為豬髖動脈內皮細胞系(PIEC),購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫上海生命科學研究院細胞資源中心，目錄號是GN015。試驗動物為長白、大白雜交斷奶后仔豬，購自首農集團種豬育種中心，飼養于北京農學院動物房內。所有試驗動物均通過PCR/RT-PCR檢測PCV1、PCV2、PRRSV、PRV、PPV、CSFV病原，且結果均為陰性。地塞米松，購自阿拉丁公司；重組豬GM-CSF和IL-4，購自R&D公司，-20 ℃保存；超氧化物陰離子探針(Dihydroethidium，DHE)，購自碧云天公司；無酚紅RPMI 1640，購自Gibco公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 DSMS質量濃度篩選 常規方法培養PIEC，培養液使用含有10%胎牛血清的RPMI 1640細胞培養液。將細胞數量稀釋為3×105個/孔，接種于無菌24孔板內，此時所使用的細胞培養液中加入不同質量濃度的DSMS，其質量濃度分別為10-2、10-3、10-4、10-5、10-6mg/mL。……