PCV2感染的血管內皮細胞RIG-I樣信號通路的變化

劉士瑜，谷可偉，王 瑩，何 樂，李煥榮

(北京農學院動物科學技術學院，北京，102206)

斷奶仔豬多系統衰竭征(PMWS)的主要病原是豬圓環病毒2型(PCV2)，該病以淋巴細胞衰竭、炎性細胞浸潤為特征[1]，抑制機體的免疫功能，導致其他細菌或病毒的繼發感染[2]。研究表明除PCV2對免疫系統造成影響外，內皮細胞的功能及血管系統的紊亂也是造成PCVD的主要原因[3]。血管內皮細胞可通過調節白細胞運輸、炎性因子產生和與MHCⅡ分子相關的抗原遞呈，使其在宿主免疫應答中發揮重要作用，而這些功能的發揮需要內皮細胞信號通路的精準調控[4]。PCV2感染豬血管內皮細胞后會造成IL-8、IL-6和黏附分子(ICAM-1)等表達異常，導致內皮細胞免疫調節功能異常[5-6]。然而，PCV2感染血管內皮細胞后，其模式識別受體通路的變化及調控這些因子產生的機理目前尚未有研究。

本研究擬通過PCV2感染豬髖動脈內皮細胞(PIEC)，利用基因芯片技術篩選與模式識別受體通路相關的差異基因，并利用熒光定量PCR及Western Blot檢測關鍵蛋白，以期闡述PCV2感染內皮細胞后參與免疫模式受體識別的信號通路，為該病的發生發展提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

豬髖動脈內皮細胞系(PIEC)，購自上海生命科學研究院細胞資源中心，目錄號GN015。PCV2病毒株PCV2-SD/2008(GQ174519)，經PK-15細胞系傳代3次獲得病毒液，TCID50為10-5.5/mL，由北京農學院動物科學技術學院動物疫病研究實驗室鑒定與保存。

RPMI 1640培養基購自GIBICO公司；胎牛血清(FBS)購自Biological公司；TRIzol LS Reagent購自Invitrogen公司；Poly(I:C)購自InvivoGen公司；鼠抗人RIG-I、兔抗人MAVS、鼠抗豬β-actin、山羊抗鼠IgG、山羊抗兔IgG均購自Cell Signaling Technology公司；……