布魯氏菌病防治技術(shù)規(guī)范及操作規(guī)范

拜克力·米吉提

摘 要：布魯氏菌病（Brucellosis，也稱布氏桿菌病，以下簡稱布病）是由布魯氏菌屬細菌引起的人獸共患的常見傳染病。我國將其列為二類動物疫病。 為了預(yù)防、控制和凈化布病，依據(jù)《中華人民共和國動物防疫法》及有關(guān)的法律法規(guī)，制定本規(guī)范。

關(guān)鍵詞：布魯氏菌;診斷;要點

一、適用范圍

本規(guī)范規(guī)定了動物布病的診斷、疫情報告、疫情處理、防治措施、控制和凈化標(biāo)準。 本規(guī)范適用于中華人民共和國境內(nèi)一切從事飼養(yǎng)、經(jīng)營動物和生產(chǎn)、經(jīng)營動物產(chǎn)品，以及從事動物防疫活動的單位和個人。

二、診斷

1.流行特點

多種動物和人對布魯氏菌易感布魯氏菌是一種細胞內(nèi)寄生的病原菌，主要侵害動物的淋巴系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)。病畜主要通過流產(chǎn)物、精液和乳汁排菌，污染環(huán)境。羊、牛、豬的易感性最強。母畜比公畜，成年畜比幼年畜發(fā)病多。在母畜中，第一次妊娠母畜發(fā)病較多。帶菌動物，尤其是病畜的流產(chǎn)胎兒、胎衣是主要傳染源。消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚、黏膜等感染。常呈地方性流行。人主要通過皮膚、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌最為嚴重。豬種布魯氏菌感染人較少見，犬種布魯氏菌感染人罕見，綿羊附睪種布魯氏菌、沙林鼠種布魯氏菌基本不感染人。

2.臨床癥狀

潛伏期一般為14～180天。最顯著癥狀是懷孕母畜發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)后可能發(fā)生胎衣滯留和子宮內(nèi)膜炎，從陰道流出污穢不潔、惡臭的分泌物。新發(fā)病的畜群流產(chǎn)較多;老疫區(qū)畜群發(fā)生流產(chǎn)的較少，但發(fā)生子宮內(nèi)膜炎、乳房炎、關(guān)節(jié)炎、胎衣滯留、久配不孕的較多。公畜往往發(fā)生睪丸炎、附睪炎或關(guān)節(jié)炎。

3.病理變化

主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃溃ⅰ⒘馨徒Y(jié)、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫（布病結(jié)節(jié)）。有的可見關(guān)節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液性、出血性炎癥。

4.實驗室診斷

（1）病原學(xué)診斷。①顯微鏡檢查。采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜水腫液、肝、脾、淋巴結(jié)、胎兒胃內(nèi)容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法染色，鏡檢，布魯氏菌為紅色球桿狀小桿菌，而其它菌為藍色。②分離培養(yǎng)。新鮮病料可用胰蛋白月示，瓊脂面或血液瓊脂斜面、肝湯瓊脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養(yǎng)基培養(yǎng);若為陳舊病料或傳染病料，可用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)時，一份在普通條件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的環(huán)境中，37℃培養(yǎng)7～10天。然后進行菌落特征檢查和單價特異性抗血清凝集試驗。為使防治措施有更好的針對性，還需做種型鑒定。

如病料被污染或含菌極少時，可將病料用生理鹽水稀釋5～10倍，健康豚鼠腹腔內(nèi)注射0.1～0.3mL/只。如果病料腐敗時，可接種于豚鼠的股內(nèi)側(cè)皮下。接種后4～8周，將豚鼠撲殺，從肝、脾分離培養(yǎng)布魯氏菌。

（2）血清學(xué)診斷。①虎紅平板凝集試驗（RBPT）（見GB/T 18646）胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液性、出血性炎癥。②全乳環(huán)狀試驗（MRT）（見GB/T 18646）③試管凝集試驗（SAT）（見GB/T 18646）④補體結(jié)合試驗（CFT）（見GB/T 18646）

三、布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗操作規(guī)程

1.范圍

本標(biāo)準規(guī)定了布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗的操作技術(shù)要求 本標(biāo)準適用于各種家畜布魯氏菌病篩選試驗。

2.試劑和材料

（1）試劑。抗原和血清：按照說明書使用，使用前置室溫（22℃～25℃）30min～60min，并充分搖勻。

（2）材料。①玻璃板：約45cm×30cm，要求潔凈，劃成32個方格，橫數(shù)8個格，縱數(shù)4個格，每格4×4cm，每一格下再劃1cm寬的小格，用于填寫血清號。②牙簽：扁形圓頭或類似小棒。 2.2.3 移液器：能夠吸取30 uL。 2.3 被檢血清

（3）按照常規(guī)方法采血分離血清。血清必須新鮮，無明顯蛋白凝固、無溶血和無腐敗氣味。 2.3.2運送和保存血清樣品，防止血清凍結(jié)和受熱，以免影響凝集價。試驗前血清須置室溫（22 ℃～25℃）30min～60min。

3.操作方法

（1）將玻璃板上各格標(biāo)上被檢血清號，然后加入相應(yīng)的被檢血清30 uL。

（2）在被檢血清上滴加30 uL虎紅平板凝集抗原，使其相混合。輕微搖動，室溫下4min內(nèi)觀察結(jié)果，同時作陰、陽血清對照。

（3）每次操作以不超過20份血清樣品為宜，以免樣品干燥而不易觀察結(jié)果。

4.結(jié)果判定

每份血清在規(guī)定時間內(nèi)出現(xiàn)凝集反應(yīng)者判為陽性，不出現(xiàn)凝集反應(yīng)者判為陰性;其必須在陰性血清對照不出現(xiàn)凝集，陽性血清對照出現(xiàn)凝集時，試驗成立，方可判定。

參考文獻：

[1]布合麗切木·依干巴地， 阿依古麗·納扎爾汗. 布魯氏桿菌病的危害及其防治[J]. 草食家畜， 2007（3）：60-61.