某父母代場種雞群傳染性鼻炎的診斷

李玉燕

中圖分類號：S858.31 ? ? 文獻標識碼：C ? ? 文章編號：1673-1085（2019）08-0032-03

雞傳染性鼻炎（IC）是由副雞嗜血桿菌（Hpg）引起的一種雞急性上呼吸道傳染病，此病由Beach 首先報道，De Blieck于1931年初次分離到了該病的病原體，最初命名為雞嗜血紅蛋白鼻炎芽孢桿菌，目前本病在世界許多地方都有發生和流行[1]。我國從1980年起就有許多疑似本病的病例出現，首先由馮文達于1987年在北京分離到細菌。臨床主要特征是病雞鼻粘膜發炎，打噴嚏、流鼻涕，且臉部發生腫脹。雞群在發病初期具有較低的死亡率，嚴重影響雞群生長發育和產蛋能力[2] ，而且在發病后期往往會由于出現混合感染而導致機體消瘦，死亡率明顯升高。所以，該病對養雞業危害較大，常造成嚴重的經濟損失[3-5]。

2019年6月，某父母代場種雞群從28周齡開始出現呼吸道癥狀，聽雞有啰音，咳嗽、打噴嚏，臨床雞只面部水腫，肉垂出現明顯腫脹，公雞尤為明顯。臨床剖檢死雞發現鼻腔和眶下竇有粘液性分泌物流出，嚴重者眶下竇含有大量干酪樣壞死物。臨床種雞群產蛋率下降30%～40%，疑似雞傳染性鼻炎感染。本研究采集臨床發病雞只的鼻腔拭子和眶下竇拭子，進行PCR擴增，對發病原因進行鑒定。結果表明該父母代種雞群發病確診為雞傳染性鼻炎感染。

1 ?材料與方法

1.1 ?采集病料 ?送檢疑似雞傳染性鼻炎病死雞，用無菌棉拭子采集典型發病雞的眶下竇和鼻腔拭子。

1.2 ?試劑 ?EasyPure Viral DNA/RNA Kit、PCR反應試劑盒、瓊脂糖、TAE均購自北京全式金生物技術有限公司;PCR引物由上海英濰捷基（上海）貿易有限公司合成。

1.3 ?樣品的采集與處理 ?分別采集病雞眶下竇和鼻腔拭子，置于1.5mL離心管中，加入1mL滅菌PBS，放置0.5h后，將棉拭子在管壁上盡量擠干，然后棄至消毒缸內。將浸過棉拭子的離心管充分搖震后，12000r/min離心5min。取上清液用于提取DNA。

1.4 ?樣品的鑒定

1.4.1 ?引物 ?參照宋敏訓等[6]發表的針對雞傳染性鼻炎aroA基因的序列進行PCR鑒別診斷，雞傳染性鼻炎上游引物：5′-TTC CGT TGC CAT TGC ACT C-3′;下游引物：5′-TTA GGC GTG AAG TAT CAG C-3′，擴增的目的片段為887bp。

1.4.2 ?DNA的提取 ?參照EasyPure Viral DNA/RNA Kit的說明書，對離心完樣品的上清液提取DNA。

1.4.3 ?目的片段的擴增 ?以提取DNA為模板，進行PCR反應。其PCR體系（25μL），見表1。

PCR反應條件為：94℃預變性2min;94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸5min，共計35個循環。最后復延伸10min。

反應結束，取5μL PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳后，于紫外光線下觀察并記錄結果。

2 ?結果

2.1 ?采集樣品傳染性鼻炎的PCR檢測結果 ?10份檢測樣品中，1、2、3、8號樣品均有887bp的擴增條帶符合預期大小，4、5號樣品為可疑感染，見圖1。初步鑒定該雞群存在傳染性鼻炎的感染。

2.2 ?臨床表現與剖檢變化 ?種雞群產蛋率下降30%～40%，發病嚴重雞舍周死淘高達2%。臨床感染雞只精神沉郁，眼瞼部腫脹，剖檢鼻腔和眶下竇有粘液性分泌物流出，嚴重者眶下竇含有大量干酪樣壞死物。眼結膜囊內有干酪樣物，見圖2～圖5。

3 ?結論

對某父母代場種雞群28周齡時疑似感染雞傳染性鼻炎，采集10份鼻腔拭子和眶下竇拭子樣品進行PCR擴增，對發病原因進行鑒定，結果有6份樣品均獲得預期大小的目的條帶。結果表明該父母代雞群發病確診為雞傳染性鼻炎感染。為今后雞傳染性鼻炎動物攻毒保護試驗的順利進行提供了良好的素材。

參考文獻：

[1] ?Y.M.Saif.禽病學[M].第十二版.北京：中國農業出版社，2012，930-939.

[2] ?吳清民.獸醫傳染病學[M].北京：中國農業大學出版社，2002：287.

[3] ?秦濤.蛋雞副嗜血桿菌病的臨床特點與防治措施[J].現代畜牧科技，2016（10）：92

[4] ?宋勤葉，張冰，周林.混合感染中雞毒支原體和副雞嗜血桿菌的分離鑒定[J].中國預防獸醫學報，2002，24（4）：280-282.

[5] ?榮光，王東勁，周漢林，等.16SrRNA在獸醫病原菌分類鑒定中的應用[J].熱帶農業科學，2009（10）：45-49.

[6] ?宋敏訓，陳小玲，牟建青，等.利用aroA基因建立雞傳染性鼻炎PCR診斷方法[J].中國獸醫科技，2001，31（10）：7-9.