乙型肝炎肝硬化病人RPR與相關因子檢測及意義

李娜

[摘要]目的 探討乙型肝炎（乙肝）肝硬化病人紅細胞寬度與血小板計數比值（RPR）、血清P選擇素（sP-selectin）、細胞間黏附分子-1（sICAM-1）、叉狀頭螺旋回轉錄因子（Foxp3）水平的變化及其意義。方法 選取慢性乙肝肝硬化病人137例（肝硬化組）、慢性乙肝病人60例（對照組），檢測兩組病人RPR、sP-selectin、sICAM-1、Foxp3水平，并按照肝硬化病人的腹水程度進行分組分析。結果 肝硬化組RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均顯著高于對照組，差異有顯著性（t=8.151～13.444，P<0.05）。肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細胞高于對照組（t=6.186，P<0.05），CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+T細胞顯著低于對照組（t=-7.348、-7.266，P<0.05）。少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化組RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，差異有統計學意義（F=18.587～29.604，P<0.05）。少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+ T細胞、CD3+CD4+CD8+ T細胞及CD3+CD8+CD25+ T細胞組間兩兩比較，差異均有統計學意義（F=11.574～18.405，P<0.05）。失代償期肝硬化病人RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均高于代償期肝硬化組，差異均有統計學意義（t=-6.084～-3.574，P<0.05）。失代償期肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細胞高于代償期病人（t=-6.084，P<0.05），CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+ T細胞顯著低于代償期肝硬化組（t=-3.574、-5.442，P<0.05）。結論 乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1水平及CD4+CD25+Foxp3+ T細胞顯著升高，并且與腹水程度有關。

[關鍵詞]肝硬化;乙型肝炎;P選擇素;細胞間黏附分子-1;叉狀頭螺旋回轉錄因子

[中圖分類號]R575.2

[文獻標志碼]A

[文章編號] 2096-5532（2019）05-0544-04

doi：10.11712/jms201905010

[開放科學（資源服務）標識碼（OSID）]

近年來，乙型肝炎（乙肝）肝硬化或者終末期肝衰竭的發生率逐漸升高，流行病學研究結果證實，乙肝肝硬化的發病率可達（262～454）/10萬[1]。臨床上乙肝肝硬化的發生能夠增加病人多器官功能衰竭的風險，導致病死率持續性上升[2]。趨化因子、炎癥因子或者免疫調控因子等均能夠導致肝臟上皮細胞的損傷，增加間質細胞成分的纖維化等，進而促進乙肝肝硬化的病情進展。紅細胞寬度與血小板計數比值（RPR）的檢測較為方便，部分研究認為RPR值能夠評估肝硬化病人的病情變化;血清P選擇素（sP-selectin）、細胞間黏附分子-1（sICAM-1）能夠通過激活趨化因子的黏附能力，提高下游炎癥因子及炎癥細胞的浸潤能力，增加其對肝小葉上皮細胞的促凋亡作用[3];叉狀頭螺旋回轉錄因子（Foxp3）是T淋巴細胞的重要調控因子，能夠通過抑制下游CD3+、CD4+、CD25+ T淋巴細胞的活性，降低病毒顆粒的清除作用，導致病情的持續性進展[4]。

上述指標的改變能夠通過影響抗原提呈細胞的活性，最終影響到T淋巴細胞的免疫功能。本文探討乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1、Foxp3的變化及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年1月—2017年1月確診的慢性乙肝肝硬化病人137例（肝硬化組），慢性乙肝病人60例（對照組）。納入標準：①乙肝、乙肝肝硬化的診斷參考中華醫學會制定的標準[5];②肝硬化的診斷依據超聲、CT檢查結果;③病人年齡19～79歲;④獲得病人的知情同意、醫學倫理委員會的批準。排除標準：①肝臟腫瘤;②其他類型的病毒性肝炎;③乙醇性肝硬化、藥物性肝硬化;④精神疾病、認知功能障礙;⑤伴有腎功能疾病、心力衰竭、肺功能疾病;⑥伴有免疫系統疾病、結核疾病。肝硬化組少量腹水（局限于肝腎間隙、腸間隙或盆腔，前后徑2～3 cm）36例，中量腹水（分布于中、下腹部，最深處約5 cm，腸管漂浮于液性暗區中，可見腸蠕動）62例，大量腹水（液性暗區分布于全部腹腔，最深處前后徑8～10 cm）39例;失代償期肝硬化104例，代償期肝硬化病人33例。肝硬化組和對照組年齡、性別、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）水平比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。見表1。

1.2 檢測指標及方法

應用MAGLUMI全自動生化分析儀及其配套試劑檢測紅細胞寬度及血小板計數，并計算RPR;采用酶聯免疫吸附法檢測sP-selectin、sICAM-1，檢測儀器為美國Bio-Bad全自動酶標儀，試劑盒購自南京建成生物工程研究所;采用流式細胞儀檢測T淋巴細胞亞群;以CD3、CD4、CD8、CD25流式抗體進行T淋巴細胞標記，采用流式細胞儀雙標及三標法進行CD4+CD25+Foxp3+T細胞、CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+T細胞檢測。

1.3 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件進行統計學分析，計量資料結果以[AKx-D]±s形式表示，數據間比較采用t檢驗或方差分析;計數資料結果比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 肝硬化組和對照組血清RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

肝硬化組RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均顯著高于對照組，差異有顯著性（t=8.151～13.444，P<0.05）。見表2。

2.2 肝硬化組和對照組外周血T細胞及其亞群的比較

肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細胞高于對照組（t=6.186，P<0.05），CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+T細胞顯著低于對照組（t=-7.348、-7.266，P<0.05）。見表3。

2.3 不同腹水量肝硬化組RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化組RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，差異有統計學意義（F=18.587～29.604，P<0.05）。見表4。

2.4 不同腹水量肝硬化病人外周血T細胞亞群的比較

少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+ T細胞、CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+T細胞組間兩兩比較，差異均有統計學意義（F=11.574～18.405，P<0.05）。見表5。

2.5 失代償期與代償期肝硬化病人RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

失代償期肝硬化病人血清RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平均高于代償期病人，差異均有統計學意義（t=-6.084 ～-3.574，P<0.05）。見表6。

2.6 失代償期與代償期肝硬化病人外周血T細胞亞群比較

失代償期肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細胞高于代償期病人（t=-6.084，P<0.05），CD3+CD4+CD8+T細胞以及CD3+CD8+CD25+T細胞顯著低于代償期病人（t=-3.574、-5.442，P<0.05）。見表7。

3 討論

乙肝肝硬化的發生主要與長期的乙肝病毒感染導致的上皮細胞損傷和間質成分的再生有關，在上皮細胞損傷基礎上，間質成分出現纖維化等病理改變，增加肝臟小葉結構重塑的風險，導致假小葉結構的形成。特別是在合并有慢性基礎性疾病的人群中，乙肝肝硬化病人的發生風險更高，終末期肝衰竭的風險也顯著上升[6]。目前，臨床上雖然應用抗纖維化藥物、抗病毒藥物等聯合治療，但乙肝肝硬化病人的病情緩解率仍然無明顯的改善，整體的預后情況也不佳[7-8]。本文研究著重探討了乙肝肝硬化病人sP-selectin、sICAM-1等指標的變化，對于揭示乙肝肝硬化的病情進展機制、乙肝肝硬化的生物學治療具有重要意義。

通過檢測紅細胞寬度及血小板數量，可以獲得RPR指標，RPR在感染性疾病、自身免疫性疾病等疾病病情評估中發揮一定的作用，其機制并不完全清楚，考慮可能與RPR指標能夠反映血小板的免疫性損傷或者紅細胞膜的炎癥性破壞等有關[9-10]。sP-selectin、sICAM-1是趨化誘導相關因子，二者不僅能夠誘導下游補體成分如C3、C4的激活，同時還能夠誘導下游中性粒細胞或者單核細胞的激活，增加炎癥細胞對于肝臟上皮組織的浸潤深度，導致間質成分代償性增生和纖維化[11];Foxp3是T淋巴細胞調控因子，能夠通過對其下游CD3+、CD4+T淋巴細胞的調控作用，降低CD3+等T淋巴細胞激活對于病毒的清除作用[12-13]。

本文研究結果顯示，肝硬化病人血清中RPR、sP-selectin、sICAM-1水平均明顯升高，提示三者均能夠影響肝硬化的發生和病情的進展。薈萃分析國內外相關文獻，認為其主要與下列幾方面的因素有關：①RPR上升能夠加劇血小板免疫性損傷的發生風險，導致凝血功能的紊亂;②sP-selectin、sICAM-1水平上升能夠誘導下游IL-6或者腫瘤壞死因子活化，促進其對肝臟小葉上皮細胞膜的損傷，導致線粒體功能異常、ATP利用障礙，并且增加了間質成分膠原纖維再生的風險。王烈等[11]通過對72例肝硬化病人的血清學資料分析結果提示，肝硬化病人血清sICAM-1水平平均升高25%以上，同時在肝硬化較為明顯、肝功能惡化較為嚴重的病人sICAM-1水平進一步升高。有研究顯示，肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+T細胞明顯升高，抑制下游的CD3+CD4+CD8+T細胞及CD3+CD8+CD25+T淋巴細胞的活性，導致其表達數量的下降[12]。本文研究結果與其一致，提示Foxp3+T細胞在調控肝硬化免疫性損傷過程中發揮作用，Foxp3+T細胞升高降低了下游T淋巴細胞對乙肝病毒的清除能力，導致乙肝病毒顆粒對肝小葉上皮細胞的整合作用明顯增強[14]。本文結果還顯示，少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人的RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，提示血清學因子的表達與腹水的形成可能具有一定的關系，sP-selectin、sICAM-1等水平升高能夠加劇肝臟纖維化程度，導致肝臟門靜脈高壓進一步形成，從而促進了腹水的形成，但具體的機制仍然需要進一步探討。本文結果還顯示，腹水嚴重的肝硬化病人Foxp3表達升高，而下游CD3+、CD4+T等淋巴細胞水平降低，Foxp3誘導的T淋巴細胞免疫功能紊亂，能夠顯著促進肝硬化病人病情的進展。

綜上所述，乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1水平及CD4+CD25+Foxp3+T細胞顯著升高，并且與腹水增加有關。

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（本文編輯 黃建鄉）