UPLC-Q-TOF-MS法鑒定消腫止痛液有效部位的化學成分

王銀潔 劉本臣 劉軍 莫家欣 胡安琪 劉嘉琪 馮倩儀 宮凱敏

中圖分類號 R284.2 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）23-3232-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.23.12

摘 要 目的：分析消腫止痛液有效部位的化學成分，為闡明其藥效物質基礎及將其二次開發為軟膏制劑提供依據。方法：采用超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質譜聯用（UPLC-Q-TOF-MS）法對消腫止痛液有效部位（經D101大孔樹脂分離得到的40%乙醇洗脫部位）進行成分分析。色譜條件為采用Hypersil GOLD aQ C18色譜柱，以0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）為流動相進行梯度洗脫，流速0.4 mL/min，進樣量4 μL，柱溫30 ℃;質譜條件為采用電噴霧離子源（ESI）在正/負離子掃描模式（ESI+/ESI-）下進行檢測，掃描范圍100～2 000 Da，碰撞能量45/-45 eV，擴展碰撞器能量10/15 eV。獲得圖譜后收集化合物的精確分子量、保留時間和多級碎片離子信息，通過與對照品質譜信息及參考文獻比對進行化學成分鑒定。結果：共鑒定出48個化合物，在ESI+、ESI-檢測模式下分別鑒定出9、39個。其中，酚酸類成分10個、苯丙素類成分8個、蒽醌類成分9個、黃酮類成分3個、生物堿類成分7個、鞣質類成分5個、其他類成分6個。結論：UPLC-Q-TOF-MS法可快速、高效、準確地鑒定消腫止痛液有效部位的化學成分，該部位的主要化學成分為酚酸類、苯丙素類、蒽醌類、生物堿類和鞣質類。

關鍵詞 消腫止痛液;有效部位;超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質譜聯用法;化學成分;鑒定

Identification of Chemical Components in Active Fraction of Xiaozhong Zhitong Lotion by UPLC-Q-TOF- MS

WANG Yinjie1，2，LIU Benchen1，LIU Jun1，MO Jiaxin2，HU Anqi2，LIU Jiaqi2，FENG Qianyi2，GONG Kaimin1 ? ? ? ? ? （1.Preparation Center， Yinchuan Hospital of TCM， Yinchuan 750001， China;2.School of TCM， Guangzhou University of TCM， Guangzhou 510006， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To analyze chemical components in active fraction of Xiaozhong zhitong lotion， to clarify the material basis of its efficacy， and to provide reference for the second development of ointment preparation. METHODS： UPLC-Q-TOF-MS was adopted to analyze the chemical components of active fraction （40% ethanol elution site separated by D101 macroporous resin） of Xiaozhong zhitong lotion. The determination was performed on Hypersil GOLD aQ C18 column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid acetonitrile （A）-0.1% formic acid water （B） （gradient elution） at the flow rate of 0.4 ? ? ? mL/min. The sample size was 4 μL， and the column temperature was 30 ℃. The condition of mass spectrometry was ESI detection in positive and negative scanning ion mode （ESI+/ESI-）. The scanning range was 100-2 000 Da. The collision energy was 45/-45 eV， and the energy of the extended collider was 10/15 eV. The accurate molecular weight， retention time and multi-stage fragment ion information of the compounds were collected after obtaining the chromatogram， and the chemical components were identified by comparing with the mass spectrum information of reference materials and references. RESULTS： A total of 48 compounds were identified， and 9 and 39 compounds were identified under ESI+/ESI- ion mode， mainly including 10 phenolic acids， 8 ?phenylpropanoids， 9 anthraquinones， 3 flavones， 7 alkaloids， 5 tannins and 6 other categories. CONCLUSIONS： UPLC-Q-TOF- MS method is rapid， efficient and accurate for identify chemical components from active fraction of Xiaozhong zhitong lotion. Main chemical components of the active fraction are phenolic acids， phenylpropanoids， anthraquinones， alkaloids and tannins.

KEYWORDS ? ?Xiaozhong zhitong lotion; Active fraction; UPLC-Q-TOF-MS; Chemical components; Identification

消腫止痛液是銀川市中醫醫院（后文簡稱“我院”）的院內制劑（批準文號：寧藥制字Z20140005），主要由大黃、黃柏、地榆、五倍子等八味中藥組成，用于各種原因所致痔瘡初期及外痔、混合痔、肛裂術后的消腫、止痛等，其治療肛腸疾病術后疼痛、水腫的臨床總有效率達93.33%[1]。本課題組前期通過動物實驗篩選得到了該制劑具有消腫、促潰瘍面愈合、鎮痛的有效部位（經D101大孔樹脂分離得到的40%乙醇洗脫部位）[2]，本研究擬采用超高液相色譜-四級桿-飛行時間質譜聯用（UPLC-Q-TOF-MS）法對消腫止痛液有效部位的化學成分進行鑒定，以揭示該制劑的藥效物質基礎，為該制劑二次開發為軟膏制劑提供依據，同時也為中藥新藥開發奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

Triple-TOFTM 5600質譜儀（美國AB Sciex公司）;LC-30AD超高液相色譜儀（日本島津公司）;XA105電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

消腫止痛液有效部位提取物（由我院制劑室自制，批號：20171025，純度：每1 g提取物相當于14.78 g生藥）;沒食子酸對照品（批號：110831-201605，純度：≥98%）、小檗堿對照品（批號：110713-201212，純度：≥98%）、大黃酸對照品（批號：110886-201612，純度：≥98%）、大黃素對照品（批號：110756-201512，純度：≥98%）均購于中國食品藥品檢定研究院;阿魏酸對照品（批號：wkq17112004，純度：≥98%）、蘆丁對照品（批號：wkq19010203，純度：≥98%）均購于四川省維克奇生物科技有限公司;乙腈（德國默克公司，色譜純）;甲酸（美國Fisher公司，色譜純）;水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜與MS條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil GOLD aQ C18（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）;流動相：0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫（1～2 min，95%B;2～4 min，90%→85%B;4～6 min，85%→80%B;6～8 min，80%→75%B;8～15 min，75%→65%B;15～20 min，65%→55%B;20～22 min，55%→5%B;22～23 min，5%→0%B;23～24 min，0%→95%B;24～25 min，95%B），流速：0.4 ?mL/min;柱溫：30 ℃;進樣量：4 μL。

2.1.2 MS條件 采用電噴霧離子源（ESI），在信息關聯（IDA）模式下進行正/負離子（ESI+/ESI-）掃描;離子噴霧電壓為5 500/-4 500 V，去簇電壓為100/-100 V;去溶劑溫度為500 ℃;霧化氣為氮氣，霧化氣壓、輔助加熱氣壓和氣簾氣壓分別為55、55和35 psi;掃描范圍為100～2 000 Da;碰撞能量為45/-45 eV;擴展碰撞器能量為10/15 eV。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 精密稱取消腫止痛液有效部位干粉樣品0.023 1 g，置于50 mL量瓶中，以50%甲醇超聲（頻率：40 kHz，功率：500 W）提取10 min，搖勻，濾過，經0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿、沒食子酸、大黃素、大黃酸、阿魏酸、蘆丁對照品適量，分別置于不同10 mL量瓶中，加入甲醇溶解，制備為單一對照品貯備液;分別精密量取上述貯備液適量，將其混合后加甲醇稀釋，制備成混合對照品溶液（含鹽酸小檗堿8.56 μg/mL、沒食子酸4.16 μg/mL、大黃素5.62 μg/mL、大黃酸4.26 μg/mL、阿魏酸3.23 μg/mL、蘆丁3.45 μg/mL）。

2.3 消腫止痛液有效部位化學成分的分析

首先查閱文獻資料[3-29]及相關數據庫（PubMed、Mass Bank、Chemical Book），建立組方中各味藥所含的化學成分庫信息，信息內容包括中文名、英文名、分子式、準確分子質量、結構式和藥材來源。再按“2.1”項下色譜和MS條件進樣，將化學成分信息庫導入PeakView 2.0軟件 （AB Sciex）進行目標化合物峰查找，通過精準質量數（mass error<5 ppm）對結果進行過濾，獲得匹配化合物后，解析其二級裂解碎片離子信息，進一步準確識別化學成分。結果，從該有效部位中共鑒定出了48個化學成分。在ESI-模式下響應較好，共鑒定出了39個化學成分;在ESI+模式下鑒定出了9個化學成分。消腫止痛液有效部位總離子流圖見圖1，化學成分鑒定結果見表1。

2.4 化合物的裂解特征分析

2.4.1 酚酸類 酚酸類化合物是指同一苯環上有若干個酚性羥基的一類化合物。本研究從消腫止痛液有效部位中共鑒定出了10個酚酸類化合物，分別是沒食子酸、沒食子酸乙酯、對香豆酸、沒食子酸兒茶素、兒茶素沒食子酸酯、3，3′-O-二甲基鞣花酸-硫酸酯、3，3′4′-O-三甲基鞣花酸-4-O-硫酸酯、對羥基苯甲酸、3，4′-O-二甲基鞣花酸和3，3′4′-O-三甲基鞣花酸。此類化合物在MS掃描過程中多以[M-H]-的準分子離子峰形式存在，高能碰撞下易產生[M-H-H2O]-或[M-H-CO2]-中性丟失的碎片離子?，F以峰2和峰40為例進行裂解規律分析。

峰2的保留時間為0.84 min，ESI-模式下的準分子離子峰為m/z 169.018 8[M-H]-，二級碎片信息主要有 ?m/z 125.024 8[M-H-CO2]-、m/z 107.014 7[M-H-CO2-H2O]-，為脫去中性分子二氧化碳與相繼脫去一分子水的碎片離子。可知該化合物的分子式為C7H6O5，其相對分子質量為170.021 5;該峰相對分子質量的理論值為169.014 25，實測值為169.014 82，誤差為3.37 ppm。參考文獻[3-4]，并與沒食子酸對照品二級碎片離子信息進行比對，可判斷該化合物為沒食子酸。沒食子酸的裂解途徑見圖2，峰2和沒食子酸對照品的MS/MS圖見圖3。

峰40的保留時間為10.97 min，ESI-模式下的準分子離子峰為m/z 329.030 4[M-H]-，脫去一分子二氧化碳形成m/z 285.003 1[M-H-CO2]-，相繼脫去一分子亞甲基形成m/z 270.987 6[M-H-CO2- CH2]-，再脫去一分子羰基形成m/z 242.992 6[M-H-CO2-CH2-CO]-;另一裂解途徑為準分子離子峰脫去兩分子甲基得到特征離子m/z 298.983 3[M-H-2CH3]-。該化合物的分子式為C16H10O8，其相對分子質量為330.037 6，該峰相對分子質量的理論值為329.030 29，實測值329.030 34，誤差為0.16 ppm。參考文獻[3，25]，可判斷該化合物為3，4′-O-二甲基鞣花酸。3，4′-O-二甲基鞣花酸的MS裂解途徑見圖4，峰40的MS/MS圖見圖5。

2.4.2 苯丙素類 苯丙素類化合物是指基本母核具有一個或幾個C6-C3單元的天然有機化合物類群，狹義而言，苯丙素類化合物是指簡單苯丙素類、香豆素類、木質素類化合物。本研究從消腫止痛有效部位中共鑒定出了8個苯丙素類化合物，分別是新綠原酸、葡萄糖基丁香酸、阿魏?？鼘幩?、綠原酸、阿魏酸、3，5′-二咖啡酰奎寧酸、花椒毒素和九里香酮，其中新綠原酸和綠原酸為同分異構體（通過Chem Draw14.0軟件計算化合物的脂水分配系數，根據不同脂水分配系數保留時間不同指認同分異構體，其與參考文獻中兩個化合物保留時間前后順序一致[6]）。由于該類化合物一般具有多個和芳環連接的氧原子、羥基、甲氧基，故其質譜經常出現一系列連續失去羰基、羥基、 水、甲基或甲氧基的碎片離子峰，現以峰10為例進行裂解規律分析。

峰10的保留時間為6.49 min，ESI+模式下準分子離子峰為m/z 193.048 8[M-H]-，脫去一分子甲基形成m/z 178.024 8[M-H-CH3]-，相繼脫去一分子二氧化碳形成 m/z 134.035 8[M-H-CH3-CO2]-。該化合物的分子式為C10H10O4，其相對分子質量為194.05 79;該峰相對分子質量的實測值為193.050 48，相對分子質量的理論值為193.050 63，誤差為-0.79 ppm。參考文獻[8，28]，并與阿魏酸對照品二級碎片離子信息進行比對，可判斷該化合物為阿魏酸。阿魏酸的MS裂解途徑見圖6，峰10和阿魏酸對照品的MS/MS圖見圖7。

2.4.3 蒽醌類 蒽醌類化合物是指具有醌式結構的化學成分，天然蒽醌以9，10-蒽醌最為常見，整個分子形成共軛體系，C9、C10又處于最高氧化水平，比較穩定。在本研究中共從消腫止痛液有效部位鑒定出了9個蒽醌類化合物，分別是蘆薈大黃素、大黃素-1-O-糖苷、大黃酸-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃酚-8-O-β-D吡喃葡萄糖苷、蘆薈苷、蘆薈大黃素-8-O-（6′-O-乙酰）-糖苷。蒽醌母核上常有羥基、羥甲基、甲基、甲氧基和羧酸取代，游離蒽醌的MS裂解依次脫去兩分子羰基?，F以峰47和峰48為例進行裂解規律分析。

峰47的保留時間為16.83 min，ESI-模式下的準分子離子峰為m/z 283.025 5[M-H]-，其脫去一分子二氧化碳形成m/z 239.034 9[M-H-CO2]-，再連續2次脫去一分子羰基分別形成m/z 211.039 8[M-H-CO2-CO]-、m/z 183.044 8[M-H-CO2-2CO]-。該化合物的分子式為C15H8O6，其相對分子質量為284.032 1;該峰相對分子質量的理論值為283.024 81，實測值為283.025 03，誤差為0.78 ppm。參考文獻[9，24]，并與大黃酸對照品二級碎片離子信息進行比對，可判斷該化合物為大黃酸。大黃酸的MS裂解途徑見圖8，峰47和大黃酸對照品的MS/MS圖見圖9。

峰48的保留時間為21.34 min，ESI-模式下的準分子離子峰為m/z 269.043 6[M-H]-，脫去一分子羰基得到特征離子m/z 241.049 1[M-H-CO]-;二級碎片信息主要有準分子離子峰脫去一分子二氧化碳形成m/z 225.053 9[M-H-CO2]-，相繼脫去一分子甲基形成m/z 210.031 4[M-H-CO2-CH3]-，再脫去一分子羰基形成m/z182.036 7[M-H-CO2-CH3-CO]-。該化合物的分子式為C15H10O5，其相對分子質量為270.052 8;該峰相對分子質量的理論值為269.045 55，實測值為269.045 80，誤差為0.96 ppm。參考文獻[7，22]，并與大黃素對照品二級碎片離子信息進行比對，可判斷該化合物為大黃素。大黃素的MS裂解途徑見圖10，峰48和大黃素對照品的MS/MS圖見圖11。

2.4.4 黃酮類 黃酮類化合物是指基本母核為2-苯基色原酮的一類化合物。本研究從消腫止痛液有效部位中共鑒定出了3個黃酮類化合物，分別是山萘酚、蘆丁、金絲桃苷。黃酮類質譜特征性強，除分子離子峰外，會失去甲基、羰基等碎片離子峰，現以峰16為例進行裂解規律分析。

峰16的保留時間為6.72 min，ESI-模式下的準分子離子峰為m/z 609.144 7[M-H]-，其脫去一分子蕓香糖形成黃酮類特征基本母核離子碎片m/z 301.033 1[M-H- C12H20O9-C6H10O4]-，以及其他二級碎片離子m/z 178.997 7 [M-H-C6H10O5-C6H10O4-C7H6O2]-、m/z 151.003 1[M-H-C6H10O5- C6H10O4-C8H6O3]-。該化合物的分子式為C27H30O16，相對分子質量為610.153 4;該峰相對分子質量的理論值為609.146 57，實測值為609.146 11，誤差為0.75 ppm。參考文獻[12，29]，并與蘆丁對照品二級碎片離子信息進行比對，可判斷該化合物為蘆丁。蘆丁的MS裂解途徑見圖12，峰16和蘆丁對照品的MS/MS圖見圖13。

2.4.5 生物堿類 生物堿是一類含氮有機化合物，多具有較強的生理活性。本研究共鑒定出了7個生物堿類化合物，分別是四氫藥根堿、蓮心季銨堿、益母草堿、四氫帕馬丁、益母草堿衍生物、藥根堿、小檗堿。生物堿主要為芳香體系組成，環系多、分子結構緊密，裂解困難，一般看不到由骨架裂解產生的特征離子，裂解主要發生在取代基或側鏈上，現以峰41為例進行裂解規律分析。

峰41的保留時間為12.07 min，ESI+模式下的準分子離子峰為m/z 337.124 0[M+H]+，其脫去一分子甲基形成m/z 321.092 3[M+H-CH3-H]+，相繼脫去一分子羰基形成m/z 293.097 5[M+H-CH3-H-CO]+;另一裂解途徑為準分子離子峰m/z 337.124 0[M+H]+ 脫去兩分子甲基和一分子羰基形成m/z 279.081 9[M+H-2CH3-CO]+。該化合物的分子式為C20H18NO4，相對分子質量為336.123 6，該峰相對分子質量的理論值為337.130 86，實測值為337.129 22，誤差為-4.87 ppm。參考文獻[4-5]，并與小檗堿對照品碎片離子進行對比，可判斷該化合物為小檗堿。小檗堿的MS裂解途徑見圖14，峰41和小檗堿對照品的MS/MS圖見圖15。

2.4.6 鞣質 鞣質是由沒食子酸（或其聚合物）的葡萄糖（及其他多元醇）酯、黃烷醇及其衍生物的聚合物以及兩者混合共同組成的植物多元酚，分為水解鞣質、縮合鞣質和復合鞣質?？伤怊焚|的裂解特點為連續丟失m/z為152的基團（沒食子?；30]，m/z為169和125的是沒食子酸的裂解碎片離子。根據這些裂解特點結合文獻[8]，本研究共鑒定出了2，3-O-二沒食子酰葡萄糖苷、三沒食子酸酰基葡萄糖或異構體、2，3，4，6-O-四沒食子?；?β-D-葡萄糖苷、1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖、2，3，4，6-O-四沒食子?；?β-D-甲基吡喃葡萄糖苷5個鞣質類化合物。

2.4.7 其他類 此外，本研究還從消腫止痛液有效部位中鑒定出了2個苯丁酮類化合物（蓮花掌苷、異蓮花掌苷）和白藜蘆醇-4′-O-β-D-（6″-O-沒食子酰）葡萄糖苷、對羰基苯甲酸乙酯、三棱酸以及決明松-8-O-β-吡喃葡萄糖苷。

3 討論

中藥復方的有效成分是復雜的多成分組合，即多種成分共同發揮作用。本研究在前期藥效學研究的基礎上，對篩選得到的有效部位采用UPLC-Q-TOF-MS法進行了全面分析。該法具有良好的分離能力且靈敏度和準確性高，目前已廣泛應用于中藥或復雜未知物的鑒定及定量分析。

本研究在選擇色譜柱時，考察了ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）和Hypersil GOLD aQ C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）的分離效果。結果，若以ACQUITY UPLC BEH C18為色譜柱，在流速為0.4 mL/min時，柱壓較高;而以Hypersil GOLD aQ C18為色譜柱時柱壓較低且分離度較好。故最終選擇Hypersil GOLD aQ C18色譜柱進行分析。在優化色譜條件時，比較了流動相乙腈-水和0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水，結果采用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水作為流動相時響應值和峰形均較好。

本研究選用ESI+、ESI-兩種模式對樣品進行分析，結果樣品在ESI-模式下MS響應較好。通過目標篩選，參考特征裂解途徑以及相關文獻，共鑒定出了48個化合物，其相對分子質量理論值與實測值的誤差均小于5 ppm。其中，酚酸類成分10個、苯丙素類成分8個、蒽醌類成分9個、黃酮類成分3個、生物堿類成分7個、鞣質成分5個，其他類成分6個。以上鑒定到的化學成分具有多方面藥理活性。如酚酸類化學成分具有抗氧化、抗菌、消炎等活性[31];苯丙素類成分花椒毒素、九里香酮具有抗血小板聚集活性作用[32];小檗堿具有抗利尿和抗菌作用[33];蒽醌類成分大黃酸是大黃中的主要成分之一，具有抗炎、抗腫瘤、抗糖尿病腎病、抗病毒、抑菌等活性[34]，大黃素具有抗炎、抗菌、抗腫瘤等作用[35];黃酮類成分具有抗心肌缺血、促進心肌收縮力、興奮子宮、抗氧化及抑菌等作用[36]。鞣質成分主要來自地榆和大黃，地榆鞣質具有止血、抑菌、抗炎等作用，其止血成分主要為鞣花鞣質[37]，而大黃鞣質具有涼血止血功效[38]。以上不同種類、不同來源的活性成分，通過協同或互補的作用發揮消腫、止痛、抗潰瘍愈合的功效，起到多通路、多靶點治療作用。

綜上，本研究基于UPLC-Q-TOF-MS法對消腫止痛液有效部位中的化學成分進行了快速、準確識別，明確了消腫止痛液消腫、止痛、抗潰瘍愈合的藥效成分，為促進醫院制劑消腫止痛軟膏的二次開發以及為中藥新藥的研發奠定了基礎。

參考文獻

[ 1 ] 余軍，范嫻嫻.消腫止痛液治療肛腸疾病術后疼痛水腫60例療效觀察[J].河北中醫，2012，34（10）：1474-1475.

[ 2 ] 王銀潔，劉本臣，劉軍，等.消腫止痛液消腫、促潰瘍面愈合、鎮痛的有效部位篩選[J].中國藥房，2019，30（13）：1080-1086.

[ 3 ] 許維桐，霍志鵬，雷磊，等. HPLC-IT-TOF/MS分析地榆水煎液的化學成分群[J].中草藥，2018，49（6）：1277-1288.

[ 4 ] 楊賢英，李金花，段寶忠，等.五倍子抑制流感病毒神經氨酸酶活性及活性部位的UPLC-Q-TOF-MS分析[J].中國實驗方劑學雜志，2017，23（16）：68-72.

[ 5 ] 李媛.黃柏、黃連體內外成分對比研究[D].哈爾濱：黑龍江中醫藥大學，2013.

[ 6 ] 王宇卿，耿榕徽，張須學.采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術分析宛艾化學成分[J].中國醫院藥學雜志，2018，38（5）：500-505.

[ 7 ] LI YB，ZHANG TJ，ZHANG XL，et al. Chemical fingerprint analysis of Phellodendri Amurensis Cortex by ultra performance LC/Q-TOF-MS methods combined with chemometrics[J]. J Sep Sci，2010，33（21）：3347-3353.

[ 8 ] 王晴，盧志威，劉月紅，等. UPLC-Q-TOF/MSE結合診斷離子過濾方法快速分析大黃中酚類成分[J].中國中藥雜志，2017，42（10）：1922-1931.

[ 9 ] 劉夢嬌，王云，李玲云，等.三黃片化學成分的UPLC-Q- TOF-MS/MS快速鑒定分析[J].中國中藥雜志，2017，42（9）：1685-1692.

[10] 崔培珅.大黃蒽醌ESI-ITMSn質譜行為的量子化學輔助研究[D].佳木斯：佳木斯大學，2013.

[11] 高亮亮.唐古特大黃、藥用大黃和掌葉大黃的化學成分和生物活性研究[D].北京：北京協和醫學院，2012.

[12] 龐漢青.基于藥對作用的新生化顆粒配伍效應與物質基礎研究[D].南京：南京中醫藥大學，2017.

[13] WANG GY，XU LW，SHI YP. Rapid analysis of multiple components in Radix Et Rhizoma Rhei using ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Acta Chromatogr，2011，23 （4）：653-672.

[14] 林敏婷，張超，唐思麗，等. LC/MS/MS鑒定蓮子心生物堿在Caco-2細胞中的代謝產物[J].中藥材，2015，38（12）：2531-2534.

[15] 劉冰松，陳應林. LC-MS/MS法測定復方益母草膏中有效成分的含量[J].沈陽藥科大學學報，2016，33（4）：303- 306.

[16] 來進君.唐古特大黃蒽醌提取工藝、水提部位化學成分分離及抑菌活性的研究[D].西寧：青海師范大學，2017.

[17] 王冬梅，林森森，鄭司浩，等.五倍子抑制表皮生長因子受體活性及活性部位的UPLC/Q-TOF-MS分析[J].中草藥，2013，44（18）：2515-2519.

[18] 王旭光，楊洪軍，王松松，等.基于LTQ-Orbitrap的白芷中5種呋喃香豆素類化合物的質譜裂解規律研究[J].中國中藥雜志，2015，40（7）：1334-1341.

[19] 何成軍.附子化學成分研究及益母草注射液化學成分研究[D].成都：成都中醫藥大學，2014.

[20] 熊亮，彭成.基于中藥質量標志物（Q-Marker）的基本條件研究益母草和趕黃草的Q-Marker[J].中草藥，2016，47（13）：2212-2220.

[21] 邱昆成.藥對知母-黃柏的降糖作用及基于液質聯用技術的化學物質研究[D].廣州：廣州中醫藥大學，2016.

[22] 陳瑤.關黃柏藥材化學特性與環境因子的相關性研究[D].北京：北京協和醫學院，2017.

[23] 張青青，辛欣，楊尚仁，等.復方梔黃提取物化學成分的快速定性分析[J].沈陽藥科大學學報，2017，34（5）：389-395.

[24] 馬冰.赤芍、大黃和黃柏中化學成分提取分離及結構鑒定研究[D].長春：長春師范大學，2014.

[25] 郭群，袁橋玉.高效液相色譜-電噴霧質譜聯用分析喜樹果鞣花酸類成分[J].林業科技，2012，37（1）：21-23.

[26] 任曉蕾，霍金海，孫國東，等.UPLC-Q-TOF-MS法分析防風中香豆素類化學成分[J].中國藥房，2019，30（3）：349- 354.

[27] 元超，王鴻發，胡璇，等.UPLC-Q-TOF-MSE技術快速定性艾納香抗菌有效部位的化學成分[J].天然產物研究與開發，2018，30（11）：1904-1912.

[28] 秦偉瀚，冉繼春，葉良紅，等. UPLC-Q/TOF法同時定性定量分析滇芹藥材中主要化學成分[J].中草藥，2018，49（15）：3576-3582.

[29] 伍明江，吳曉磊，張德芹，等. UPLC-Q-TOF/MS鑒定蘆丁在大鼠體內的代謝產物[J].中國實驗方劑學雜志，2017，23（17）：91-97.

[30] 馬尚智，秦惠玉，龍飛，等.沒食子多酚類化合物的鑒定及其在UPLC-MS/MS中的裂解規律研究[J].中草藥，2017，48（22）：4632-4638.

[31] 林鵬飛，賈小舟，祁燕，等.酚酸類化合物研究進展[J].廣東化工，2017，44（1）：50-52.

[32] 楊槐，周勤梅，彭成，等.益母草香豆素類化學成分與抗血小板聚集活性[J].中國中藥雜志，2014，39（22）：4356- 4359.

[33] 李先寬，馮杉，鄭艷超，等.黃柏與關黃柏的化學成分及生物活性研究進展[J].藥物評價研究，2019，42（5）：1033- 1037.

[34] 陳秋荷，皮榮標，陳景考.大黃酸及其衍生物：合成與藥理作用研究進展[J].藥學研究，2016，35（3）：161-167.

[35] 陳艷琰，唐于平，陳嘉倩，等.大黃資源化學研究進展與利用策略[J].中草藥，2018，49（21）：5170-5178.

[36] 李聘，陸治名，張百霞.益母草中黃酮類成分的研究進展[J].醫學研究與教育，2017，34（4）：63-68.

[37] 陳鵬，周本宏.地榆鞣質的化學成分及生物活性研究進展[J].中國藥師，2018，21（7）：1253-1258.

[38] 王亦君，馮舒涵，程錦堂，等.大黃蒽醌類化學成分和藥理作用研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2018，24（13）：227-234.

（收稿日期：2019-08-12 修回日期：2019-09-26）

（編輯：林 靜）