結核性胸膜炎患者胸腔積液中TLR2、TLR4水平變化及臨床意義

葉濤生　張嬌紅　張培澤　曾旋　徐宇翔　李敏

[摘要] 目的 探討結核性胸膜炎患者胸腔積液中Toll樣受體2（TLR2）、Toll樣受體4（TLR4）水平變化及臨床意義。 方法 選取2016年1月～2018年12月深圳市第三人民醫院（以下簡稱“我院”）收治的102例結核性胸膜炎患者（A組），另選取80例惡性胸腔積液患者（B組）、62例細菌性肺炎患者（C組），采用酶聯免疫吸附試驗檢測TLR2、TLR4、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、單核細胞趨化蛋白-2（MCP-2）、基質金屬蛋白酶-1（MMP-1）水平，采用Pearson相關性分析TLR2、TLR4與TNF-α、MCP-2、MMP-1的相關性，采用受試者工作特征曲線（ROC）分析TLR2、TLR4的診斷價值。 結果 A組TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平均高于B組、C組（P < 0.05）。Pearson相關系數分析可知，結核性胸膜炎患者TLR2與TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈正相關（P < 0.05），而TLR4與TNF-α、MCP-2、MMP-1均無相關性（P > 0.05）。結核性胸膜炎患者TLR2與TLR4呈顯著正相關（P < 0.05）。TLR2診斷結核性胸膜炎的曲線下面積為0.724，顯著高于TLR4的曲線下面積0.518（P < 0.05）。結論 結核性胸膜炎患者TLR2水平呈現明顯升高趨勢，且與胸腔積液中TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈顯著正相關，提示其可能參與著結核性胸膜炎病情的發生發展，對結核性胸膜炎有較好的診斷價值。

[關鍵詞] 結核性胸膜炎;胸腔積液;TLR2;TLR4;臨床意義

[中圖分類號] R52? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）06（b）-0117-04

Changes and clinical significance of TLR2 and TLR4 levels in pleural effusion of patients with tuberculous pleurisy

YE Taosheng? ?ZHANG Jiaohong? ?ZHANG Peize? ?ZENG Xuan? ?XU Yuxiang? ?LI Min

Respiratory Endoscopy Room， the Third People′s Hospital of Shenzhen， Guangdong Province， Shenzhen? ?518000， China

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of Toll-like receptor 2 （TLR2） and Toll-like receptor 4 （TLR4） levels in pleural effusion of patients with tuberculous pleurisy. Methods From January 2016 to December 2018， 102 patients with tuberculous pleurisy who were admitted to the Third People′s Hospital of Shenzhen （"our hospital" for short） were selected（group A）， and 80 patients with malignant pleural effusion （group B） and 62 patients with bacterial pneumonia（group C）. The enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect all the TLR2 and TLR4， tumor necrosis factor alpha （TNF-α）， monocyte chemotactic protein-2 （MCP-2）， matrix metalloproteinase 1 （MMP-1） levels， Pearson correlation coefficient method was used to analyze correlation of? TLR2， TLR4 and TNF-α， MCP-2， MMP 1; the receiver-operating characteristic curve （ROC） analysis was adopted to assess the diagnostic value of TLR2 and TLR4. Results The levels of TLR2， TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in group A were higher than those in group B and group C （P < 0.05）. Pearson correlation coefficient analysis showed that TLR2 was positively correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in tuberculous pleurisy （P < 0.05）， while TLR4 was not correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 （P > 0.05）. TLR2 was positively correlated with TLR4 in patients with tuberculous pleurisy （P < 0.05）. The area under the curve of TLR2 in diagnosis of tuberculous pleurisy was 0.724， which was significantly higher than that under the curve of TLR4 （P < 0.05）. Conclusion TLR2 levels in tuberculous pleurisy patients show a significant upward trend， and are significantly positively correlated with TNF-α， MCP-2 and MMP-1 in pleural effusion， which may be involved in the occurrence and development of tuberculous pleurisy and have a better diagnostic value for tuberculous pleurisy.

[Key words] Tuberculous pleurisy; Pleural effusion; TLR2; TLR4; Clinical significance

結核性胸膜炎主要是由于結核分枝桿菌及其代謝產物、自溶產物進入超敏感機體的胸膜腔而引起的胸膜炎癥[1]。該病臨床主要表現為畏寒、盜汗、呼吸困難等癥狀[2-3]。通過檢測胸腔積液中的結核分枝桿菌是診斷結核性胸膜炎的金標準，但由于胸腔積液結核分枝桿菌培養技術存在敏感度低等缺點，使其臨床應用有一定的局限性[4-5]。隨著對疾病研究機制的深入，分子生物學、免疫學等逐漸應用于結核性胸膜炎的檢測中，Toll樣受體（TLR）是天然免疫類蛋白分子，可介導先天免疫和病原體配體的免疫應答，迄今為止，已發現11種人類Toll樣受體，可識別源于病毒、細菌、真菌以及寄生蟲的多種分子[6-7]。其中TLR2可識別大部分已發現的PAMP結構，包括分支桿菌、革蘭陽性菌以及多種微生物等，TLR4可識別多數細菌的脂多糖、革蘭陰性菌外模的成分[8-9]。可見TLR2、TLR4與細菌感染關系密切，現臨床有關TLR2、TLR4水平變化與結核性胸膜炎的關系報道尚不多見，就此展開分析，以期為臨床結核性胸膜炎早期診斷提供數據支撐。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取廣東省深圳市第三人民醫院（以下簡稱“我院”）于2016年1月～2018年12月間接收的102例結核性胸膜炎患者作為A組，納入標準：①均符合《現代結核學》[10]中的相關診斷標準;②胸腔積液樣本和/或痰樣本中培養到結核分枝桿菌;③年齡18～70歲;④知情次研究且已簽署同意書。排除標準：①合并嚴重心肝腎等功能異常者;②妊娠及哺乳期婦女;③近期進行過胸部侵入性檢查或胸部手術者;④病毒、真菌等引起的胸膜感染者;⑤近期接受過糖皮質激素、免疫抑制劑及抗腫瘤治療者。其中A組男66例，女36例;年齡18～70歲，平均（41.68±5.34）歲。另選取同期我院收治的惡性胸腔積液患者80例為B組和62例細菌性肺炎患者作為C組。B組男52例，女28例;年齡19～69歲，平均（41.73±6.25）歲。C組男41例，女21例;年齡20～70歲，平均（42.06±5.31）歲。三組一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性，本研究已獲取我院醫學倫理學委員會批準。

1.2方法

入院后均通過胸腔穿刺術采集胸腔積液4 mL，加入肝素抗凝，經1200 r/min離心6 min，離心半徑7 cm，取上清液，置于-80℃冰箱中待測。采用酶聯免疫吸附試驗檢測TLR2、TLR4、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、單核細胞趨化蛋白-2（MCP-2）、基質金屬蛋白酶-1（MMP-1）水平，試劑盒購自武漢華美生物科技有限公司，嚴格遵守說明書進行操作。

1.3 統計學方法

所有數據采用SPSS 25.0對所得數據進行統計學分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，多組比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗;計數資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Pearson相關系數法分析指標間的相關性，采用受試者工作特征曲線（ROC）分析TLR2、TLR4的診斷價值。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組TLR2、TLR4、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平比較

三組TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平整體比較，差異有統計學意義（P < 0.05），而三組TLR4整體比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。A組TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平均高于B組、C組（P < 0.05），而B組、C組TLR2、TNF-α、MCP-2、MMP-1水平比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 結核性胸膜炎患者TLR2、TLR4與TNF-α、MCP-2、MMP-1的關系

Pearson相關性分析可知，結核性胸膜炎患者TLR2與TNF-α、MCP-2、MMP-1均呈顯著正相關（P < 0.05），而TLR4與TNF-α、MCP-2、MMP-1均無相關性（P > 0.05）。見表2。

2.3 結核性胸膜炎患者TLR2與TLR4的關系

Pearson相關性分析可知，結核性胸膜炎患者TLR2與TLR4呈正相關（r = 0.547，P = 0.000）。

2.4 TLR2、TLR4對結核性胸膜炎患者的診斷價值

將TLR2、TLR4指標數據劃分成若干組段，建立對結核性胸膜炎的診斷價值的ROC分析模型。ROC曲線分析顯示，TLR2診斷結核性胸膜炎的曲線下面積為0.724（95%CI：0.627～0.821，P < 0.05），約登指數最大值為0.507，此時其預測患者結核性胸膜炎的特異性、敏感度分別為52.17%、79.43%。TLR4診斷結核性胸膜炎的曲線下面積為0.518（95%CI：0.406～0.613，P < 0.05），約登指數最大值為0.203，此時其預測患者結核性胸膜炎的特異性、敏感度分別為81.13%、26.49%。TLR2診斷結核性胸膜炎患者的診斷價值明顯大于TLR4（Z = 2.646，P = 0.008）。見圖1。

TLR2：Toll樣受體2;TLR4：Toll樣受體4

3 討論

胸膜腔是胸壁與肺之間的一個腔隙，正常情況下腔隙之間存在少量液體，且處于動態平衡。當胸膜腔內液體失衡時，易產生胸腔積液[11-12]。臨床胸腔積液較為常見，但是有關胸腔積液的病因診斷，特別是結核性胸腔積液，由于缺乏特異性的臨床表現、實驗室檢查以及影響學特征等，較難作出診斷結果[13]。此外，胸腔鏡胸膜活檢術費用高，創傷大，臨床應用受限，多方面原因導致結核性胸膜炎早期臨床診斷困難，易延誤最佳治療時機[14]。發病過程中，可導致胸膜通透性增加，導致淋巴細胞的局部募集、富含蛋白的液體的累積并形成滲出性胸腔積液[15]。通常情況下，惡性及結核性胸腔積液以淋巴細胞為主，而細菌性胸腔積液（如肺炎、膿胸等）則以中性粒細胞為主[16]。故而筆者認為通過測定這些免疫因子，并進一步分析結核性胸膜炎的發病機制，可能有助于結核性胸膜炎的早期快速診斷。

[12]? 劉安，陳余清，李偉，等.結核感染T細胞斑點試驗對結核性胸膜炎的診斷價值[J].山西醫科大學學報，2016， 47（1）：64-67.

[13]? Blagova OV，Alijeva IN，Nedostup AV，et al. Exudative-constrictive tuberculous pericarditis in combination with arthritis in cardiologist practice：thoracoscopic biopsy as a diagnosis and treatment method [J]. Ter Arkh，2018，90（9）：81-87.

[14]? 顧剛，陳秋悅，龍燕華，等.胸腔積液腺苷脫氨酶診斷結核性胸膜炎的最佳臨界值[J].山東醫藥，2018，57（7）：63-65.

[15]? 賈文青，劉瑩.T-SPOT.TB對免疫低下合并結核性胸膜炎患者的診斷價值[J].實用醫學雜志，2016，32（18）：3023-3026.

[16]? 唐曉媛，左慧敏，陳國峰，等.內科胸腔鏡治療結核性胸膜炎的意義[J].中國內鏡雜志，2018，24（7）：1-4.

[17]? Wojtkowiak-Giera A，Wandurska-Nowak E，Derda M，et al. Trichinella Spiralis：Impact on the Expression of Toll-like Receptor 4（TLR4）Gene During the Intestinal Phase of Experimental Trichinellosis [J]. J Vet Res，2018，62（4）：493-496.

[18]? 戚明，門浩，李成偉，等.TLR2和TLR4在結核性胸膜炎患者胸腔積液中的檢測[J].中國臨床研究，2018，31（11）：1508-1511.

[19]? 章志華，栗愛珍，朱桂云，等.胸腔積液中TNF-α檢測在診斷結核性胸膜炎中的應用價值[J].當代醫藥論叢，2018，16（12）：75-76.