MUC16促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移

陳永勝 賈小婷(通訊作者)

510095廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所廣州惡性腫瘤治療轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州

肺癌是全球發(fā)病率和死亡率均居于第一位的惡性腫瘤，其中40%左右肺癌患者屬于肺腺癌[1]。肺腺癌發(fā)病率和死亡率居高不下的主要原因是發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未闡明，因此探討肺腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制是臨床的重要研究課題。MUC16 屬于黏蛋白家族成員，能夠促進(jìn)多種腫瘤發(fā)生發(fā)展，且MUC16 可調(diào)控順鉑和吉西他濱的化療耐受[2]，本文擬探討其在肺腺癌中的作用。

資料與方法

材料與試劑：本次研究所用試劑和材料主要包括肺腺癌細(xì)胞H1975(中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù))、胎牛血清(美國(guó)Gibco公司)、1640 培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)和Transwell小室(美國(guó)Corning有限公司)。

方法：①細(xì)胞培養(yǎng)：將H1975 細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的1640 培養(yǎng)液中，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；待細(xì)胞融合度達(dá)到80%以上，用于后續(xù)研究。②Transwell：將Transwell 小室放在24 孔板中，上室加入50 μL 無(wú)血清培養(yǎng)基，將其放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中水化基底膜30 min；將目標(biāo)細(xì)胞消化，用1%血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整濃度至5×105個(gè)細(xì)胞/mL；吸去上層小室的液體，加入目標(biāo)細(xì)胞200 μL，下層小室加入完全培養(yǎng)基500 μL，24 h 后，用甲醇室溫固定小室20 min，棉簽擦拭上層小室細(xì)胞，1%結(jié)晶紫染色細(xì)胞10 min，流動(dòng)水沖洗小室，室溫晾干，拍照。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次以保證結(jié)果的可靠性。

生物信息學(xué)：通過(guò)在線數(shù)據(jù)庫(kù)GEPIA(http ：// gepia.cancer-pku.cn/index.html)分析MUC16 的表達(dá)量及與預(yù)后的相關(guān)性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件分析，均用Mean±SD表示；兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

通過(guò)在線數(shù)據(jù)庫(kù)GEPIA 發(fā)現(xiàn)MUC16在483例肺腺癌中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于在347例正常組織中的表達(dá)量。且MUC16 的表達(dá)量越高，肺腺癌患者預(yù)后越差(P=0.006 6)，見(jiàn)圖1。

以H1975 細(xì)胞作為對(duì)照組，在H1975 細(xì)胞中過(guò)表達(dá)MUC16(標(biāo)記為H1975/MUC16 組)，Transwell 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，H1975/MUC16 組可明顯增加該細(xì)胞的侵襲能力。相反，在H1975細(xì)胞中敲低MUC16(標(biāo)記為H1975/sh-MUC16 組)，Transwell 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，H1975/sh-MUC16組可明顯抑制該細(xì)胞的侵襲能力，見(jiàn)表1。

討 論

圖1 MUC16 在肺癌中高表達(dá)且與患者較差的預(yù)后正相關(guān)

MUC16在80%以上卵巢癌中高表達(dá)，且在子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和肺癌細(xì)胞中也有過(guò)表達(dá)[3-4]。我們通過(guò)統(tǒng)計(jì)GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)信息發(fā)現(xiàn)，MUC16 在肺腺癌組織中的表達(dá)量顯著高于癌旁組織，且其高表達(dá)量與患者較差的預(yù)后呈正相關(guān)關(guān)系。細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)，MUC16 能促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的侵襲能力。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)MUC16 能夠與β-catenin 結(jié)合，促進(jìn)其從細(xì)胞質(zhì)移位到細(xì)胞核，從而促進(jìn)下游致癌基因的表達(dá)[5]。研究發(fā)現(xiàn)MUC16可促進(jìn)p120ctn遷移至細(xì)胞質(zhì)，活化RhoA/Cdc42 信號(hào)通路，從而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖和遷移[6]。后續(xù)，我們將深入驗(yàn)證MUC16 通過(guò)何種方式促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。

表1 MUC16影響H1975的侵襲能力