重氮法與酶法測定新生兒膽紅素的比較分析

朱春陽 王學晶 楊 靜 王 杉 孔亞龍

民航總醫院 北京市 100123

人體內約85%的總膽紅素來源于衰老紅細胞的亞鐵血紅蛋白部分，其余15%來自骨髓破壞的紅細胞前體和其他含有亞鐵血紅蛋白的細胞，通過一系列的反應排出體外。出生數天的新生兒溶血癥往往是大量紅細胞破壞導致游離膽紅素在體內堆積，使總膽紅素濃度升高，結合膽紅素或直接膽紅素正常或略有升高[1]。而新生兒黃疸又是新生兒最常見病癥，國內發病率可高達30%-50%，且有逐年增高的趨勢[2]。若治療不及時可發生嚴重的并發癥，產生永久性不可逆的神經系統后遺癥，更甚者可導致死亡[3]。因此，實驗室檢測新生兒黃疸患兒血清膽紅素水平對臨床醫生的及時診斷、治療及預后有著十分重要的意義。本文就實驗室常用的重氮法和酶法試劑對新生兒膽紅素檢測值進行分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

選取2018年3月到2019年2月期間本院收治并檢測膽紅素的高膽紅素患兒40例：男23例，女17例作為研究對象，各留取高值膽紅素血清2ml，均分為兩份，在日立7600生化分析儀上分別用重氮法和酶法測定總膽紅素（TB）和直接膽紅素（DB）值。

1.2 儀器與試劑

采用日本日立7600全自動生化分析儀裝載瑞士羅氏公司和日本關東化學株式會社所生產的總膽紅素和直接膽紅素試劑，方法學分別為重氮法和酶法。均采用原廠校準品校準后測得質控在控。

1.3 統計學分析

通過SPSS18.0統計學軟件分析研究對象的總膽紅素和直接膽紅素值，采用非參數檢驗計算檢測指標的中位數、第1和第3四分位數間距及差值，用M（25%，75%）（umol/L）/d表示。計數資料采用卡方檢驗，P＜0.05表示差異顯著，有統計學意義。采用Bland-Altman圖分析檢測結果的一致性好壞。

2 結果

由表1可知，兩種方法學對總膽紅素檢測結果相關性良好且差異不大（P＞0.05），無統計學意義。對直接膽紅素的檢測相關性差且重氮法顯著高于酶法（p＜0.05），差異有統計學意義。

表1 ：兩種不同方法對新生兒膽紅素測量值的統計與結果比較M（25%，75%）/d

從圖1中可以看出，5%（2/40）的點在95%一致性界限以外，差值的均值僅為0.9；在一致性界限內，差值的絕對值最大為5.3umol/L。由于兩種方法測量結果最多相差5.3umol/L，測量結果均值為229.15umol/L，這種相差幅度在臨床上完全可以接受。綜合分析可以認為兩種方法的測量結果具有較好的一致性。

圖1 ：兩種方法測量新生兒總膽紅素的Bland-Altman圖

從圖2中可以看出，0%（0/40）的點在95%一致性界限以外，差值的均值為25.7；在一致性界限內，差值的絕對值最大為34.3umol/L。由于兩種方法測量結果最多相差34.3umol/L，測量結果均值為22.35umol/L，這種相差幅度在臨床上不可接。綜合分析可以認為兩種方法的測量結果一致性較差。

圖2 ：兩種方法測量新生兒直接膽紅素的Bland-Altman圖

3 討論

因胎兒在子宮內處于低氧環境，能刺激腎臟產生紅細胞生成素，生成較多的紅細胞，而出生后自主呼吸造成血氧濃度增高，體內不再產生紅細胞生成素，且新生兒紅細胞壽命為70-90d，相比較短于成人，故血中紅細胞破壞過多，釋放出大量膽紅素，同時由于肝臟發育不成熟，肝細胞攝取游離膽紅素能力不足，新生兒腸粘膜內含有豐富的β-葡萄糖醛酸苷酶，活性為成人的10倍，在PH偏堿的環境下可將大量結合膽紅素分解，脫葡萄糖醛酸基重新轉變為脂溶性的游離膽紅素并迅速從腸粘膜吸收[4]。從而進一步使游離膽紅素增加。因此，從理論上講，高膽紅素血癥新生兒體內是以游離的未結合膽紅素升高為主，結合或直接膽紅素正常或略有升高。

目前重氮法是臨床上測定血清膽紅素最常用的方法，其檢測原理是通過觀察與重氮試劑所發生反應的直接或間接反應來區分總膽紅素與直接膽紅素[5]。但該方法對直接膽紅素的測定結果包含了δ-膽紅素和在尿素存在作用下的部分游離膽紅素。而近年來興起的酶法是在PH值為3.7-4.5的條件下，膽紅素氧化酶氧化結合膽紅素和δ-膽紅素，但不作用于游離膽紅素。目前總膽紅素的測定國際上以傳統J-G法作為參考方法，使用世界衛生組織（WHO）系統參考物質SRM916a(NIST)作為二級參考物質。本實驗中兩種方法學試劑均可溯源至這一標準，分析結果也可以看出相關性、一致性良好且不具有統計學差異（P＞0.05）。對于直接膽紅素，通過檢測原理學分析和實驗數據結論，重氮法測定結果要明顯高于酶法，相關性和一致性差且差異顯著（P＜0.05）。

臨床認為新生兒直接膽紅素＞26umol/L為病理性黃疸[6]。通過數據分析發現，依據重氮法測定結果，臨床會認為患兒為病理性黃疸，即為重癥感染或肝細胞損傷等原因所引起，在治療方法的選擇上將會和生理性黃疸有著巨大差別，貽誤治療。

綜上所述，為方便臨床醫生對新生兒黃疸的診斷、治療及預后，建議選擇酶法測定新生兒膽紅素。