不同人乳頭瘤病毒亞型感染與宮頸病變的相關(guān)性

苗野，阮強(qiáng)，馬艷萍

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病毒研究室，沈陽 110004）

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率在世界女性腫瘤中均位居第二，僅次于乳腺癌。據(jù)2012年全球腫瘤統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，每年有527 600例宮頸癌新發(fā)病例和265 700例宮頸癌死亡病例［1］。宮頸癌是由宮頸上皮病變逐步發(fā)展而成，即宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN），其發(fā)展過程包括CIN Ⅰ期、CIN Ⅱ期和CIN Ⅲ期。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）為一種嗜黏膜和皮膚上皮性病毒，自1949年STRAUSSZA在電鏡下首次發(fā)現(xiàn)HPV以來，目前已鑒定出其有100多種亞型，可分為高危亞型（如HPV16、HPV18、HPV31等）和低危亞型（如HPV6、HPV11、HPV42等）。各亞型與體內(nèi)特定感染部位和病變有關(guān)，且不同亞型病毒所致疾病類型也不同。目前有研究［2］顯示，HPV感染尤其是高危HPV亞型持續(xù)感染是宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必要條件。本研究通過分析宮頸病變與不同HPV感染亞型的關(guān)系，以及不同年齡患者中宮頸病變與不同HPV感染亞型的關(guān)系，探討HPV感染與宮頸病變分布、各HPV亞型感染與宮頸病變的關(guān)系以及不同年齡段不同HPV亞型致病力的差異，旨在為HPV感染所致宮頸癌提供防治依據(jù)，并為HPV疫苗接種提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

回顧性分析2015年5月1日至2016年5月31日期間于中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的1 615例宮頸病變女性患者的臨床資料，患者年齡為16～85歲，所有患者均自愿接受HPV檢測。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集和處理：標(biāo)本采集應(yīng)在非月經(jīng)期內(nèi)進(jìn)行，取樣前24 h內(nèi)禁性行為，3 d內(nèi)未使用陰道內(nèi)藥物或未進(jìn)行陰道沖洗。由各病房固定的婦產(chǎn)科醫(yī)生采用配套專用宮頸刷（廣東省潮州凱普生物化學(xué)有限公司），置于宮頸口鱗柱交接處，沿順時針旋轉(zhuǎn)3～5周獲得所有受檢者足夠的移行區(qū)上皮細(xì)胞后取出，放入3 mL專用細(xì)胞保存液中，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，旋緊管蓋，做好樣本標(biāo)記，立即送檢或放置4 ℃冰箱中，3 d內(nèi)檢驗(yàn)。

1.2.2 檢測方法：采用廣東省潮州凱普生物化學(xué)有限公司的HPV核酸擴(kuò)增分型檢測試劑盒，應(yīng)用基因擴(kuò)增及導(dǎo)流雜交技術(shù)，通過反向點(diǎn)雜交方法，利用包被有型特異性探針的雜交膜與HPV基因組DNA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交反應(yīng)，并采用堿性磷酸酶系統(tǒng)定性檢測。

1.2.3 結(jié)果判斷：肉眼觀察檢測結(jié)果，陽性點(diǎn)為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn)，根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點(diǎn)為何種HPV亞型。對21種HPV亞型進(jìn)行分類，包括6種低危亞型（HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44、CP8304）和15種高危亞型（HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68）。有2種或2種以上者為多重感染，對多重感染者，各亞型陽性率重復(fù)計(jì)算。

1.2.4 臨床診斷：以組織病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，診斷研究對象CIN水平，宮頸癌病變過程為初期宮頸炎、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期及宮頸癌確診，由2名病理學(xué)醫(yī)師重復(fù)閱片，對診斷進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分類資料以患病率和百分比進(jìn)行描述，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染情況和亞型分布

1 615例女性患者中，474例HPV檢測陽性，總感染率為29.35%。其中64例（3.96%）為低危HPV亞型感染，436例（26.98%）為高危HPV亞型感染。

HPV各亞型陽性檢出率見表1。在所有高危HPV亞型感染中，除HPV35亞型外，其余高危亞型均被檢出。其中以HPV16亞型陽性檢出率最高，陽性檢出率為8.73%，占高危亞型的32.34%。而HPV58、HPV53、HPV33次之，其陽性檢出率分別為4.40%、3.59%、2.79%，分別占高危亞型的16.28%、13.30%、10.32%。低危HPV亞型感染中，CP8304亞型檢出率最高，陽性檢出率為1.73%，占低危亞型的43.75%。

表1 不同HPV亞型的陽性檢出率Tab.1 Positive detection rate of different HPV genotypes

2.2 不同HPV感染亞型與不同級別宮頸病變的關(guān)系

本研究中，宮頸炎患者共檢出16種HPV亞型，以HPV16、HPV53、HPV58為最常見。隨著病情的發(fā)展，CIN Ⅰ期患者中檢出19種HPV亞型，以HPV16、HPV53、HPV33亞型為主。CIN Ⅱ期患者中檢出19種HPV亞型，以HPV16、HPV58、HPV51常見。CINⅢ型患者中檢出17種HPV亞型，以HPV16、HPV33、HPV58常見。宮頸癌患者中檢出13種HPV亞型，以HPV16、HPV18、HPV53常見。以上所有HPV亞型中，低危亞型HPV42（P=0.02）和高危亞型HPV16（P＜0.01）、HPV31（P=0.04）、、HPV52（P＜ 0.01）、HPV53（P＜ 0.01）、HPV56（P=0.04）、HPV58（P=0.01）、HPV66（P=0.05），在不同級別宮頸病變中感染率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

2.3 不同年齡患者中HPV感染亞型與不同級別宮頸病變的關(guān)系

表2 不同HPV亞型在不同級別宮頸病變中的分布情況［n （%）］Tab.2 Distribution of different HPV genotypes in cervical lesions of different grades ［n （%）］

本研究將人群按年齡分為4個組，分別為15～30歲、31～45歲、45～60歲及≥61歲。各年齡組患者HPV感染狀況與多重感染狀況見表3。可以看出，雖然不同年齡組間HPV感染率的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.30，P=0.35），但HPV感染率隨著年齡的增加呈上升趨勢。見表3。

調(diào)整年齡因素后，HPV感染亞型與宮頸病變的關(guān)系見表4。15～30歲年齡組中HPV45亞型感染與不同級別宮頸病變有關(guān)，但由于陽性患者過少，因此不做比較。31～45歲年齡組中HPV33（P=0.03）、HPV56（P=0.02）的感染與不同級別宮頸病變有關(guān)，且CINⅠ期（3.1%）及宮頸癌（2.6%）患者中感染率較高，而HPV33在CINⅠ期（4.6%）、CIN Ⅲ期（2.8%）患者中的感染率較高，但在宮頸癌患者中的感染率較HPV33降低，表明與HPV56相比，HPV33對宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)性有所減弱。46～60歲年齡組中HPV16（P＜ 0.01）、HPV18（P=0.02）與不同級別宮頸病變有關(guān)，且HPV16在CIN Ⅱ期（12.0%）、CIN Ⅲ期（16.9%）和宮頸癌（25.0%）患者中的感染率明顯高于其他宮頸病變患者，HPV18在宮頸癌患者中感染率（9.1%）最高。≥61歲年齡組中HPV16與不同級別宮頸病變有關(guān)（P=0.01），且在CINⅡ期（50.0%）及宮頸癌（57.1%）患者中的感染率高于其他宮頸病變患者。

表3 不同年齡組女性患者中HPV的感染率Tab.3 Infection rate of HPV in female patients of different ages

3 討論

HPV是一種球形無包膜的DNA病毒，具有高度宿主細(xì)胞特異性，可引起多種增殖性上皮病變，包括乳頭狀瘤（疣）和瘤樣病變，包括宮頸、陰道、陰莖和肛門癌癥以及頭頸部腫瘤等一系列惡性病變。其中近100%的宮頸癌，90%的肛門癌，40%的外陰、陰道及陰莖癌癥，12%的口咽癌，3%的口腔癌歸因于HPV感染［3］。而CIN水平可以反映宮頸癌發(fā)展的連續(xù)過程，本研究調(diào)查不同HPV亞型感染的分布、與不同級別宮頸病變的關(guān)系以及不同年齡段HPV亞型在不同類型宮頸病變中的感染率，探討各HPV亞型對宮頸病變致病性的差異以及年齡因素對HPV致病性的影響，為HPV所致宮頸癌的治療和預(yù)防提供幫助。

表4 各年齡組患者HPV亞型與宮頸癌病變的相關(guān)性分析［n （%）］Tab.4 Relationship between different HPV genotypes and cervical lesions of different grades in different age groups ［n （%）］

本研究結(jié)果表明，HPV感染亞型以HPV16為主，其次是HPV58。國際癌癥研究協(xié)會的研究［4］結(jié)果顯示，世界范圍內(nèi)最常見的亞型為HPVl6和HPV18。而我國以HPV6、HPV18、HPV52、HPV58和HPV39常見［5］。宮頸病變中，在我國HPV16較為常見，長江以北地區(qū)以HPV16、HPV58及HPV52常見［6］，與本研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果表明，HPV感染率隨年齡增加呈上升趨勢。有研究［7］報(bào)道，HPV隨年齡增加感染率上升，與本研究結(jié)果一致。但也有文獻(xiàn)［8-10］報(bào)道HPV感染高峰期在18～28歲，感染率可達(dá)25%～30%，30歲以下婦女高危HPV亞型感染率較高，可達(dá)15%～46%，35歲后呈5%～10%的高危HPV亞型持續(xù)感染狀態(tài)。這可能是地區(qū)差異導(dǎo)致的HPV感染率年齡分布不同。

HPV感染是誘發(fā)宮頸癌的啟動因素，超過92%的宮頸癌組織攜帶HPV病毒［11］，其中以HPV16和HPV18常見。有研究［12］顯示，HPV檢出率會隨病變程度呈上升趨勢，但未將HPV分為不同亞型進(jìn)行分析。因此，本研究探討了不同HPV亞型在不同級別宮頸病變的感染情況。結(jié)果顯示，低危亞型HPV42（P=0.02），高危亞型HPV16（P＜ 0.01）、HPV31（P=0.04）、HPV52（P＜ 0.01）、HPV53（P＜ 0.01）、HPV56（P=0.04）、HPV58（P=0.01）及HPV66（P=0.05）在不同級別宮頸病變中的感染率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，HPV16、HPV31、HPV53及HPV58感染率較其他HPV亞型高。其中，HPV16感染者宮頸癌患病率較高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而HPV31及HPV58感染者中CINⅠ期患病率較高，但宮頸癌患者中的感染率較低，提示HPV16對宮頸癌的癌前病變作用較大，而HPV31和HPV58對宮頸炎進(jìn)展為宮頸癌的作用弱于HPV16。雖然HPV53的感染率較宮頸炎和CINⅠ期患者有所降低，但在宮頸癌患者中的感染率顯著上升，表明HPV53對宮頸癌的發(fā)展仍然具有較強(qiáng)的作用。HPV53對宮頸病變的致病特點(diǎn)值得擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。

有研究［13］顯示，年齡是HPV感染與宮頸疾病的相關(guān)因素，且隨年齡增加，HPV所致不同宮頸病變類型中宮頸癌構(gòu)成比逐步上升，其中以HPV16和HPV58致癌性最高。鑒于年齡因素會影響HPV感染與宮頸疾病的關(guān)系，本研究在調(diào)整年齡后進(jìn)一步分析HPV感染與宮頸疾病的關(guān)系。按年齡分層后的結(jié)果表明，HPV16與46歲以上女性的不同宮頸病變有關(guān)，且31～45歲與46～60歲年齡組中CIN Ⅲ期患者的感染率最高，其次為宮頸癌患者，而在≥61歲年齡組宮頸癌患者中HPV16感染率最高。31～45歲女性以HPV33和HPV56感染為主，HPV33和HPV56感染率較高，但患者大多處于宮頸癌前病變階段，宮頸癌的患病率較低；46～60歲年齡組中HPV16和HPV18感染與不同宮頸病變有關(guān)，而且宮頸癌患者中的感染率最高。而61歲以上女性中仍以HPV16感染為主，HPV6與HPV33感染尚處于較低水平，由于樣本量較低，尚無法進(jìn)行對比，但仍不能忽視其作用，需要進(jìn)行進(jìn)一步的調(diào)查研究。

綜上所述，本研究比較全面地評價了高危HPV亞型感染對宮頸病變，尤其是對不同年齡組宮頸上皮內(nèi)瘤變患者宮頸病變的不良影響，從而進(jìn)一步提示加強(qiáng)對高危HPV亞型感染的監(jiān)測、預(yù)防及控制的必要性。