IL-34在巨噬細(xì)胞分化中的作用研究①

劉曉禮 王 昊 張東玥 王麗娜 鄭國(guó)光

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所 實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家血液病臨床醫(yī)學(xué)研究中心,天津300020)

IL-34是2008年發(fā)現(xiàn)的一種新型白細(xì)胞介素[1]，與巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor，M-CSF/CSF1)作用于同一受體CSF1R[2]。IL-34與M-CSF功能有顯著重疊，均可促進(jìn)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及破骨細(xì)胞的增殖、分化和生存[3,4]。然而二者表達(dá)具有時(shí)空差異[5,6]，且在基因序列和結(jié)構(gòu)上缺少同源性[7,8]，導(dǎo)致功能亦存在差異。有研究報(bào)道，IL-34 和 M-CSF均可誘導(dǎo)免疫抑制型巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生[9]，但兩種巨噬細(xì)胞在分泌細(xì)胞因子及M1/M2極化方面存在差異[10]。目前IL-34 和 M-CSF在病理和生理?xiàng)l件下的功能差異并未完全闡明。本文通過體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)，研究?jī)烧咴诰奘杉?xì)胞分化過程中的作用差異。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 8～10周雌性C57BL/6J小鼠購(gòu)自實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。α-MEM培養(yǎng)基、胎牛血清和青霉素/鏈霉素均購(gòu)自Gibco公司，重組鼠源M-CSF和IL-34均購(gòu)于PeproTech公司，TRIzol購(gòu)自Thermo公司。流式抗體CD11b-PerCp-Cy5.5和Annexin-V/PI細(xì)胞凋亡試劑盒購(gòu)于BD公司，F(xiàn)4/80-APC購(gòu)于eBioscience公司。引物在華大基因科技股份有限公司合成。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1骨髓細(xì)胞培養(yǎng) 取小鼠股骨和脛骨髓腔內(nèi)細(xì)胞，ACK裂解液裂解紅細(xì)胞后，按1.5×106個(gè)/孔均勻鋪于12孔板中，用含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的α-MEM培養(yǎng)基于37℃、5%CO2飽和濕度溫箱中培養(yǎng)。在骨髓細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)中，用不同濃度(50、100或150 ng/ml)IL-34和50 ng/ml M-CSF作用骨髓細(xì)胞3或6 d；在巨噬細(xì)胞表型維持實(shí)驗(yàn)中，先用50 ng/ml M-CSF誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞6 d后，再分別用50 ng/ml M-CSF、100 ng/ml IL-34、100 ng/ml LPS和無因子(對(duì)照組)條件下繼續(xù)培養(yǎng)3 d。……