諾如病毒性胃腸炎快速檢測方法的研究

陳德超 曾迎春 徐昭英 郭艷

（自貢市大安區疾病預防控制中心 四川 自貢 643000）

病毒性腸胃炎主要的臨床癥狀為腹痛、嘔吐等情況，主要的致病病菌為諾如病毒，該病毒具有很高的隨機性，發病患者的年齡極為普遍，對人們的正常生活造成嚴重的影響。本文主要通過2017年5月—2019年5月于我院進行就趁的腸胃炎患者進行檢測，運用反轉錄聚合酶鏈反應和轉錄反轉錄協同實驗檢測比較，研究內容報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次的研究所選擇的研究對象均為2017年5月—2019年5月于我中心進行就診的腸胃炎患者120例，其中男性患者78例，女性患者42例，年齡為18～74歲，平均年齡（41.5±7.5）歲，所有的患者均有腹瀉、嘔吐等臨床癥狀、每日排便≥3次，且糞便以及血常規檢查無特殊情況。

1.2 方法

1.2.1 樣板采集方法 所有的實驗樣板采集便盒均由市疾病預防中心統一發放。對所有患者3日內的糞便樣板進行采集，每份樣本在5～20ml之間，標本采集后立即低溫送檢，如有不能及時送檢的情況，則需要在-20℃的環境下冰凍保存。

1.2.2 樣板處理方法 在進行試驗的過程中，對待處理的樣本在室溫下復融，取樣本稀釋液1ml，之后在其中加入0.1g的固態糞便樣本搖勻混合，在常溫環境下靜置10分鐘，接下來在5500r/min的離心機下進行離心5～6min

1.2.3 反轉錄聚合酶鏈反應 其主要的反應體系有：2.5μL緩沖液，2.5μL的BSA，模板RNA 1.5μL，2.5mol/L MgCl2等。將PCR反應體系離心，使用PCR儀進行擴增。在94℃的環境下變性反映3min，接下來反應1min，58℃反應80s，72℃反應1min，將以上順序反復進行30～40次。將反應體系放入恒溫擴增系統中，在43℃的換機構下預熱反應5min，最后將5μL的反應酶依次加入反應體系中進行檢測。最終得出檢測結果。

1.3 統計學方法

對統計的所有數據均采用SPSS19.0進行統計分析。

2.結果

2.1 轉錄反轉錄協同實驗和反轉錄聚合酶鏈反應檢測結果對比

運用兩種檢測方法對諾如病毒進行檢測結果，其中有48例患者的結果均為陽性，60例患者的結果均為陰性。轉錄反轉錄協同實驗檢測結果為陽性53例，陰性67例；反轉錄聚合酶鏈反應檢測為陰性的患者有65例，陰性55例，見表。

表 轉錄反轉錄協同實驗和反轉錄聚合酶鏈反應檢測結果對比（n）

通過表中的數據，在實驗中，以反轉錄聚合酶鏈反應檢測結果作為金標準，對轉錄反轉錄協同實驗的靈敏度和特異性及準確率進行計算：

其靈敏度為：均為陽性數/反轉錄聚合酶鏈反應檢測陽性數=48/55×100%=87.27%

其特異性為：均為陰性數據/反轉錄聚合酶鏈反應檢測陰性數=60/65×100%=92.31%

準確率=（均陽性+均陰性）/總例數=（48+60）/120×100%=90.0%

3.討論

病毒性腸胃炎是當前臨床醫學上常見的癥狀之一。諸多研究結果表明，諾如病毒是導致病毒性腸胃炎的重要病原體之一[1]。諾如病毒有名若瓦克樣病毒，其本身具有感染性高，抵抗能力強、傳播速度快等特點，患者一旦感染后具有持續缺乏免疫力等現象，對患者的活動造成嚴重的影響。諾如病毒形狀呈圓球狀，直徑大約在25～38nm之間，傳統的諾如病毒檢測方法是通過電鏡檢查，但是該檢查方法具有極低的檢出率，這項檢測方法是分別基于病毒外形特點、主要抗原決定簇和特異性核酸序列而建立的，并且和操作手法也有密切的關系[2]。伴隨著科技的發展，目前在臨床上對諾如病毒的檢測是采取轉錄反轉錄協同實驗和反轉錄聚合酶鏈反應檢測進行檢測，該方法具有良好的靈敏度以及特異性，但是需要檢測人員具備更高技術水平，因此，運用該項技術檢測前，需要提高操作人員的綜合能力。

本研究結果通過轉錄反轉錄協同實驗和反轉錄聚合酶鏈反應檢測結果進行對比，其中有48例患者兩種檢測均為陽性，60例患者均為陰性，通過對其靈敏度以及特異性的檢測，其靈敏度為87.27%，特異性為92.31%，準確性為90.0%。本研究結果與劉遠興[3]等人的研究結果相似，說明該結果的可靠性。

綜上所述，針對諾如病毒的檢測使用轉錄反轉錄協同實驗，能夠快速有效檢測出來，并且具有良好的靈敏度以及特異性，值得臨床運用。