TRFlA法檢測(cè)陽(yáng)性梅毒螺旋體抗體結(jié)果分析

盧元全

（重慶市豐都縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 重慶 408200）

現(xiàn)階段，最靈敏的微量分析技術(shù)是時(shí)間分辨熒光分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA），該技術(shù)的特點(diǎn)包括無(wú)放射性污染、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍寬、不會(huì)受樣品自然熒光干擾、自動(dòng)化、操作簡(jiǎn)單、多標(biāo)記以及標(biāo)記物制備簡(jiǎn)單且穩(wěn)定等[1]，已廣泛運(yùn)用于蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針和生物活性細(xì)胞的定量分析。梅毒傳播途徑以性接觸為主，近些年來(lái)，在我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展和生活水平顯著提高的背景下，梅毒患病人數(shù)逐漸增多[2]。在檢測(cè)TP-Ab時(shí)，如果采用一步法進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)血清中TP-Ab濃度過(guò)高時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)（HOOK效應(yīng)）[3]，高濃度標(biāo)本易誤測(cè)為低值標(biāo)本，甚至出現(xiàn)正常結(jié)果。在臨床工作中，鉤狀效應(yīng)很難被發(fā)現(xiàn)，如果出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，易發(fā)生漏診或誤診。本文對(duì)患者血清經(jīng)倍比稀釋用TRFIA檢測(cè)，確認(rèn)其TP-Ab稀釋結(jié)果高于原倍血清結(jié)果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

檢測(cè)標(biāo)本均為2017年梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性患者血清。

1.2 儀器

蘇州新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的EasyCuta 全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光分析儀。

1.3 試劑

蘇州新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的配套梅毒螺旋體抗體檢測(cè)試劑盒(免疫熒光法)。室內(nèi)質(zhì)控血清由康徹斯坦提供，以保證結(jié)果的正確性。

1.4 方法

用EasyCuta全自動(dòng)時(shí)間分辨免疫熒光儀檢測(cè)699例病人的2倍稀釋血清，有顯著差異時(shí)，無(wú)菌生理鹽水倍比稀釋，利用TRFIA雙抗原夾心法測(cè)定，觀察檢測(cè)結(jié)果是否存在鉤狀效應(yīng)。操作過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.結(jié)果

TRFIA法檢測(cè)699例病人中有兩例標(biāo)本為原倍時(shí)S/CO值分別為2.925和5.865，經(jīng)2倍稀釋后的S/CO值分別為19.794和23.786，這兩例標(biāo)本2倍稀釋后的結(jié)果明顯高于原倍血清結(jié)果。繼續(xù)做倍比稀釋時(shí)，在稀釋濃度不斷提高的背景下，S/CO值逐漸提高，在稀釋倍數(shù)達(dá)到1：16時(shí)達(dá)到峰值，即68.592和54.201，然后在稀釋濃度高低變化過(guò)程中，室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控，詳情如表。

表 雙抗原夾心法不同血清稀釋度下的S/CO值（CO值為1）

3.討論

現(xiàn)階段，通過(guò)雙抗原夾心時(shí)間分辨免疫熒光分析法（TRIFMA）檢測(cè)梅毒螺旋抗體檢測(cè)試劑盒，其產(chǎn)于蘇州新波生物科技有限公司，本分析方法是一種固相時(shí)間分辨免疫熒光分析法,其屬于雙抗原夾心的非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析。詳細(xì)原理如下：血清標(biāo)本中的生物素標(biāo)記的TP抗原（Ⅱ）以及抗-TP(包括IgG、IgM等型)與固相 TP抗原（I）發(fā)生免疫性反應(yīng)，有助于固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素復(fù)合物的形成，經(jīng)過(guò)溫育洗滌之后，洗去游離的生物素抗原；然后將Eu標(biāo)記的鏈親和素加入其中，促進(jìn)固相TP抗原（I）—抗TP—TP（Ⅱ）—生物素—鏈親和素-Eu復(fù)合物的形成，溫育洗滌之后，洗去游離的Eu標(biāo)記的鏈親和素。將熒光增強(qiáng)液加入其中，增強(qiáng)液中可以分離復(fù)合物上的Eu，與此同時(shí)，與增強(qiáng)液發(fā)生反應(yīng)，最終以熒光絡(luò)合物的形成呈現(xiàn)，血清中的抗TP濃度與熒光強(qiáng)度呈正比。

本次，兩份標(biāo)本中的TP-Ab均以鉤狀效應(yīng)的形式呈現(xiàn)。血清未稀釋（原倍）時(shí)用時(shí)間分辨免疫熒光儀檢測(cè)結(jié)果為2.925和5.865，血清經(jīng)過(guò)不斷稀釋之后，S/CO值顯著提升，與此同時(shí)在比值達(dá)到1：16時(shí)達(dá)到最高值，之后，通過(guò)增加稀釋倍數(shù)，S/CO值逐漸減小。當(dāng)稀釋到1：256時(shí)，其檢測(cè)結(jié)果分別為6.193和9.147，接近于原倍血清檢測(cè)結(jié)果。將倍比稀釋結(jié)果做平滑曲線的散點(diǎn)圖，發(fā)現(xiàn)兩例標(biāo)本的圖形呈明顯的鐘形，且基本呈正態(tài)分布。證明這兩例標(biāo)本采用TRIFMA檢測(cè)梅毒抗體時(shí)，一旦提升標(biāo)本中梅毒抗體濃度，則會(huì)發(fā)生鉤狀效應(yīng)。

本次兩份標(biāo)本的TP-Ab檢測(cè)結(jié)果經(jīng)倍比稀釋到1：256時(shí)，結(jié)果分別為6.193和9.147，結(jié)果高于Cutoff值1.000，仍沒(méi)有出現(xiàn)正常結(jié)果。

綜上所述，目前，解決由鉤狀效應(yīng)引起的漏檢最可靠方法是經(jīng)典二步法，進(jìn)而確保被檢樣本檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，確保輸血的安全性，降低漏檢發(fā)生率，避免醫(yī)療糾紛。