Mindray BC6900網織紅細胞參數參考區間的建立及與手工法檢測的比較

周露露，陳燕，徐衛益

(1．浙江大學醫學院附屬第一醫院檢驗科，浙江省臨床體外診斷技術研究重點實驗室，浙江 杭州310003；2．紹興文理學院，浙江紹興312000)

網織紅細胞是晚幼紅細胞脫核后到完全成熟紅細胞間的過渡細胞，是尚未完全成熟的紅細胞，是反映骨髓造血功能的重要指標，對貧血的診斷、鑒別診斷有一定臨床意義，并且可作為早期評估骨髓造血功能和貧血性疾病治療效果的指標[1，2]。隨著自動化檢測技術的不斷發展，傳統手工鏡檢因繁瑣、耗時久、易受染色溫度、時間、涂片厚薄、主觀判斷等因素影響，已逐漸被儀器法所替代[3]。有文獻報道關于儀器法網織紅細胞檢測參考區間建立，但不同血液分析儀檢測網織紅細胞結果存在一定的差異[4]，因此需要實驗室建立自己的參考區間；另外，文獻報道不同品牌的儀器檢測網織紅細胞與手工法比較不盡相同，有文獻表明Mindray BC6900檢測網織紅細胞結果與手工法有更好的相關性[5]，我們通過實驗加以驗證。

1 材料與方法

1．1 標本 儀器法參考區間建立的標本主要選取本院健康體檢者390例的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝的靜脈血 1～2ml，其中男性 180 例，中位年齡49歲，女性210例，中位年齡46歲。實驗對象納入標準為內科、外科、心電圖、肺部CT平掃、B超檢查等體格檢查無明顯異常，血常規檢測紅細胞計數、白細胞計數、血小板計數及血紅蛋白指標正常。方法學比較留取標本為73例臨床患者的EDTA-K2抗凝靜脈血1～2ml，其中男性40例，中位年齡46歲，女性33例，中位年齡49歲。

1．2 儀器與試劑

1．2．1 儀器法使用國產全自動血液分析儀Mindray BC6900及其原裝配套試劑，每日運行3水平的室內質量控制；儀器進行定期校準和性能驗證。

1．2．2 手工鏡檢法采用新亞甲藍活體染色液，OLYMPUS CX31電子顯微鏡，采用Miller窺盤法進行手工法網織紅細胞計數。

1．3 方法 儀器法采集靜脈血1～2ml于EDTA-K2抗凝管中混勻，用Mindray BC6900全自動血液分析儀檢測RET相關參數，參考區間的建立依據美國臨床和實驗室標準化協會C28-A3[6]文件推薦方法；手工法用新亞甲藍活體染色液進行全血活體染色，依據SOP文件操作指南，染色25～30min，涂片、干燥、鏡檢。手工計數RET的百分比與血液分析儀測定結果進行比較分析。所有檢測在標本采集后2h內完成。

1．4 統計學方法 數據采用SPSS 17．0軟件進行統計分析。經正態性檢驗，網織紅細胞相關參數為偏正態分布，男、女組間采用非參數秩和檢驗，用百分位數(P2．5，P97．5)來確定網織紅細胞相關參數的參考區間；方法學比較采用邏輯回歸分析，以P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2．1 儀器法參考區間的建立 390例健康體檢者Mindray BC6900全自動血液分析儀檢測網織紅細胞計數及其他相關參數。數據經統計分析顯示，RET相關參數呈偏態分布，采用非參數秩和檢驗進行數據分析，結果如表1所示。RET%、IRF%、LFR%、MFR%檢測結果男女間存在顯著差異，而RET#、HFR%檢測結果男女無差異。

表1 不同性別RET相關參數參考區間及比較

2．2 儀器Mindray BC6900全自動血液分析儀與手工鏡檢法的方法學比較 將儀器法檢測網織紅細胞參數（RET%）與手工染色鏡檢法的結果進行相關性統計學分析，結果如表2所示。相關性散點圖見圖1。手工染色鏡檢法 （X軸）與儀器Mindray BC6900（Y軸）檢測結果通過線性回歸分析，得出回歸方程為 Y=0．911X+0．540。 兩種方法比較，相關系數 r=0．965，相關性良好。

3 討論

網織紅細胞是介于晚幼紅細胞與成熟紅細胞之間的未完全成熟的紅細胞，可反映骨髓紅系的增生情況，對疾病的診斷、鑒別診斷、預后及療效觀察有著重要的輔助作用。隨著血細胞分析儀自動化分析技術的不斷發展，采用熒光染色和半導體激光技術測定原理來檢測網織紅細胞已在臨床實驗室普遍開展，其最大優點是檢測效率高、重復性好、提供的參數多，解決了臨床快速、準確、多參數獲取網織紅細胞檢驗報告的需求。截止目前臨床使用的成人RET各參數參考區間并不完善，臨床基礎檢驗教科書（第5版）[7]、臨床檢驗標準操作規程（第4版）[8]還是采用手工法參考區間。李小龍等[9]建立了溫州地區成人網織紅細胞相關參數的參考區間，但和金碩等[10]報道的結果存在較大差異，兩者使用的檢測儀器均為Sysmex XE-2100，主要表現在男女RET%和RET#的低限前者異常低，與臨床不太符合，可能與選取的實驗對象不同有關。本次實驗得出的Mindray BC6900網織紅細胞檢測參考區間與金碩等報道的較為一致。因此，不同品牌、不同型號的血液分析儀檢測網織紅細胞參數的參考區間結果不一定存在較大差異，需要通過各實驗室加以驗證，當存在差異時，尤其是實驗室有不同品牌儀器時應進行儀器間比對或建立各自的參考區間，以方便臨床正確判斷。

表2 儀器法與手工法檢測網織紅細胞結果比較

圖1 儀器法與手工法檢測網織紅細胞結果比較散點圖

經統計學分析，網織紅細胞的各項參數 （除RET#）RET%、IRF%、LFR%、MFR%及 HFR%指標，男性參考區間均稍大于女性，這與男女之間不同生理因素有著重要關系，與男性紅細胞數高于女性情況一致。同時在收集健康體檢者血常規標本時，標本量較多，無法完全控制變量，導致在收集標本時很難從健康體檢指標中判斷出采血近期是否有體育鍛煉、是否服用補品以及女性生理期情況等影響因素。這些影響因素對于網織紅細胞各參數參考區間的建立有一定的影響。

方法學比較儀器法與手工法計數網織紅細胞數據分析，73例樣本中，儀器法結果均值高于手工法，標準差低于手工法，說明儀器法所檢測網織紅細胞的結果高于手工法的檢測結果且有很好的重復性，原因主要為儀器法檢測對點粒型網織紅細胞敏感性優于手工法。兩種方法相關性良好，P＜0．05，驗證了相關文獻關于比較不同型號全自動血液分析儀報道表明Mindray全自動血液分析儀與手工法相關性較好的分析[11，12]。

本實驗關于參考區間的建立，將性別作為一個分組指標，從而建立男、女不同網織紅細胞相關參數的參考區間。但由于標本數量的關系，本次實驗未進行各年齡段的檢測結果統計分析，參考金碩等文獻報道RET參數RET%和RET#各年齡組之間無明顯差異，因此本次實驗沒有將年齡作為分組指標。同時，儀器法檢測都存在一定的影響因素，例如，嗜堿性點彩紅細胞、瘧原蟲感染紅細胞、H-J小體、Pappenheimer bodies(帕彭海默氏小體)等存在情況下，儀器法檢測出的結果可能偏高，需要用手工法加以驗證。

通過本次實驗，Mindray BC6900儀器網織紅細胞檢測性能較好，與手工法具有良好的相關性，檢測所使用的樣本量很少，準確度高、檢測效率高，能夠廣泛運用于臨床。