基于EP文件的Centaur XP化學發光免疫系統性能驗證

林佩娜，劉肖瑛，潘俊均

(東莞康華醫院檢驗科，廣東 東莞 523080)

醫學實驗室認可工作近年來備受檢驗者的關注，必要且良好的儀器性能驗證是實驗室滿足臨床需求的基本保證。為了保證檢驗結果的可靠性、準確性，實驗室必須對檢測系統的主要性能進行驗證，證實其能夠滿足預期的質量要求后才能用于常規檢測。精密度、正確度、分析測量范圍、參考區間是檢測系統的主要性能指標，我們參考有關文獻，結合具體工作實際，以TSH-3，CA19-9為例探討化學發光免疫分析系統簡便可行的性能驗證方法。

1 材料與方法

1．1 材料來源 選擇健康體檢中心的體檢者和本院患者的新鮮血清標本；2017年第一次、第二次全國內分泌室間質評質控品，批號分別為201711-201715和201721-201725；2017年第一次、第二次全國腫瘤標志物室間質評質控品，批號分別為201711-201715和 201721-201725；高、低值 TSH-3，CA19-9標本各1份。

1．2 儀器和試劑 儀器為德國西門子公司ADVIA Centaur XP全自動化學免疫分析系統；檢測試劑、校準品為西門子醫學診斷產品，質控品分別為BIO-RAD Lyphochek Immunoassay plus control(批號 40342，40343) 和 BIO-RAD Tumor Marker plus control(批號 54631，54632)；所有試劑均在有效期內使用。

1．3 精密度驗證實驗 根據CLIS EP15-A2文件，收取TSH-3，CA19-9高、低2個濃度的血清標本各1份，每份分別分裝于20個帶蓋的一次性離心管內-20℃冰箱凍存；選用2個濃度水平，每個水平每天檢測3次，每次間隔2h，共5d，分別計算其批內及批間不精密度，批內精密度≤1/4允許總誤差(TEa)，批間精密度≤1/3允許總誤差(TEa)，為盡量避免影響檢測結果，試驗采用同一批號試劑、校準品，室內質控在控后進行驗證實驗[1]。

1．4 正確度驗證實驗 根據CLIS EP15-A2文件，在精密度評估滿足要求后，2017年第一次、第二次全國內分泌室間質評質控品和2017年第一次、第二次全國腫瘤標志物室間質評質控品進行測定，計算檢測值和靶值的相對偏倚，相對偏倚≤1/2TEa為可接受。在此期間室內質控必須在控[2]。

1．5 分析測量范圍(AMR)驗證實驗 根據EP6-A2的文件 選擇新鮮高值(H)和低值(L)患者血清標本，所收集的高、低值濃度盡可能覆蓋可測量范圍，然后 按 1L，0．8L+0．2H，0．6L+0．4H，0．4L+0．6H，0．2L+0．8H，1H的關系配置系列濃度血清6份。將各個評價樣品的理論濃度記為X，其對應的實際測定濃度記為Y，利用統計軟件計算Y與X的相關系數r，若r＞0．975則認為理論濃度與實測濃度有明顯的相關性[3]，可做下一步的回歸分析，利用直線回歸分析計算出Y與X的直線回歸方程，以R2≥0．95作為是否成線性判別點。

1．6 參考區間驗證 選擇20例體檢合格的健康人標本(經檢查無心、肺、腎等重要臟器疾病，男10例，女10例，年齡在16-68歲)，在檢測系統上進行檢測，計算比率(r=檢測值在參考區間的標本數/總標本數)，r≥95%，驗證結果可接受，說明檢驗科可引用該參考區間；r≤95%，分析查找原因后重新進行參考區間的驗證實驗[4]。

1．7 統計學方法 精密度，正確度的統計方法參照CLSI EP15-A2[5]，分析測量范圍的統計參照CLSI EP6-A2[6]，參考區間的統計方法參照CLSI C28-A3[7]；數據處理采用SPSS 19．0進行數據處理及統計學分析。

2 結果

2．1 精密度驗證結果 收取TSH-3，CA19-9高、低2個濃度的血清標本各1份，每個水平每天檢測3次，每次間隔 2h，共 5d，見表 1。

2．2 正確度驗證結果 TSH-3、CA19-9兩個項目10個濃度的衛生部臨床檢驗中心室間質量評價材料進行檢測，結果顯示偏倚均小于1/2TEa，各項目測定結果均符合要求，驗證通過。見表2。

2．3 分析測量范圍系列標本測量結果 TSH-3的廠家提供的線性范圍為 0．004～150mIU/ml，CA19-9的廠家提供的線性范圍為1．2～700U/ml，根據實測值與計算的預測值獲得回歸方程TSH-3為Y=1．0183X-1．2454 (R2=0．9992)，CA19-9 為 Y=0．9963X-0．7846(R2=0．9996)，相關系數 r＞0．975 則認為理論濃度與實測濃度有明顯的相關性。因此，TSH-3 在 0．008～130．198mIU/ml，CA19-9 在 1．585～564．765U/ml試驗所涉及的濃度范圍內呈線性關系；與結果見表3。

2．4 20例參考個體的結果 選擇20例體檢合格的健康體檢者標本，TSH-3的檢測結果在 0．15～1．63mIU/ml之間，95%的結果在西門子說明書提供的 0．55～4．78mIu/ml范圍內；CA19-9 的檢測結果在2．42～36．27U/ml之間，100%的結果在西門子說明書提供的0～37U/ml范圍內，說明可以直接引用廠家提供的參考區間。

3 討論

西門子ADVIA Centaur XP系統是經美國食品和藥物管理局(FDA)認可的化學發光檢測系統，生產廠家對其分析性能已做了詳細全面的評估，并已被臨床實驗室廣泛應用；但是，由于不同實驗室不同儀器之間存在差異，常導致臨床結果不一致而給臨床帶來疑惑和困擾[8]，且《臨床實驗室改進法規修正案》和ISO15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》[9]對此明確規定，對開展新的檢測項目，更換檢測系統或改變試劑盒廠商時，實驗室需對其相關方法學分析性能予以驗證，提供并保留相關的方法學驗證數據以確保結果的準確可靠。因此，必要且良好的儀器性能驗證是實驗室檢測結果與臨床互認的基本保證[10]。

精密度性能是檢測系統的基本分析性能之一，也是其它方法學評價的基礎，國際上將精密度性能列為檢驗分析性能的第1位，如果精密度差，其它性能評價試驗將無法進行[11]。本文采用了CLSI EP15-A2提供的簡化方案，以TSH-3、CA19-9為測定指標，對高、低2個濃度的血清標本進行分析，實驗結果顯示，TSH-3批內不精密度在1．97%～2．31%， 批間不精 密度在 2．69%～3．75%，CA19-9 批內不精密度在 3．59%～5．74%，批間不精密度在6．82%～7．20%，二者批內精密度和批間精密度分別小于 1/4CLIA，88允許范圍和 1/3CLIA，88允許范圍，表明精密度性能符合要求。

表1 TSH-3和CA19-9精密度實驗結果

表2 室間質量評價材料驗證結果

表3 TSH分析測量范圍驗證表

正確度反映的是測量值與真實值之間的一致程度，臨床醫師對其非常關注，是保證醫療工作的實際需要，在方法學性能評價實驗中的重要性僅次于精密度評價實驗[12]；目前，關于正確度性能評價有多種方案，主要有CLSI EP9-A2和CLSI EP15-A2，但是EP9-A2由于實驗過程較繁瑣，統計過程較復雜，在許多情況下實用性不強[13]，所以本文使用CLSI EP15-A2“精密度和正確度性能的用戶驗證”指南[14]進行正確度驗證，結果顯示TSH-3 的相對偏倚為-4．72%～3．88%，CA19-9 的相對偏倚為-8．96%～5．16%， 二者均在 1/2TEa(12．5%)之內，表明正確度性能符合要求。

分析測量范圍及參考區間驗證也是反映分析方法性能的重要指標，本研究通過一系列濃度血清驗證TSH-3，CA19-9的線性范圍，從表2中顯示，系列血清的測量值與預測值線性良好，與廠家聲明基本一致；生物參考區間是臨床判斷健康與否的標準，CLSI C28-A3文件提供3種方法評估參考區間，本研究采用20個參考值數據驗證是其中最簡便可行的方法[15]，結果表明，廠家聲明的參考區間可以轉移使用。

綜上所述，本文通過對ADVIA Centaur XP化學發光免疫分析系統TSH-3、CA19-9的精密度、正確度等性能的檢測，驗證了其與國際公認的質量要求或廠家聲明的要求基本一致。所采用的方法操作簡便、實用，且成本較低，對規范化學發光免疫檢驗，提供檢驗質量控制具有重要意義。