不同程度宮頸病變患者陰道微生物群落差異比較分析

梁文麗，謝愛香

(1．濮陽市中醫醫院婦產科，河南 濮陽457000；2．濮陽市中醫醫院檢驗科，河南 濮陽 457000)

宮頸癌是我國女性第二常見的惡性腫瘤之一，其發生情況占女性生殖系統惡性腫瘤的第一位，宮頸癌前病變是女性具有癌變可能，但臨床尚未診斷為原位癌的宮頸異常增殖性病變，具有發展為惡性腫瘤的可能，患者長期存在可能會發展為宮頸癌[1-3]。宮頸上皮細胞暴露于陰道女性陰道微環境中，女性陰道微環境對保護其陰道微環境穩定具有至關重要的作用，故臨床醫務人員對陰道微生物在宮頸病變發展過程中是否具有一定作用仍存在疑問，既往研究中對陰道微生態的評價多依靠采集女性陰道分泌物涂片及結合陰道等功能性指標，但臨床工作中會受到多種因素干擾進而影響結果情況[4-8]。本次研究選取濮陽市中醫院婦科42例宮頸病變患者以及同期于濮陽市中醫院進行健康體檢的23例健康女性的臨床資料進行回顧性研究分析，目的在于研究分析不同程度宮頸病變患者陰道微生物群落差異。

1 一般資料與方法

1．1 一般資料 選取 2017年 1月至 2018年 6月濮陽市中醫院婦科42例宮頸病變患者作為研究對象，根據患者宮頸病變情況進行分組，其中22例宮頸上皮內瘤變Ⅰ級患者為觀察A組，其20例宮頸上皮內瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者作為觀察B組；采取同期于濮陽市中醫院進行健康體檢的23例健康女性作為對照組。其納入標準為：⑴觀察組兩組患者診斷符合 《宮頸病變以及宮頸癌檢查教程》[9]中對宮頸上皮內瘤變診斷標準；⑵所有觀察人員為已婚女性；⑶所有觀察人員月經規律；⑷近1個月內無使用抗生素以及陰道沖洗藥物；⑸所有觀察人員近1周陰道無異常分泌物及流血；⑹所有觀察人員近1周無性生活；⑺所有觀察人員或家屬知情并簽署知情同意書，排除標準：⑴存在泌尿生殖器炎癥；⑵存在糖尿病、心、肝等內科疾病；⑶具有長期使用皮質類固醇以及免疫抑制劑史。觀察組A組患者平均年齡為41．24±1．27歲，觀察組B組患者平均年齡為42．07±1．25歲，對照組患者平均年齡為41．54±1．31歲；比較三組患者平均年齡等一般資料差異不具有統計學意義（P＞0．05），具有可比性。本次研究內容經濮陽市中醫院倫理學會批準執行。

1．2 方法 采用無菌棉拭子于所有研究人員陰道后穹窿處轉動15s左右，待無菌棉拭子充分吸收研究人員陰道內分泌物后放入干燥無菌試管中，采集好的標本結束后放置于冰箱保存，用于細菌基因組提取。細菌基因DNA提取試劑盒采用德國進口試劑盒，其具體操作按照試劑盒說明書進行操作，提取結束后放置于冰箱進行保存。本次研究采用稀釋提取的基因組為模板，其引物序列見表1。PCR產物使用瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，并根據其PCR產物濃度進行等量混合。本次研究生物信息學分析選擇MiSeq軟件的默認指數對其原始測序數據進行測定，并去除其接頭數列以及低質量數列的預處理，利用其命令進行對標本菌群的主成分分析以及不同組間群落結構以及菌群差異。

1．3 統計學方法 所有數據資料均采用SPSS 20．0軟件對數據進行統計分析。計量資料數據行正態性和方差齊性檢驗，用均數±標準差（x±s）的形式表示，計數資料采用例數（%）的方式表示。組間計量資料比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗。P＜0．05為差異具有統計學意義。

2 結果

2．1 比較觀察A、B兩組與對照組多樣性指數差異比較三組患者辛普森指數以及香農指數差異不具有統計學意義（P＞0．05）；比較三組患者 Chao 指數以及ACE指數差異具有統計學意義 （P＜0．05）；觀察A組患者Chao指數以及ACE指數明顯高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0．05）；觀察 B 組患者Chao指數以及ACE指數與對照組比較差異無統計學意義（P＞0．05）；見表 2。

表2 比較觀察A、B兩組與對照組多樣性指數差異

2．2 比較三組患者菌群結構 檢測三組患者菌群結構共23個菌門，其中對照組患者陰道菌群323080為厚壁菌門組成，占78．69%，65692為放線菌門，占16%；剩余 21個菌門占 5．31%（21801）；觀察 A 組厚后壁菌門組成比例降低為254719，占64．86%，放線菌門增多至108823，占27．71%；剩余21菌門占比提高至29140，占7．43%；觀察B組患者陰道菌門、菌屬情況與對照組分布情況基本一致。觀察B組與對照組均為以乳酸桿菌為主，存在256376，占比71．80%，加德納菌屬占比 12．91%，為 46091，奇異菌屬僅占比3．29%，剩余菌屬為普雷奧、奇異以及斯尼斯菌等，占比為12．00%；觀察A組中，乳酸桿菌屬含量下降至220945，占比56．26%；加德納菌屬上升至 76974．占 19．60%，其奇異菌屬含量上升為30240，占7．7%剩余菌屬為普雷奧、奇異以及斯尼斯菌等，占比為 16．44%．見圖 1、圖 2。

圖1 三組患者菌門占比情況餅狀圖

2．3 菌群類型 陰道菌群通常分為4種，其中分別以卷曲乳酸桿菌、加氏乳酸桿菌以及惰性乳酸桿菌為優勢菌，而各種厭氧菌組成的陰道菌群Ⅳ，比較三組患者陰道菌群類型差異無統計學意義 （P＞0．05）；見表 3。

表3 比較三組患者陰道菌群類型

3 討論

宮頸癌是目前病因明確的婦科惡性腫瘤，與高危型人乳頭瘤病毒的持續感染相關，但由高危型人乳頭瘤病毒發展為宮頸癌需要經歷較為漫長且可逆轉的癌前病變期，雖在現代醫療水平下對于導致宮頸癌前病變進展的原因尚不明確，但由有部分報道表明陰道微生態的組成以及變化與宮頸癌前病變的進展具有一定相關關系[10-14]。采用傳統的細菌培養對女性進行鑒定特異性細菌對多樣性陰道微生態菌落上不全面[15，16]。隨著現代醫療水平以及科技的不斷發展，傳統生物學技術耗時長、工作量大且不能完整反映等缺點逐一顯現，而新興技術具有成本低、操作簡單等特點逐漸廣泛運用于臨床中，使關于不同程度宮頸病變患者引導微生物群落差異情況得到進一步研究[15，16]。

比較三組患者Chao指數以及ACE指數差異具有統計學意義（P＜0．05）；觀察 A 組患者 Chao 指數以及ACE指數明顯高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0．05）；健康女性陰道菌群主要由厚壁菌門組成，以乳酸桿菌為主，與本次研究中結果一致，本次研究中檢測三組患者菌群結構共23個菌門，其中對照組患者陰道菌群323080為厚壁菌門組成，占 78．69%，65692 為放線菌門，占 16%；剩余 21個菌門占5．31%（21801）；觀察A組后壁菌門組成比例降低為254719，占64．86%，放線菌門增多至108823，占 27．71%；剩余 21菌門占比提高至29140，占7．43%；觀察B組患者陰道菌群與對照組分布情況基本一致。通常情況下，女性陰道微生物中乳酸桿菌為主，其對保持女性陰道微生態平衡以及抑制病原微生物生長、增強女性陰道局部抗感染、抗腫瘤能力具有至關重要的意義。乳酸桿菌能夠保護女性陰道黏膜上皮細胞不會受到病原菌的黏附，且還能夠分泌出形成生物膜的物質，進而達到組織病原菌黏附以及侵襲的目的。觀察B組與對照組均為以乳酸桿菌為主，存在256376，占比71．80%，加德納菌屬占比 12．91%，為 46091，剩余菌屬為普雷奧、奇異以及斯尼斯菌等；觀察A組中，乳酸桿菌屬含量下降至220945，占比56．26%；加德納菌屬上升至76974．占19．60%，其奇藝異菌屬含量上升為30240，占7．7%；本次研究中乳酸桿菌在觀察A組患者中的標本中較少，說明乳酸桿菌數量下降會造成女性陰道微生態平衡受到破壞以及女性患者陰道微環境的變化，進而造成宮頸上皮對高危型人乳頭瘤病毒的易感性增加，而觀察B組乳酸桿菌含量與健康女性無差異說明宮頸上皮內瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者病變與乳酸桿菌相關意義不大。本次研究中發現奇異菌屬在觀察兩組中出現明顯增多，既往有研究發現宮頸病變風險增加與患者宮頸菌群中奇異菌屬上升具有一定關系，奇異菌在一定程度上能夠刺激患者陰道上皮細胞的固有免疫，故奇異菌能夠參與到宮頸病變的過程中。比較三組患者陰道菌群類型差異無統計學意義（P＞0．05）；根據本次研究菌落類型結果可知大多數患者檢驗結果提示為惰性乳酸桿菌以及卷曲乳酸桿菌，其中加氏乳酸桿菌為主的菌群類型較少。

綜上所述，不同宮頸病變患者陰道菌群多樣性以及類型與健康女性相似，但宮頸上皮內瘤變Ⅰ級患者陰道部分微生物菌類群豐度增加。