LC/MS/MS法測定白酒中氨基甲酸酯類農殘研究

何開蓉，程鐵轅，張瑩，夏于林

（1.食品安全檢測四川省重點實驗室，四川 成都 610000；2.國家酒類檢測重點實驗室，四川 宜賓 644000）

中國白酒是中華民族傳統飲品，歷史悠久，質量可靠，深受國內民眾喜愛。隨著社會發展和民眾關注健康意識以及食品安全意識的日益提升，無論是政府監管機構，或是高校等科研院所，還是白酒生產企業，均對白酒質量安全比以往更加重視，加大了對白酒產品在安全衛生方面的研究力度，有很多研究成果呈現[1-6]。農藥殘留是食品安全檢測分析領域重點關注方向，液相色譜串聯質譜聯用儀是目前較為先進的檢測儀器，當前采用液相色譜串聯質譜法檢測食品中農藥殘留相關研究較多[7-20]，農藥殘留中的氨基甲酸酯類農藥因高效廣譜選擇性強而在農作物中應用廣泛，本文通過建立液相色譜三重四極桿串聯質譜聯用儀測定白酒中氨基甲酸酯類8 種農藥殘留定量分析方法，以期能夠更好的掌握白酒產品在上述8 種氨基甲酸酯類農藥殘留方面的質量安全情況。

1 試驗材料與方法

1.1 樣品、儀器和試劑

1.1.1 樣品

選取宜賓市售白酒3 個廠家不同批次的樣品共10 份。

1.1.2 試驗儀器

Agilent6410 三重四級桿串聯質譜儀（配電噴霧離子源）：美國安捷倫公司；2K15 離心機（4 000 r/min）：德國SIGMA 公司；Turbo Vap LV 氮吹儀：德國 Biotage；WH-3 渦旋混合儀：滬析分析儀器廠有限公司。

1.1.3 試劑

8 種農藥標準品：德國Dr.Ehrenstorfer 公司，純度大于99%；甲醇、乙酸均為色譜純：迪馬公司。

混合標準工作溶液的制備：吸取適量體積的每種標準儲備液于一個容量瓶中，用甲醇稀釋成10 μg/mL的混合標準工作中間溶液，避光冷藏保存。

標準工作液的制備：吸取適量的混合標準工作中間液，分別配制成濃度為 25、50、100、200 ng/mL 的標準系列。

1.2 試驗方法

蒸餾酒樣品過0.22 μm 濾膜后直接進樣上機。

1.3 試驗條件

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18，1.8 μm，50 mm×4.6 mm（內徑）

流速：0.4 mL/min；

子空間投影方法的關鍵問題是要找到干擾子空間的一組基。因為只需分析得出張成干擾子空間的基，所以除了傳統的利用數據協方差矩陣特征分解來求解之外，還有其它更為簡便的子空間分析方法。

進樣量：5 μL。

流動相：A：0.1%乙酸；B：甲醇；流動相梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure

1.3.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源；掃描模式：正離子模式；檢測方式：多反應監測；離子源溫度：350 ℃；毛細管電壓：4 000 V；霧化器流量：11 L/min；霧化器壓力：35 psi；霧化氣、氣簾氣、輔助氣、碰撞氣均為高純氮氣；監測離子對（m/z）和其他參考條件見表2。

1.3.3 液相色譜-質譜確證

樣品在上述液相色譜-串聯質譜條件下進行測試，如果檢出的色譜峰保留時間與標準溶液中某種目標物相一致，并且所選擇的兩對離子對及豐度比一致，則可判定為樣品中存在這種農藥殘留。定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差見表3。

表2 質譜參數Table 2 Mass parameters

1.3.4 定量測定

本方法采用定量離子碎片的峰面積外標標準曲線法定量測定。

表3 定性確證時相對離子豐度的最大允許誤差表Table 3 Maximum allowable misalignment of the relative ion abundance in the qualitative confirmation

1.3.5 結果計算和表述

式中：x 為試樣中被測組分的含量，mg/kg；c 為從標準曲線上得到的被測組分溶液濃度，μg/mL；v 維生素C 樣品溶液最終定容體積，mL；m 為樣品溶液所代表的試樣質量，g。

2 結果與討論

2.1 測定條件的優化

2.1.1 液相梯度洗脫程序的建立

建立梯度洗脫程序時，通過調整洗脫時間，同時對流動相甲醇和0.1%乙酸的比例進行優化，盡量使得8 種化合物的分離效果最好，最終確定的梯度洗脫程序見表1。

2.1.2 質譜條件的選擇

在確定了液相色譜的條件后，為進一步提高靈敏度和分離效果，采用電噴霧離子源，在正離子監測模式下，逐一優化離子源溫度（Gas Temp），霧化器流量（Gas Flow），監測[M+H]+和[M+Na]+，使之響應值達到最佳。在確定上述條件后，在多反應監測模式下，再分別優化每一種目標物的碎裂電壓和碰撞電壓，從而得到最強的離子碎片信息。具體結果見表2。

2.2 方法的線性關系及檢出限

在上述試驗條件下，混合標準工作系列溶液進行測試，以組分峰面積對其質量濃度做圖，得到各組分的標準曲線方程，各組分在0.025 mg/kg～0.2 mg/kg 范圍內線性關系良好。各組分保留時間、相關系數、檢出限見表4。

2.3 氨基甲酸酯類農藥加標回收率、精密度試驗

分別在白酒樣品中添加一定濃度的8 種農藥混標，使各樣品中農藥含量均為20μg/L，且重復做5 次，按照前述的分析條件進行回收率試驗。回收率和精密度見表5。

表4 氨基甲酸酯類農藥及其他農藥保留時間、標準曲線方程與檢出限Table 4 The retention time，the standard curve equation and the detection limit of the amino acid ester pesticides and other pesticides

表5 蒸餾酒樣品加標回收率和精密度試驗測定結果Table 5 Experimental results of recovery rate and accuracy of distilled liquor sample

由表5可知，在蒸餾酒中的回收率為87.6 %～100.0%，精密度為0.89%～5.6%。回收率和精密度數據表明：本測試方法可以滿足克百威等8 種氨基甲酸酯類農殘的檢測要求。

2.4 儀器的精密度

為考察該儀器精密度，將濃度為80 μg/L 的混合標準溶液重復進樣8 次，測試各標樣化合物峰面積和保留時間的重現性，試驗結果見表6。由表6可知：測試過程中，儀器精密度良好，能夠滿足試驗要求。

2.5 方法的應用

該分析方法建立后，采用此方法測試了10 份宜賓地區所產的濃香型白酒樣品，測試結果顯示上述8 種農殘均是未檢出，這說明酒企對釀酒原料中上述8 種農殘控制的非常好，也可能是經過白酒發酵蒸餾過程之后，上述8 種農殘量損失變少，可以通過對同一批次釀酒專用糧及蒸餾出的白酒進行分析驗證。

表6 精密度測試結果Table 6 Precision test results

3 結論

本文首次建立了同時檢測蒸餾白酒中8 種氨基甲酸酯類農藥（抗蚜威、惡蟲威、克百威、仲丁威、甲萘威、撲滅威、多菌靈、滅多威）農藥殘留的液相色譜三重四極桿串聯質譜聯用儀定性鑒別和定量測試方法，8 種農藥殘留的方法檢出限為 0.5 μg/kg～10 μg/kg。8 種農藥殘留在蒸餾白酒中加標回收率為87.6%～100.0%，精密度為0.89%～5.6%，方法的精密度、準確度均能滿足測試要求。為深入研究釀酒專用糧中農藥殘留在濃香型白酒發酵過程中的遷移變化規律建立了方法基礎。