包頭市孕前及孕早期婦女葉酸代謝障礙相關(guān)基因位點(diǎn)分布研究

張春光，朱 兵，張曉娟，劉 蕾，楊文亮，郭志利*

（包鋼職工第三醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000）

一般情況下，民族、地區(qū)的差異性，研究對(duì)象、方法的不同，會(huì)致使人群的MTHFR與MTRR基因多態(tài)性的分布也具有較大的差異性，表明出民族、區(qū)域的不同?，F(xiàn)如今，按照分子醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，在葉酸代謝時(shí)，甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）、亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）被作為關(guān)鍵的酶，編碼該類酶的基因具有多態(tài)性。本文主要是對(duì)包頭市孕前及孕早期婦女葉酸代謝障礙相關(guān)基因位點(diǎn)分布特點(diǎn)的研究，確保此地區(qū)婦女個(gè)體化的孕期保健有一個(gè)科學(xué)的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選擇的是2018年1月～2018年9月在內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市包鋼職工第三醫(yī)院展開(kāi)孕前或者孕期檢查的女性當(dāng)作分析對(duì)象。將受檢者口腔粘膜細(xì)胞采集起來(lái)，并且展開(kāi)基因型檢測(cè)，基于實(shí)際的樣本要求，得到有效樣本294例，受檢女性平均年齡為27.15±3.12歲，漢族276人，回族4人，滿族3人，蒙古族11人，所有患者在檢測(cè)前均簽署相關(guān)的知情同意書(shū)。

1．2

借助有關(guān)的軟件來(lái)分析MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G基因多態(tài)性，確定對(duì)各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。294例患者都借助棉拭紙對(duì)患者的口腔黏膜細(xì)胞進(jìn)行采集，借助柱式質(zhì)粒DNA 試劑盒少量抽提，同時(shí)提取樣本DNA Taqman-MGB 探針（表1）實(shí)施熒光定量PCR檢測(cè)MTHFR C677TA1298C、MTRR A66G的基因多態(tài)性的設(shè)備試劑（美國(guó)ABI公司），總體積10 μL/反應(yīng)體系，涉及了濃度在20 ng/μL的DNA模板1 μL，2 x Taqman Universal MasterMix 5μL，20 x Taqman-MGB 探針0.5 μL，去離子水3.5 μL。95℃下反應(yīng)10 min，92℃ 15 s、60℃ 1 min擴(kuò)增20個(gè)循環(huán)，89℃15s，60℃ 90 s擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)反應(yīng)結(jié)束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上對(duì)樣品孔中的終點(diǎn)熒光讀取,借助Hardy-Weinberg平衡分析[8]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 16.0軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，通過(guò)P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；（±s）代表計(jì)量資料，并且借助t實(shí)施檢驗(yàn)。

表1 Taqman-MGB 探針?biāo)谖恢?/p>

2 結(jié) 果

包頭市女性MTHFR、MTRR基因多態(tài)性研究入組人群的數(shù)據(jù)和我國(guó)總體報(bào)道的數(shù)據(jù)分別展開(kāi)對(duì)比，和南方區(qū)域?qū)Ρ鹊玫揭韵陆Y(jié)果。

2.1 和全國(guó)及南方區(qū)域女性MTHFR C677T基因型分布（見(jiàn)表2）對(duì)比

包頭市MTHFR C677T純合突變TT型與全國(guó)及南方區(qū)域相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其等位基因C和T的分布與全國(guó)及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 不同地區(qū)女性MTHFRC677T基因多態(tài)性分布對(duì)比

2.2 與全國(guó)及南方區(qū)域女性MTHFR A1298C基因型分布（見(jiàn)表3）對(duì)比

包頭市女性MTHFR A1298C純合突變型CC與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 不同地區(qū)女性MTHFR A1298C基因多態(tài)性分布對(duì)比

2.3 全國(guó)及南方區(qū)域女性MTRR A66G基因型分布分布（見(jiàn)表4）

包頭市MTHFR A66G純合突變GG型與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 不同地區(qū)女性MTRR A66G基因多態(tài)性分布對(duì)比

3 討 論

按照葉酸代謝障礙機(jī)制可以證實(shí)，在葉酸代謝時(shí)5-甲基四氫葉酸有著十分關(guān)鍵的作用，該葉酸的被視為同型半胱氨酸轉(zhuǎn)換為甲硫氨酸的基礎(chǔ)之一，并且其也被作為甲基在這兩者之間的重要傳遞[11.12]。在葉酸攝入量未變化的前提下，受到MTHFR、MTRR等會(huì)控制5-甲基四氫葉酸的量，換句話說(shuō)MTHFR、MTRR酶活性與5-甲基四氫葉酸的產(chǎn)量呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系。若是MTRR基因突變會(huì)制約酶活性，降低甲硫氨酸合成酶活性，對(duì)同型半胱氨酸的轉(zhuǎn)化、甲基的傳遞均有著負(fù)面影響[13]。另一方面，充分的的5-甲基四氫葉酸被視為確保血液中同型半胱氨酸水平的關(guān)鍵基礎(chǔ)，是對(duì)體內(nèi)甲基化程度有效的基石。

MTHFR基因包含了C677T基因、A1298C基因，另一方面，對(duì)酶的活性改變來(lái)說(shuō)，MTRR中的A66G基因情況扮演關(guān)鍵的角色，與孕早期婦女的本身葉酸代謝障礙息息相關(guān)，最大程度上降低了MTR酶活性、MTHFR酶活性[5-8]。在葉酸攝入量不改變的狀據(jù)，依據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)表明，和正常型CC和雜合突變型CT型相對(duì)比，MTHFR 677TT型會(huì)相應(yīng)的下降，降MTHFR酶活性。另一方面，1298AC型、MTHFR 677CT型存在較大的協(xié)同增加效應(yīng)，和正常酶活力相比較來(lái)說(shuō)，攜帶該基因分布特征的人群MTHFR酶活力獲得下降[13]。針對(duì)對(duì)孕婦細(xì)胞內(nèi)葉酸的濃度而言，MTHFR C677T基因分型會(huì)造成制約關(guān)系，在同樣條件下，和正?；?qū)Ρ葋?lái)說(shuō)，TT型以及CT型婦女細(xì)胞內(nèi)葉酸含量往往較低[7]，但是對(duì)葉酸的需求孕期婦女大于普通人,，鑒于此，在防止出生缺陷的出現(xiàn)過(guò)程中，該基因位點(diǎn)至關(guān)重要。在294例樣本中，未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組發(fā)現(xiàn)只有32.00%，低風(fēng)險(xiǎn)組只有7.00%，但是中風(fēng)險(xiǎn)為35.00%顯著的高于未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組，高風(fēng)險(xiǎn)組為26. 00%，給予基因型對(duì)葉酸進(jìn)行補(bǔ)充，可確保出生缺陷率 MTHFR、MTRR基因型得到下降，與出發(fā)生的出生缺陷有著直接的關(guān)系，還和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)明顯有關(guān)[8-9]，另一方面，葉酸的不足也被作為視為引發(fā)新生兒出生缺陷的關(guān)鍵因素之一?，F(xiàn)如今，在孕前3個(gè)月至孕期前3個(gè)月，我國(guó)建議育齡婦女補(bǔ)服葉酸，劑量保證在400 mg/d，然而依據(jù)相關(guān)的研究證實(shí)，MTHFR和MTRR基因分布很大程度上具體一定的差異性，所以有效的掌握基因的地域分布特征很關(guān)鍵。

本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，和全國(guó)及南方區(qū)域女性MTHFR C677T基因型分布（表）相對(duì)比而言，包頭市MTHFR C677T純合突變TT型與全國(guó)及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其等位基因C和T的分布與全國(guó)及南方區(qū)域相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與全國(guó)及南方區(qū)域女性MTHFR A1298C基因型分布（表3）對(duì)比來(lái)說(shuō)，包頭市女性MTHFR A1298C純合突變型CC與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其等位基因A和C的分布與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。全國(guó)及南方區(qū)域女性MTRR A66G基因型分布分布（表4）對(duì)比而言，包頭市MTHFR A66G純合突變GG型與全國(guó)及南方區(qū)域女性相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。由此可知，從北方地區(qū)到南方地區(qū)，MTHFR 677TT純合突變型分布頻率大幅度下降[14]。新生兒神經(jīng)管不足與高同型半胱氨酸息息相關(guān)，被視為一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素[15]。各地區(qū)基因分布特征出現(xiàn)不同，很大程度上是由于人群位于的生活環(huán)境，人們的飲食生活習(xí)慣的差異性，若是女性的葉酸檢測(cè)為中度、高度風(fēng)險(xiǎn)，需強(qiáng)化對(duì)膳食葉酸、葉酸制劑的補(bǔ)充計(jì)量，確保孕產(chǎn)期疾病、新生兒出生缺陷大大的降低，所以，給予各地不同人群的遺傳特征，借助構(gòu)建區(qū)域性的基因多態(tài)性分布數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)各地地域特點(diǎn)制定區(qū)域性的衛(wèi)生政策充分的了解，給予行之有效的合理依據(jù)。