從生長(zhǎng)年限和入藥部位探討厚樸凈制的意義＊

袁金鳳，朱林峰，彭詩(shī)濤，王靖越，柴沖沖，劉 娜，李 飛

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 102488）

中藥材凈制是中藥炮制的第一道工序，是中藥材制成飲片前必經(jīng)的基礎(chǔ)工作。幾乎每種藥材使用前均需進(jìn)行凈制處理。凈制是中藥材選取規(guī)定的藥用部位，除去非藥用部位、雜質(zhì)及霉變品、蟲(chóng)蛀品、灰屑等，使其達(dá)到藥用凈度標(biāo)準(zhǔn)的炮制方法。漢代《金匱玉函經(jīng)》記載：藥物“或須皮去肉，或去皮須肉，或須根去莖，又須花須實(shí)，依方揀采、治削，極令凈潔”[1]，表明供藥用的植物的部位是有要求的，需要按照方劑的規(guī)定進(jìn)行加工處理。此后歷代醫(yī)籍中又有不少記載，歸納起來(lái)，不外是去除雜質(zhì)，去除質(zhì)次的非藥用部位，去除有毒副作用的部位，分離不同的藥用部位等，達(dá)到藥用的凈度標(biāo)準(zhǔn)，利于進(jìn)一步的切制和炮炙，保證臨床用藥的安全和有效[2]。

厚樸始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品[3]，其藥用歷史悠久，是傳統(tǒng)的芳香化濕藥，為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、枝皮及根皮。厚樸苦、辛、溫，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效，常用于濕滯傷中、脘痞吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳等[4]。厚樸既可除無(wú)形之濕滿，又可消有形之實(shí)滿，為消除脹滿之要藥。傳統(tǒng)上稱產(chǎn)于湖北、四川、陜西西南部的厚樸藥材為“川樸”，凹葉厚樸主產(chǎn)于安徽、浙江西部、江西、福建、湖南南部等地，習(xí)稱“溫樸”，傳統(tǒng)上認(rèn)為“川樸”質(zhì)量較好，其中湖北恩施所產(chǎn)厚樸，色紫、皮厚、質(zhì)細(xì)、油性重、香味濃烈者、斷面棕色、內(nèi)表深紫色，又稱“紫油厚樸”，是地道名優(yōu)藥材，質(zhì)量最佳[5]。

厚樸中的主要化學(xué)成分為酚類(lèi)、揮發(fā)油、生物堿類(lèi)等成分[6-9]，現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明：厚樸具有抑菌、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用，現(xiàn)已證明以厚樸酚與和厚樸酚為代表的酚類(lèi)成分是其主要的藥效成分。傳統(tǒng)加工炮制要求厚樸需去除粗皮，歷代本草中皆有記載，如梁代《本草經(jīng)集注》載厚樸“皆削去上虛軟甲錯(cuò)處，取里有味者秤之”，宋代《太平惠民和劑局方》記載“凡使，先刮去粗皮，令見(jiàn)赤心”[10]，明代《醫(yī)學(xué)入門(mén)》載“……如不去皮，耗人元?dú)狻盵11]。《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部厚樸飲片炮制項(xiàng)下也明確規(guī)定：厚樸刮去粗皮。有文獻(xiàn)記載厚樸粗皮堅(jiān)韌，容易損刀，刮去外皮便于切片和煎出有效成分[12]，現(xiàn)代研究認(rèn)為厚樸粗皮中所含厚樸酚、和厚樸酚兩種有效成分含量極少，去皮的目的主要是去除雜質(zhì)及非藥用部位，提高臨床療效。

目前厚樸凈制的相關(guān)研究多集中在凈制前后厚樸酚與和厚樸酚的含量變化上，如楊紅兵等人對(duì)生長(zhǎng)年限在20年以下的厚樸干皮部位去皮前后的兩種酚類(lèi)成分含量進(jìn)行研究，認(rèn)為生長(zhǎng)年限在20年以下的厚樸干皮部位去除粗皮后并不能提高成品質(zhì)量，反而會(huì)造成成分損失，加之人力成本高漲，就經(jīng)濟(jì)效益而言建議取消去皮工序，在實(shí)際工作中，只需將表面泥土、地衣或菌斑刮除干凈即可[13]；王智鵬等人通過(guò)兩種酚類(lèi)成分含量、結(jié)合胃排空實(shí)驗(yàn)及小腸推進(jìn)率實(shí)驗(yàn)對(duì)厚樸干皮部位帶皮厚樸、去皮厚樸、厚樸粗皮進(jìn)行比較研究，結(jié)果粗皮中厚樸酚、和厚樸酚的含量極少，藥理作用方面厚樸粗皮與去皮厚樸之間無(wú)顯著性差異，故認(rèn)為厚樸去皮是一種商品規(guī)格，入藥可不去皮[14]。鑒于目前關(guān)于厚樸凈制的研究多集中于干皮部位，未見(jiàn)不同年限厚樸枝皮、根皮部位凈制的研究，且市售厚樸藥材多存在生長(zhǎng)年限不明確的問(wèn)題，故本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)比較已知生長(zhǎng)年限及市售未知生長(zhǎng)年限厚樸的干皮、枝皮、根皮等不同入藥部位的厚樸酚、和厚樸酚兩種酚類(lèi)成分含量的差異及粗皮所占比例，探討厚樸凈制去皮的意義，為中醫(yī)臨床的合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀（包括2695四元梯度泵，在線脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，2489紫外檢測(cè)器，Empower色譜工作站）；超聲波清洗器（SB25-12DTDN型，寧波新芝生物科技股份有限公司）；循環(huán)多用真空泵（SHB-3型，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；BT-25S電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；BS210S電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

厚樸酚（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20511，純度≥98%）、和厚樸酚（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20498，純度≥98%）；已知生長(zhǎng)年限的厚樸原藥材2017年5月采自湖北省恩施市新塘鄉(xiāng)雙河委員會(huì)，選取不同樹(shù)齡（10，15，20，25，30，40年）厚樸樹(shù)的干皮、枝皮及根皮進(jìn)行采集，未知生長(zhǎng)年限的市售厚樸原藥材由湖北金貴中藥飲片有限公司提供，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院楊瑤珺教授鑒定均為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.的干皮、枝皮及根皮；甲醇為色譜純（美國(guó)Fisher公司）；其余試劑均為分析純（北京化工廠）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

取上述已知不同生長(zhǎng)年限及未知生長(zhǎng)年限的干皮、枝皮、根皮等不同部位的厚樸原藥材，分別稱重，刮去粗皮，得到不同部位的粗皮和去粗皮厚樸，稱重，計(jì)算粗皮比例。觀察干皮、枝皮、根皮去皮前后的性狀。將粗皮、去粗皮厚樸及帶粗皮厚樸分別粉碎，過(guò)篩備用。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（78:22）；檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm；柱溫30℃；流速1 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL；理論塔板數(shù)按厚樸酚峰計(jì)算不低于3800。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品8.31 mg、6.11 mg置于5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得厚樸酚與和厚樸酚的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

分別取干皮、枝皮、根皮等不同部位的帶粗皮厚樸、去粗皮厚樸、厚樸粗皮粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，稱定重量，超聲處理30min（100W，50Hz），放至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.2.2項(xiàng)下厚樸酚、和厚樸酚混合對(duì)照品溶液0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2 mL置25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得不同濃度的對(duì)照品溶液，分別精密吸取混合對(duì)照品溶液及上述稀釋后不同濃度的混合對(duì)照品溶液各10 μL，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），厚樸酚、和厚樸酚濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。厚樸酚回歸方程Y=13 624.80X+7919.38，r=1.000 0，和厚樸酚回歸方程Y=14 692.58X+12 970.14，r=1.000 0，結(jié)果表明厚樸酚在2.444 μg-1222 μg，和厚樸酚在3.32 μg-1660 μg進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一厚樸供試品溶液（按2.2.3項(xiàng)下制備），按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，記錄兩種酚類(lèi)成分的峰面積，計(jì)算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為0.4%和0.2%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一厚樸供試品溶液（按2.2.3項(xiàng)下制備），按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別在0，2，4，8，12，24 h各進(jìn)樣一次，每次10 μL，記錄兩種酚類(lèi)成分峰面積，計(jì)算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1.7%和1.1%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一厚樸供試品粉末，精密稱定6份，按2.2.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄兩種酚類(lèi)成分峰面積，計(jì)算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1.3%和1.5%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的厚樸凈藥材粉末5份，每份約0.1 g（厚樸酚含量2.05 mg·g-1，和厚樸酚含量1.326 mg·g-1），精密稱定，分別精密加入對(duì)照品適量，照2.2.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定厚樸酚與和厚樸酚的峰面積，厚樸酚平均回收率為98.52%，RSD為2.7%，和厚樸酚平均回收率為100.63%，RSD為2.9%（表1，2）。

2.3 樣品測(cè)定

2.3.1 樣品外觀性狀（表3）

2.3.2 含量測(cè)定結(jié)果

取2.2.3項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算各供試品中厚樸酚、和厚樸酚的含量以及這兩種酚類(lèi)成分的總量，厚樸酚與和厚樸酚對(duì)照品色譜圖、樣品色譜圖（圖1），已知生長(zhǎng)年限的厚樸含量測(cè)定結(jié)果（表4），未知生長(zhǎng)年限的厚樸含量測(cè)定結(jié)果（表5）。

表2 和厚樸酚的加樣回收率

表3 不同入藥部位樣品凈制去皮前后外觀性狀比較

3 結(jié)果與討論

在凈制過(guò)程中對(duì)不同入藥部位凈制去皮的難易程度及去皮前后的外觀性狀進(jìn)行比較，樣品外觀性狀結(jié)果（表3），去皮難易程度方面：厚樸干皮部位和枝皮部位的粗皮較易去除，根皮部位的粗皮較難去除。氣味方面：厚樸各部位的樣品去除粗皮后有大量濃郁的香氣逸出，尤以根皮部位的香氣最為明顯。由表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果得，同一生長(zhǎng)年限的厚樸，其不同藥用部位的厚樸酚、和厚樸酚的含量差異較大，根皮部位中厚樸酚、和厚樸酚的含量顯著高于干皮和枝皮部位，約為干皮、枝皮部位含量的2-15倍。張丹等[15]對(duì)重慶產(chǎn)厚樸不同部位厚樸酚與和厚樸酚的成分分布規(guī)律進(jìn)行研究，結(jié)果厚樸不同部位的兩種酚類(lèi)成分含量差異較大，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致，因此建議臨床用藥時(shí)厚樸應(yīng)按入藥部位不同區(qū)分等級(jí)，以保證臨床療效。

圖1 厚樸高效液相色譜圖

根皮部位厚樸酚與和厚樸酚含量最高，而干皮與枝皮部位中兩種酚類(lèi)成分的含量高低則與其生長(zhǎng)年限有關(guān)，生長(zhǎng)年限在10-15年的厚樸，不同部位兩種酚類(lèi)成分的含量分布規(guī)律為：根皮＞枝皮＞干皮；生長(zhǎng)年限在20-40年的厚樸，不同部位兩種酚類(lèi)成分的含量分布規(guī)律為：根皮＞干皮＞枝皮。厚樸藥材中粗皮所占的比例與生長(zhǎng)年限和入藥部位有關(guān)，不同生長(zhǎng)年限厚樸枝皮部位的粗皮所占比例均在5.09%-6.66%之間；厚樸根皮部位粗皮所占比例呈現(xiàn)隨生長(zhǎng)年限增長(zhǎng)而增加的趨勢(shì)，粗皮所占比例4.42%-10.84%；厚樸干皮部位中，生長(zhǎng)年限在10-25年的厚樸，其粗皮所占比例在10%以下，生長(zhǎng)年限在30-40年者粗皮所占比例增加為20%左右（表4）。

市售厚樸藥材生長(zhǎng)年限多不明確，故收集了市售未知生長(zhǎng)年限的厚樸藥材與已知生長(zhǎng)年限的厚樸藥材進(jìn)行比較，探討厚樸凈制去皮的科學(xué)性，已知生長(zhǎng)年限、不同藥用部位的厚樸藥材凈制前后兩種酚類(lèi)成分含量均存在明顯差異，兩種酚類(lèi)成分含量變化規(guī)律均為：去皮厚樸＞帶皮厚樸＞厚樸粗皮，市售未知年限、不同藥用部位的厚樸藥材凈制后兩種酚類(lèi)成分含量變化規(guī)律與已知年限的變化規(guī)律一致（表4、表5）。且?guī)ず駱恪⑷テず駱阒袃煞N酚類(lèi)成分含量均明顯高于厚樸粗皮，凈制去皮后兩種酚類(lèi)成分含量較凈制前明顯增加，證明厚樸凈制去粗皮具有一定的科學(xué)道理。

表4 已知生長(zhǎng)年限、不同部位樣品兩種酚類(lèi)成分含量mg·g-1及粗皮比例%（n=3）

《本草衍義》中記載：“厚樸不以姜制，則棘人喉舌”[16]，厚樸生品辛辣峻烈，對(duì)咽喉有強(qiáng)烈的刺激性，一般不生用，炮制后不僅能降低對(duì)咽喉的刺激性，還能增強(qiáng)寬中和胃的作用。目前厚樸中刺激性成分尚不明確，凈制過(guò)程對(duì)后續(xù)姜炙過(guò)程是否有影響還有待于進(jìn)一步研究。再者厚樸是傳統(tǒng)的芳香化濕藥，凈制去皮過(guò)程中香氣逸散可能會(huì)造成芳香性成分的損失，鑒于中藥在臨床上的療效是多種成分綜合的作用，厚樸凈制是否需要去皮僅以其對(duì)厚樸酚與和厚樸酚的含量影響及粗皮所占的比例來(lái)確定似有不足，尚需考慮凈制對(duì)厚樸中其他成分的影響，并結(jié)合藥效研究綜合評(píng)價(jià)厚樸傳統(tǒng)凈制去皮的意義。

表5 未知生長(zhǎng)年限、不同部位樣品兩種酚類(lèi)成分含量mg·g-1及粗皮比例%（n=3）