云南昭通不同產(chǎn)地天麻質控成分的含量測定

馮晉 徐婭玲 孟慶婷 楊瓊英 何芳雁

摘要：目的 以天麻的質控成分天麻素（gastrodin，GAS）及對羥基苯甲醇（p-hydroxybenzyl alcohol，HBA）含量為指標對云南昭通不同產(chǎn)地的天麻進行考察，以確定其最佳產(chǎn)地。方法 選取昭通境內(nèi)彝良小草壩、鎮(zhèn)雄鹽源、威信水田3個產(chǎn)地的烏天麻，用95%乙醇進行回流提取，計算其提取率;采用HPLC分析方法測定天麻醇提取物中質控成分GAS及HBA的含量，進行天麻最佳產(chǎn)地的初步評價。結果 彝良小草壩、鎮(zhèn)雄鹽源、威信水田的天麻醇提取物的提取率分別為：17.9、9.2、10.5%，所含質控成分的總量（GAS+HBA）分別為：0.8119、0.2478、0.2022%。結論 通過分析，云南昭通境內(nèi)的彝良小草壩產(chǎn)地的天麻醇提取物的提取率及質控成分總量均為三者中最高，可認為該地為天麻道地藥材的最佳產(chǎn)地之一。

關鍵詞：天麻;天麻素;對羥基苯甲醇;HPLC;道地性

中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2021）03-0076-04

【Abstract】Objective： To investigate the Gastrodia elata from different producing areas in Zhaotong region， Yunnan， by taking the content of Gastrodin （GAS） and p-hydroxybenzyl alcohol （HBA） as index and to determine which area is the best producing area. Methods： Gastrodia were selected from Xiaocaoba， Yiliang County， Yanyuan， Zhenxiong County and Shuitian， Weixin County in Zhaotong region， and 95% ethanol was used for reflux extraction to calculate the extraction rate. HPLC was used to determine the content of the ingredients GAS and HBA in the quality control of the Gastrodia alcohol extract and the preliminary evaluation of the best producing area of Gastrodia was made. Results： The extraction rates of the Gastrodia alcohol extracts from Xiaocaoba， Yanyuan， and Shuitian were 17.9%， 9.2% and 10.5% respectively， and the total quality control components （GAS+HBA） were 0.8119%， 0.2478% and 0.2022% respectively. Conclusion： The analysis shows the extraction rate and the total quality control components of Gastrodia from Xiaocaoba， Yiliang County in Zhaotong， Yunnan， has the highest content among the three and can be considered Xiaocaoba is one of the best producing area for Gastrodia elata.

【Key words】Gastrodia; Gastrodin; P-hydroxybenzyl alcohol; HPLC; Authenticity

中藥的療效取決于其發(fā)揮作用的有效成分，因此中藥的有效成分是評價其質量的重要指標，是中藥質量控制的核心和臨床療效的保障。中藥的品種、產(chǎn)地、采收季節(jié)及地理條件等多種因素均會對中藥有效成分的含量產(chǎn)生影響，因此了解不同產(chǎn)地的同種藥材有效成分的差異，對臨床合理、安全用藥具有重要意義，對中藥制劑的研究也具有決定性意義。云南昭通被認為是天麻的道地藥材產(chǎn)區(qū)，但云南昭通境內(nèi)多地均種植天麻，不同產(chǎn)地的天麻存在質量差異，為評價昭通天麻的最佳產(chǎn)地，該研究選擇種植量較大的昭通彝良小草壩、鎮(zhèn)雄鹽源、威信水田3個產(chǎn)地，在同一季節(jié)采收的同一年份的烏天麻，以現(xiàn)行質控成分天麻素（gastrodin，GAS）及對羥基苯甲醇（p-hydroxybenzyl alcohol，HBA）為評價指標，參照2015版《中國藥典》“第三部通則0512技術要求”對天麻進行提取，考察其醇提物的提取率，并采用HPLC法檢測天麻醇提取物中GAS及HBA的含量，進行天麻最佳產(chǎn)地的初步評價，為天麻的道地性研究提供依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）。ZDHW調溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）。旋轉蒸發(fā)儀（EYELA）。

1.2 藥品與試劑 天麻素（批號：J1516031），alladdin公司。對羥基苯甲醇（批號：LP30P21），北京百靈威科技有限公司。天麻，云南彝良小草壩、鎮(zhèn)雄鹽源、威信水田產(chǎn)（購于昭通天麻研究所，經(jīng)昭通天麻研究所陳順芳老師鑒定）。無水乙醇（批號：20160310），天津市風船化學試劑科技有限公司。

2 實驗方法

2.1 天麻醇提物的制備 將干燥的天麻藥材打粉后，過2號篩。稱取過篩的干燥天麻粉100 g置于燒瓶內(nèi)，于電熱套內(nèi)90℃下用95%乙醇回流提取3次;乙醇用量分別為：10、8、6倍，提取時間分別為：3、2、1 h，過濾后合并3次乙醇提取液，置于旋轉蒸發(fā)儀內(nèi)濃縮回收乙醇至醇提取物呈黏稠浸膏狀，后將浸膏水浴濃縮至體積質量比為1：1.25。

2.2 不同產(chǎn)地天麻醇提取物含量測定

2.2.1 標準品的制備 精密稱定GAS標準品1.62 mg和HBA標準品1.97 mg，用3%乙腈水溶液作溶劑定容于同一個10 mL容量瓶中，以GAS濃度為基準，通過梯度稀釋，稀釋濃度為0.081、0.0405、0.02025、0.010125 mg/mL，過0.45 μm有機系濾頭后，HPLC進樣檢測。

2.2.2 供試品的制備 精密稱取3個產(chǎn)地的天麻醇提取物：小草壩0.14133 g，鎮(zhèn)雄鹽源0.14326 g、威信水田0.17175 g、分別用3%乙腈水溶液定容于10 mL容量瓶中，超聲溶解10 min，過0.45 μm有機系濾頭后，HPLC進樣檢測。

2.2.3 色譜條件 流動相為乙腈-0.1%冰乙酸水溶液（3：97），流速為1 mL/min，柱溫為25℃，檢測波長270 nm，進樣量為10 μL。

3 實驗結果

3.1 天麻醇提取物的制備 結果顯示：不同產(chǎn)地天麻醇提取物的提取率存在差異，以彝良小草壩產(chǎn)地的天麻醇提取物提取率最高，見表1。

3.2 不同產(chǎn)地天麻醇提取物含量測定

3.2.1 標準品的制備 對羥基苯甲醇（HBA）及天麻素（GAS）標準品的標準曲線，見圖1所示。

3.2.2 天麻醇提取物含量測定HPLC圖譜 不同產(chǎn)地天麻醇提取物含量測定的HPLC圖譜，見圖2所示。

3.2.3 天麻醇提取物中GAS、HBA總含量計算 應用ELISA Calc回歸/擬合計算程序V0.1軟件計算各個提取部位的濃度及含量。結果顯示，云南省彝良小草壩天麻醇提取物中所含質控成分（GAS和HBA）的總量最高，折合天麻生藥所含質控成分的總量也為最高，詳見表2。

4 討論

天麻（Gastrodia elata Blume.）又名赤箭、定風草、獨搖芝，是蘭科多年生草本植物，為我國名貴中藥之一，云南昭通為其原產(chǎn)地。天麻作為國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品之一[1]，除了具有傳統(tǒng)的藥用價值外，被廣泛用于相關食品、保健產(chǎn)品的開發(fā)，市場需求量極大。七十年代末隨著天麻生長習性及規(guī)律的闡明，天麻人工栽培成功，加之野生天麻資源的減少，目前市場上銷售的天麻幾乎都來源于種植天麻[2]。目前天麻在我國多地均有栽種，其中以云南、四川、貴州、陜西等地產(chǎn)量較高[3]。由于不同的氣候條件、栽培措施會導致其生育期不同[4]，這也是導致藥材質量不穩(wěn)定的主要因素，因此對天麻進行道地性研究具有重要意義。

藥物作為防治疾病的特殊商品，其質量的評定標準是與療效相關的物質基礎。GAS、HBA是天麻的主要活性成分，具有腦缺血保護[5]、抗血小板聚集[6-7]、抗炎[8]、改善學習記憶等廣泛的藥理作用[9]。參照我國2015版《中國藥典》中規(guī)定“天麻按干燥品計算，含GAS和HBA的總量不得少于0.25%”的要求，該研究以質控成分GAS和HBA作為考察指標，以考察昭通境內(nèi)天麻的最佳產(chǎn)地。該研究按照《中國藥典》技術要求，對天麻進行提取分離制備醇提取物，建立了HPLC的分析方法，對云南昭通3個產(chǎn)地天麻含有的GAS和HBA含量進行比較研究。結果顯示，云南昭通彝良小草壩天麻醇提取物的得率最高，提取物中所含GAS和HBA的總量為0.8119%，折合天麻生藥所總量為0.454%。因此，可認為云南昭通3個主要天麻產(chǎn)地中，彝良小草壩為最佳產(chǎn)地，可為天麻的道地性研究提供依據(jù)。

參考文獻：

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（收稿日期：2020-09-14）