嘉興市雞球蟲病流行病學調查

杜愛芳劉連瑞

(1.浙江大學動物科學學院，浙江 杭州 310058；2.嘉興市供銷合作社聯合社，3.嘉興市農業農村局)

1 材料與方法

1.1樣品的采集與處理 按不同地理位置分散選取嘉興市7個縣(市、區)14家養雞場進行采樣。在每個養雞場隨機采集新鮮糞便一份(如果有血便則優先采樣)，將采取的糞便樣品分別存放于干凈的塑封袋內，將每一份塑封袋進行編號，并做好標記，詳細記錄采樣信息，本次研究共采集280份糞便樣品。

1.2雞球蟲陽性樣品及感染強度判定 每份取2 g放入小燒杯中，加適量飽和鹽水，攪拌均勻后、移入試管中加滿蓋上蓋玻片，漂浮15 min，然后用鑷子取下蓋玻片，在顯微鏡下觀察球蟲卵囊并做記錄，樣品先置于40倍顯微鏡視野下觀察，確定視野范圍后調整至100倍。顯微觀察若無雞球蟲蟲卵，則判定為此樣品為陰性，顯微觀察若有雞球蟲蟲卵，則判定此樣品為陽性。

隨機調取3個100倍顯微鏡視野，將這3個視野內的雞球蟲數量進行計數，求其平均值。感染強度判定依據表1。

表1 雞球蟲感染情況判定表

1.3雞球蟲蟲種鑒定 觀察樣品中在顯微鏡下肉眼可見的卵囊的形態、顏色。在顯微鏡下測量每種卵囊大小，計算出它們的平均值，計算卵囊指數，并進行顯微照像。參照雞球蟲卵囊圖譜和有關文獻資料進行初步蟲種鑒定[1]。

1.4數據統計與分析 統計所采集樣品的有無雞球蟲卵囊,并將檢測到的雞球蟲卵囊進行分類,按照采樣區域進行統計,匯總嘉興市各個采樣區域內雞球蟲感染的種類、所占比例、感染情況等等，然后對所得數據進行分析。

2 結果

2.1雞球蟲感染率及感染情況 14家養雞場共280份雞糞便樣品，根據顯微鏡下肉眼可見的卵囊的形態、顏色，在顯微鏡下測量每種卵囊大小，通過計算卵囊指數確定本次研究所發現的雞球蟲種類。在此次雞球蟲病流行病學調查中，共發現了4種雞球蟲，它們分別是：柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella)、堆型艾美耳球蟲(Eimeriaacervulina)、巨型艾美耳球蟲(Eimeriamaxima)、和緩艾美耳球蟲(Eimeriamitis)。部分檢測結果見圖1～3。

圖1 雞球蟲卵顯微鏡檢測照片

圖2 雞球蟲卵顯微鏡檢測照片

圖3 雞球蟲卵顯微鏡檢測照片

在采樣調查的280份樣品中，共檢測有53份雞球蟲陽性樣品，占比為18.93%(見表2)，其中嘉善縣雞球蟲感染率最高，為27.50%，海鹽縣雞球蟲感染率最低為12.50%，南湖區、秀洲區、平湖市、海寧市、桐鄉市雞球蟲感染情況分別為：22.50%、20.00%、17.50%、15.00%、17.50%。

從感染強度上來分：普遍感染強度為+，少數樣品為++，總體感染強度不高。

表2 雞球蟲感染強度情況

2.2感染球蟲種類 在鏡檢發現雞球蟲感染陽性的53份樣品中，單一蟲種感染的為13份，占比為24.53%，兩種及兩種以上球蟲感染的樣品數為40份，占比為75.47%，說明雞球蟲感染情況中，以混合感染為主要情況。

3 討論

雞球蟲病在全世界范圍內分布廣泛，在我國，許多地區養雞場也都存在雞球蟲病感染情況。嘉興市的氣候環境條件非常適宜雞球蟲的傳播和蔓延，存在雞球蟲病疫情爆發風險。因此，制定合理有效的雞球蟲病防治策略的前提是必須要清晰地掌握本市內雞球蟲病流行情況。而了解嘉興市雞球蟲的感染情況，對指導雞球蟲病的預防治療工作尤為重要。

表3 陽性樣品中單一感染和混合感染占比情況

當前雞球蟲病的防治主要依賴于藥物防治，在用藥過程中尤其要注意采取穿梭用藥、聯合用藥方式，以避免雞球蟲耐藥性的產生[2]。此外，應積極引導養殖場合理規范用藥，切忌濫用藥，科學系統的做好雞球蟲病的防控。對此，筆者通過查閱資料，得出如下幾條經驗。

3.1做好飼養管理工作 加強消毒滅原工作，要對進入養殖區域的材料、用具、設備以及人員進行嚴格徹底的消毒，防止外界雞球蟲通過上述途徑帶入到本養殖場區域。此外在飼料添加環節上要注重增添植物類飼料添加劑來抑制球蟲的生長發育，參照其他養殖場已取得的良好經驗做法，比如口服青蒿素、檸檬提取物、紫錐花、甜菜堿、大蒜提取物等，結合自身養雞場實際情況，在養殖過程中進一步優化該類飼料添加劑的成分、配比等[3]。

3.2合理的使用藥物防治 大量的研究表明，雞球蟲病大多通過藥物的防治來誘導其自身免疫的發生，從而清除雞體內寄生的病原體。在世界上不同的國家和地區，真正實際應用于生產的抗球蟲藥物只有二十余種左右，大致可以分為三大類：聚醚類離子載體抗生素、化學合成的抗球蟲藥以及中草藥類藥物。聚醚類離子載體抗生素主要包括：莫能霉素、鹽霉素、拉沙霉素、那拉霉素、馬杜拉霉素和山度拉霉素，它們能使陽離子易于進入球蟲細胞膜內從而改變滲透壓，引起內外離子失衡，最終球蟲由于過多水分進入膜內，細胞破裂導致死亡，達到作用效果[4]；化學合成的抗球蟲藥主要包括：磺胺類藥、酰胺類、吡啶類、喹啉類、胍類、抗硫胺素類、均苯脲類和均三嗪類，它包括多種模式的作用途徑，例如抑制葉酸合成的磺胺類藥物，抑制球蟲線粒體呼吸作用的碳酸奎尼丁、氯吡啶醇，與雞球蟲競爭硫胺素吸收的競爭性抑制劑氨芐西林等；中草藥類藥物主要是如常山酮、青蒿素、大蒜菌素等。它們主要是通過抑制球蟲卵囊的孢子化并殺死已經孢子化的卵囊，增加T、B淋巴細胞的數量與活性，達到提高機體自身免疫力的目的[5]。由此可見，當前市面上抗球蟲藥物的種類很多，并且作用的方式也不盡相同。鑒于此，要做到有效地控制雞球蟲病的發生，必須要做到根據需要來選擇用藥，并且合理、適量的使用藥物，對防治雞球蟲病也很關鍵。

3.3疫苗防治 雖然抗球蟲藥物已被廣泛的用于預防球蟲病，在許多有大型家禽業的國家(如巴西、中國和美國)，抗球蟲藥是家禽抵抗雞球蟲感染的主要防控手段[6]。但藥物耐藥性以及耐藥蟲株的出現使藥物預防效果明顯降低，導致球蟲病無所不在，大大降低了生產效率。人們也采取了輪換給藥(1種藥物投放時間為2個育肥期)、穿梭給藥(1個育肥期內投放不同藥物)、聯合給藥等各種措施，這對球蟲耐藥性產生的副作用有一定作用，但球蟲病仍然肆虐橫行。因此通過疫苗防治來抵抗球蟲感染顯得尤為重要。目前大多數商品化的疫苗主要是活疫苗。

隨著科研人員對球蟲免疫機理研究的不斷深入，有效的抗球蟲疫苗也隨之被開發出來。到現在為止，市場上銷售的抗雞球蟲疫苗多為含有多種有一定致病力的球蟲混合制成的活苗。然而這些疫苗均存在一定的局限性，比如在免疫途徑和免疫程序的控制方面難以把握；活苗毒力返強的潛在危險；生產量的限制難以滿足日益擴大的養雞業的需求等[7]。另外活苗在安全性和免疫效果方面也是目前令人擔憂的地方。活苗得不到廣泛推廣的另一個重要原因是由于其存在的致病性很可能在雞群免疫力低下的時候導致球蟲病的爆發[8]。

在分子生物技術飛速發展的今天，對雞球蟲免疫機理和入侵機制的不斷認識和理解，科研人員將防治雞球蟲病的眼光放在了DNA疫苗的研制上。抗雞球蟲的基因工程疫苗是通過DNA重組的生物學技術，將天然的或人工合成的具有抗球蟲效應的遺傳物質定向插入表達載體中，使之在宿主細胞中表達并將相應的抗原呈遞給宿主的免疫系統引起相應的免疫效應，從而起到抗球蟲的作用[9]。因此，能夠作為基因工程疫苗的載體必須具備以下兩個功能：首先，可以表達球蟲抗原；其次，是可以將表達的抗原呈遞給宿主的免疫系統[10]。最近的一些研究指出，DNA疫苗能夠激發宿主的體液免疫和細胞免疫[11]。與此同時，細胞因子作為佐劑應用于抗球蟲免疫可以延長DNA疫苗的保護時間，提高免疫質量[12]。相比傳統的活苗預防，DNA疫苗在安全性、保護性、持續性、穩定性、免疫效果等多方面具有明顯的優勢[13]。