卵巢癌患者血清HK10、DJ-1的表達及意義

任曉兵，李陽，陳廣福，朱彤，白筱，馮靜

(1西安高新醫院，西安 710075；2西北婦女兒童醫院)

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤，發病隱匿，早期無特異臨床癥狀和體征，多數患者確診時已近中晚期，手術切除和化療后患者5年生存率僅20%～30%[1,2]。人激肽釋放酶-10(HK-10)為人激肽釋放酶家族成員，通過與細胞外基質、生長因子等結合而介導細胞凋亡、血管生長及腫瘤的發生發展[3]，研究[4]顯示，HK-10在卵巢癌患者中表達上調，且表達水平越高，患者預后越差。DJ-1蛋白由PARK7基因編碼，在人體中具有促進細胞轉化和抑制細胞凋亡等功能。研究[5,6]發現，DJ-1與肺癌、胃癌等惡性腫瘤的發病密切相關。關于HK-10、DJ-1與卵巢癌發病的關系，目前相關研究證據尚不足。2016年8月～2018年8月，我們檢測了卵巢癌患者血清中HK-10、DJ-1水平，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8月～2018年8月西安高新醫院住院手術治療的卵巢癌患者97例(卵巢癌組)，納入標準：①組織標本經病理學活檢確診為卵巢癌；②既往未接受過手術切除，或放、化療治療者；③Karnofsky(KPS)評分超過60分；④患者及家屬知情同意，并在知情同意書上簽字；⑤符合醫學倫理學要求。排除標準：①妊娠期及哺乳期婦女；②心臟功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④急、慢性感染性疾病患者；⑤自身免疫性疾病及凝血功能障礙者；⑥其他系統惡性腫瘤患者。患者年齡37～78(57.28±5.17)歲；根據國際婦產科聯盟(FIGO)手術-病理分期標準進行分期，Ⅰ～Ⅱ期56例，Ⅲ～Ⅳ期41例；腫瘤直徑2～6(4.12±1.26)cm；病理分型：黏液性腺癌33例，漿液性腺癌49例，內膜樣腺癌15例；腫瘤分化程度：低分化42例，中、高分化55例；有淋巴結轉移38例，無淋巴結轉移59例。同期隨機選取85例經病理活檢證實為良性卵巢腫瘤患者為良性卵巢腫瘤組，年齡32～70(55.97±6.20)歲。50例其他良性婦科疾病患者為對照組，年齡31～76(58.64±5.73)歲，盆腔炎23例，子宮內膜炎17例，宮頸糜爛10例。三組年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 血清HK-10、DJ-1檢測 入院后抽取各組空腹肘靜脈血5 mL，室溫下靜置1 h，3 000 r/min離心5 min，離心半徑9 cm，留取血清標本置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶聯免疫吸附法檢測血清HK-10、DJ-1水平，其中HK-10檢測試劑盒由北京方程嘉鴻科技有限公司提供，DJ-1檢測試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司提供。使用美國Thermo公司生產的酶標儀進行檢測，檢測波長為450 nm處的光密度(OD450)，繪制標準曲線求出對應的濃度值。整個操作過程嚴格按照試劑盒說明進行。

2 結果

2.1 三組血清HK-10、DJ-1水平比較 三組血清HK-10、DJ-1水平比較差異有統計學意義(F分別為12.368、16.813，P均<0.05)，兩兩比較，卵巢癌組、良性卵巢腫瘤組血清HK-10、DJ-1水平高于對照組，且卵巢癌組血清HK-10、DJ-1水平高于良性卵巢腫瘤組，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 三組血清HK-10、DJ-1水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與良性卵巢腫瘤組比較，#P<0.05。

2.2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平與臨床病理特征的關系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤細胞低分化、有淋巴結轉移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平高于Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結轉移者(P均<0.05)；不同年齡、腫瘤直徑、病理分型卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平差異無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

2.3 卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1的相關性 Pearson積矩相關分析結果顯示，卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1呈正相關(r=0.728，P<0.05)。

2.4 血清HK-10、DJ-1對卵巢癌的診斷價值 繪制的血清HK-10、DJ-1診斷卵巢癌的ROC曲線見圖1。血清HK-10、DJ-1聯合檢測對卵巢癌的診斷價值最高，AUC為0.944(95%CI：0.889～0.992)，靈敏度、特異度分別為0.93、0.97，準確度為0.96。見表3。

3 討論

卵巢癌是女性生殖系統常見的三大惡性腫瘤之一，報道[7]顯示，美國是卵巢癌高發國家，僅北美地區，2013年卵巢癌新發病例即高達2萬例，死亡病例1.4萬例。我國屬于卵巢癌高發國家，近年發病率呈逐漸上升趨勢。血清糖類抗原125(CA125)是目前臨床診斷卵巢癌的常見腫瘤標志物，但研究發現，部分卵巢癌患者CA125無明顯表達，而在婦科良性疾病如盆腔炎、子宮內膜異位癥等患者血液中可顯著表達，說明CA125的靈敏度和特異度較差[8～10]。尋找更為靈敏且能早期診斷卵巢癌，并判斷病情嚴重程度的腫瘤標志物，對臨床制定針對性治療方案有重要意義。

表2 卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平與臨床病理特征的關系

圖1 血清HK-10、DJ-1診斷卵巢癌的ROC曲線表3 血清HK-10、DJ-1對卵巢癌的診斷價值

指標AUC95%CI截斷值靈敏度特異度準確度HK-100.8420.768～0.9151.220.830.790.82DJ-10.8540.772～0.93610.790.850.820.87HK-10+DJ-10.9440.889～0.992-0.930.970.96

HK-10是由KLK10基因編碼相對分子質量為30 kD的分泌型絲氨酸蛋白酶，含有276個氨基酸，在細胞外形成胞外生長調節因子或細胞表面受體等介導細胞的生長、凋亡等過程，正常細胞生長過程中，HK-10主要在母乳、腦脊液等生物學液體中表達，而在心臟、胸腺等器官中表達微乎其微，在骨骼肌、肝腎等臟器中不表達[11]。研究[12]表明，HK-10表達異常參與了乳腺癌等內分泌惡性腫瘤的發生發展過程，并與惡性腫瘤細胞的脫落、遷移侵襲過程密切相關，其主要機制可能與雌激素受體、孕激素受體等類固醇激素受體復合物及其同源激素反應元件通過相互作用而促進或抑制人組織激肽釋放酶基因10(KLK10)的表達有關。Grzmil等[13]發現，HK-10在前列腺癌患者中表達上調，水平越高，預后越差。馬睿等[11]證實，HK-10在卵巢癌組織中的表達明顯高于正常卵巢組織，并由此推斷其可作為卵巢癌的診斷標志物。DJ-1基因位于染色體1P36，長度為24 kb，DJ-1蛋白單體在人體腎臟、胰腺、肝臟、肌肉組織等不同組織中廣泛表達，且其二聚體形式在細胞的轉錄、相互轉化、氧化應激等生理活動中發揮重要作用[14]。Tabata等[15]研究顯示，DJ-1蛋白在膽管癌組織中表達升高，且其水平越高，預后越差。李海等[16]對甲狀腺癌的研究發現，DJ-1參與了各型甲狀腺癌的發病過程，但與其預后無明顯關系。Shu等[17]證實，子宮內膜癌組織中DJ-1表達較正常子宮內膜組織明顯升高，且與子宮內膜癌發生發展密切相關。農雪萍等[18]發現，DJ-1在非小細胞肺癌組織中異常表達，發生遠處轉移的肺癌組織中DJ-1表達水平更高，并由此推斷DJ-1可作為評估肺鱗癌預后的腫瘤標志物。

本研究結果顯示，卵巢癌及良性卵巢腫瘤患者血清HK-10、DJ-1水平高于對照，且卵巢癌患者高于良性卵巢腫瘤患者，差異均有統計學意義，提示卵巢良、惡性腫瘤中HK-10、DJ-1表達上調存在差別，二者可能參與了卵巢癌發病過程，與有關研究結果相似。馬睿等[11]發現，HK-10在卵巢癌患者中表達明顯高于卵巢良性疾病，且經過TP方案化療后顯著降低。王偉明等[9]證實，DJ-1在卵巢良、惡性腫瘤中表達有顯著差別，惡性腫瘤患者表達明顯升高。此外，本研究結果顯示，血清HK-10、DJ-1與FIGO分期、腫瘤細胞的分化程度及淋巴結轉移等臨床病理特征密切相關，FIGO臨床分期越高、腫瘤分化程度越差及有淋巴結轉移的卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平越高，提示HK-10、DJ-參與了卵巢癌的發生發展、侵襲轉移過程，且與預后密切相關，二者表達水平越高，預后越差。因此，早期檢測血清HK-10、DJ-1有望作為臨床評估卵巢癌患者病情嚴重程度的重要標志物。

Pearson積矩相關分析結果顯示，卵巢癌患者血清HK-10與DJ-1呈正相關，兩種標志物可能通過表達上調發揮協同作用，參與卵巢癌的發生發展，通過信號通路的交叉，HK-10、DJ-1共同促進腫瘤細胞的侵襲轉移。本研究進一步評估血清HK-10、DJ-1對卵巢癌的診斷價值，結果顯示HK-10、DJ-1診斷卵巢癌有較好的診斷價值，且聯合檢測的靈敏度可達0.93，特異度可達0.97，準確度可達0.96，提示早期聯合檢測可最大化減少漏診率和誤診率，提高早期診斷卵巢癌的準確率。

綜上所述，卵巢癌患者血清HK-10、DJ-1水平升高，并與癌細胞的侵襲轉移密切相關;二者聯合檢測有助于卵巢癌的早期診斷。