蛋白芯片法與膠體金法檢測結(jié)核抗體對結(jié)核病的臨床價值

仇祝強 于輝

肺結(jié)核是當前臨床常見的一種通過呼吸道傳播的傳染性疾病，該病病死率居各類傳染性疾病的第2位[1-2]。肺結(jié)核常見發(fā)病部位主要在肺部，該病患者在臨床上多表現(xiàn)出夜間盜汗、低熱以及咳嗽等癥狀[3]。該病作為消耗性疾病之一，在感染機體后引發(fā)Ⅳ型超敏反應（遲發(fā)型超敏反應），嚴重影響到患者的身體健康與生命安全[4]。對于該病需在臨床上進行及早診斷、及早治療與干預。當前主要通過培養(yǎng)與涂片等細菌學檢查進行診斷，但由于對結(jié)核桿分枝菌培養(yǎng)的耗時較長，且進行痰涂片法檢測的敏感性相對較低，細菌學檢查方法難以取得較滿意的效果。隨著當前醫(yī)學技術(shù)的不斷進步，逐漸將結(jié)核抗體檢測方法用于對結(jié)核病的篩選，當前主要采用的結(jié)核抗體檢測方法包括蛋白芯片法與膠體金法[5-6]。研究主要以探討分析膠體金法與蛋白芯片法兩種方法檢測結(jié)核抗體對結(jié)核病的臨床診斷價值，內(nèi)容見下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入本院2018年1—6月收治臨床確診活動性肺結(jié)核病患者68例建立觀察組，同期納入非結(jié)核病受檢者80例建立對照組。觀察組納入患者均符合中華醫(yī)學會結(jié)核分會2000年制定的肺結(jié)核診斷標準進行診斷。觀察組納入患者包括男性36例、女性32例，患者年齡21～67歲，平均（44.7±5.2）歲；對照組納入受檢者男性45例、女性35例，受檢者年齡21～67歲，平均（44.9±5.1）歲。兩組研究對象一般資料對比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），且受檢者入組前均對研究內(nèi)容知情同意。

1.2 方法

分別應用膠體金法與蛋白芯片法對研究對象進行結(jié)核抗體檢測。（1）膠體金法檢測。應用迪比多檢驗試劑盒（上海奧普生物公司）進行檢測，通過斑點免疫-膠體金滲濾技術(shù)（DIGFA），對結(jié)核分枝桿菌的特異性膜蛋白抗原進行分離與純化處理，于硝酸纖維素膜上進行點樣并固定，使膜上結(jié)核抗原與血清樣品當中的結(jié)核分枝桿菌抗體進行結(jié)合，結(jié)核IgG抗體通過葡萄球菌-A蛋白（SPA）的膠體金綴合物進行標記呈色，若發(fā)現(xiàn)存在紅色斑點，可提示有結(jié)核分枝桿菌抗體存在。（2）蛋白芯片法檢測。應用結(jié)核分支桿菌IgG抗體檢驗試劑盒（南京大淵生物）進行蛋白芯片法檢測，檢測按試劑盒說明書進行操作。蛋白芯片試劑盒應用經(jīng)基因工程表達結(jié)核分枝桿菌所表達的LAM、16 KDa與38 KDa蛋白3種結(jié)核菌復合群的特異性抗原對受檢血清中抗體進行檢測，以任一抗體檢測結(jié)果為陽性判定檢測陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，檢測陽性率資料采用百分比形式描述，組間對比通過χ2檢驗，以P＜0.05表示對比差異存在統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

觀察組患者經(jīng)膠體金法檢測的陽性率77.94%（53/68），對照組受檢者經(jīng)膠體金法檢測的陽性率7.50%（6/80），觀察組與對照組膠體金法檢測陽性率差異存在統(tǒng)計學意義（χ2=76.080，P＜0.05）；觀察組與對照組的蛋白芯片法檢測（LAM、16 KDa與38 KDa）陽性率差異存在統(tǒng)計學意義（LAM-χ2=52.271，16 KDa-χ2=40.628，38 KDa-χ2=52.271）。觀察組膠體金法與蛋白芯片法16 KDa 檢測對比，χ2=19.080，P＜0.05）；觀察組患者膠體金法檢測陽性率高于蛋白芯片法（觀察組膠體金法與蛋白芯片法LAM、38 KDa檢測相比，χ2均=4.224 9，P＜0.05），見表1。

3 討論

結(jié)核病是當前全球感染性疾病致死的首要因素。臨床上結(jié)核病主要是指在顯微鏡下或經(jīng)培養(yǎng)存在陽性結(jié)核分枝桿菌的結(jié)果，或存在影像學以及結(jié)核病癥狀表現(xiàn)的一類感染疾病。對于結(jié)核病而言，分枝桿菌的培養(yǎng)是作為診斷感染的臨床“金標準”，但由于分枝桿菌一般在固體培養(yǎng)基當中的生長周期相對較長（培養(yǎng)時間＞6周），因此分枝桿菌的培養(yǎng)不適宜對結(jié)核病的早期診斷[7]。而當前臨床特異性較高，檢驗快速、簡便的檢測方法為抗酸染色法檢測，但其診斷敏感性相對較低，進行一次痰涂片檢測的診斷敏感性僅在20%～80%，對涂陰結(jié)果的結(jié)核病診斷，若無典型影像學證據(jù)結(jié)合診斷，則易導致發(fā)生漏診或誤診現(xiàn)象。相比之下，通過血清免疫學對結(jié)核抗體進行檢測的診斷方法則可彌補進行影像學檢測的不足，當前臨床常用檢測方法主要包括蛋白芯片法與膠體金法技術(shù)[8-9]。膠體金法是通過斑點免疫膠體金滲濾技術(shù)對結(jié)核分支桿菌上的特異性膜蛋白抗原進行分離純化處理，進一步捕獲人血清樣品當中的結(jié)核分枝桿菌抗體，經(jīng)SPA膠體金綴合物進行標記呈色，從而形成紅色斑點，該方法下可根據(jù)紅色斑點的出現(xiàn)情況判斷檢驗的陰、陽結(jié)果。而蛋白芯片法檢測過程則涉及試劑盒的芯片與試劑，其中，芯片主要以微孔濾膜作為載體，將結(jié)核菌具有特異性的細胞壁脂多糖抗原LAM與景觀基因工程DNA重組技術(shù)純化的結(jié)核菌16 KDa蛋白、38 KDa蛋白等特異性抗原一同固定于特制載體，再經(jīng)微孔濾膜進行滲濾、濃縮與凝集，捕捉特異性抗體，抗原抗體復合物與經(jīng)膠體金標記處理兔抗人IgG的作用在膜上呈現(xiàn)紫紅色斑點[10]。經(jīng)芯片識別系統(tǒng)分析，可分別測定出抗結(jié)核菌具有特異性的細胞壁上脂多糖LAM、16 KDa與38 KDa抗體，蛋白芯片法檢測以三種抗體之一呈現(xiàn)陽性，判斷為該患者的抗結(jié)核分枝桿菌抗體檢測陽性。其中，結(jié)核分枝桿菌LAM是作為結(jié)核分枝桿菌的細胞壁上一種重要成分，LAM的抗原性較強，能刺激結(jié)核菌感染者體內(nèi)產(chǎn)生抗體，其他的分枝桿菌因細胞壁表面LAM的含量較低，無法刺激機體產(chǎn)生大量抗體，因此對LAM抗體的檢測具有較高的特異性與敏感性。16 KDa蛋白的基因型是MPT63，MPT63基因僅出現(xiàn)于結(jié)核菌復合群，且16 KDa蛋白與常見鳥分枝桿菌相關蛋白不產(chǎn)生血清交叉反應，檢測該指標同樣能較好的反應結(jié)核分枝桿菌水平情況[11-13]。38 KDa蛋白是細胞所分泌的脂蛋白之一，38 KDa蛋白與細胞膜或菌體表面上的脂肪結(jié)構(gòu)連接，在各類分枝桿菌中，只有結(jié)核菌與牛分枝桿菌兩類被發(fā)現(xiàn)分泌38 KDa蛋白，且人結(jié)核菌反應強度相比于牛分枝桿菌的38 KDa蛋白分泌水平高10倍，臨床通過蛋白芯片法檢測38 KDa蛋白能較好的反映結(jié)核分枝桿菌感染。研究通過納入臨床確診活動性肺結(jié)核病患者與非結(jié)核病受檢者分別應用膠體金法與蛋白芯片法對研究對象進行結(jié)核抗體檢測，結(jié)果顯示，觀察組患者經(jīng)膠體金法檢測的陽性率77.94%，對照組受檢者經(jīng)膠體金法檢測的陽性率7.50%；觀察組患者經(jīng)蛋白芯片法LAM、16 KDa與38 KDa反應陽性率為61.76%，對照組蛋白芯片法反應陽性率為6.25%；觀察組患者膠體金法檢測陽性率顯著高于蛋白芯片法。研究提示，膠體金法在活動性結(jié)核病和結(jié)核感染診斷的敏感性方面的優(yōu)勢更大，該方法用于對可疑結(jié)核病患者的檢測能更準確的進行診斷。

表1 蛋白芯片法與膠體金法兩種方法檢測結(jié)核抗體陽性情況對比[例（%）]

綜上所述，應用膠體金法對結(jié)核抗體進行檢測的結(jié)核病陽性率與蛋白芯片法對比顯著更高，膠體金法檢測對早期活動性結(jié)核患者的診斷具有一定的輔助應用價值。