熒光定量 PCR檢測原料乳中粘質沙雷氏菌

姜鴻瑞，韓紫音，夏海磊，王夢琦，冀德君，毛永江，楊章平，張慧敏

（揚州大學動物科學技術學院，揚州 225009）

粘質沙雷氏菌（S.marcescens）屬于革蘭氏陰性菌，亦稱靈桿菌[1]，是一類腸道桿菌，普遍存在于水和土壤中，可在低溫下生長繁殖，低溫食品極易受其污染，如乳制品、水產品、禽類產品等。此外，S. marcescens是一種條件性致病菌，當機體免疫功能低下時就會引起肺炎、敗血癥、腦膜炎等各種疾病，并且對多種抗生素產生耐藥性。近年來，S. marcescens引發感染的事件越來越多，逐漸引起人們的重視。

S. marcescens可分泌多種胞外水解酶，如耐熱脂肪酶及蛋白酶，這些酶可水解牛奶中的蛋白質和脂類，進而導致牛奶變質，產生苦味、異味、不潔味等。牛奶的熱處理工藝雖然可以殺滅微生物，但對耐熱酶沒有作用，耐熱酶的活性基本不受影響，給乳制品安全帶來巨大的隱患[2,3]。研究發現，S. marcescens是原料乳低溫貯藏期間的主要嗜冷菌之一，由此可見，快速、準確地檢測原料乳中S. marcescens對保障原料乳質量安全有重要意義。

近年來，隨著分子生物學技術的發展，熒光定量PCR技術被廣泛地應用于原料乳中致病菌的檢測，如金黃色葡萄球菌、沙門菌屬等[4]。為了準確、高效地檢測原料乳中的S. marcescens，本研究選取對S. marcescens有特異性的S-核糖基高半胱氨酸酶（luxS）基因作為檢測的靶基因[5]，建立原料乳中S.marcescens的高靈敏、高特異的實時熒光定量PCR快速檢測體系，為原料乳的質量安全提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

粘質沙雷氏菌ATCC14756、熒光假單胞菌ATCC13525、魯氏不動桿菌ATCC15309、阪崎腸桿菌ATCC29544購自美國模式培養物集存庫；……