病毒性心肌炎患兒血清炎性細胞因子和高遷移率族蛋白1水平變化

王 茜,姜 紅,朱 聚,熊海英

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院 兒科,湖北 武漢430022)

病毒性心肌炎是兒科常見疾病，近年的發病率有逐年增高趨勢[1]。我國兒童病毒性心肌炎總發病率18.27/10萬，患病率21.83/10萬。在初生至17歲的猝死者中17%有心肌病理改變，在學齡兒童猝死者中有21%患有心肌炎。病毒性心肌炎的發病機制尚未完全闡明，目前認為與炎性細胞因子、免疫功能紊亂密切相關。高遷移率族蛋白1(HMGB1)是近年發現的一種重要的炎癥介質和致炎細胞因子[2]，其與病毒性心肌炎的作用未見報道。本研究通過聯合檢測病毒性心肌炎患兒血清HMGB1和轉化生長因子-β1(TGF-β1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，探討其在病毒性心肌炎發病中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月-2018年1月我科收治的病毒性心肌炎患兒共96例，均符合1999年9月昆明全國兒童心肌炎、心肌病學術會議修訂的兒童病毒性心肌炎診斷標準，排除其他疾病引起的繼發性心肌損害，發病前1-3周均有上呼吸道感染史。急性期組：48例，男26例，女22例，年齡6.5-13.0歲，平均9.6歲；36例柯薩奇病毒B組(lgM抗體陽性，12例腺病毒(ADV)IgM抗體陽性。恢復期組：48例，男25例，女23例，年齡6.3-13.7歲，平均9.5歲；37例柯薩奇病毒B組(lgM抗體陽性，11例腺病毒(ADV)IgM抗體陽性。選擇40名正常健康兒童為對照組，其中男22例，女18例，年齡6.4-13.5歲，平均9.5歲；近期無感染、腹瀉病史。

1.2 方法

急性期組：給予黃芪注射液：黃芪注射液10 ml(神威藥業有限公司10 g/ml，批準文號：國藥準字Z13020999)溶于5%葡萄糖200 ml，改良極化液(門冬氨酸鉀鎂10 ml、能量合劑0.5支溶于5%葡萄糖200 ml)靜脈滴注，1次/d；口服輔酶Q10、維生素C，2周(14 d)為1個療程。恢復期組：給予傳統的抗病毒、改善心肌代謝、極化液、維生素C及其他對癥診療[3]。

1.3 標本采集與檢測

各組患兒在入院時采血，急性期在診療3 d、7 d、14 d時分別抽取清晨空腹靜脈血3 ml，立即注入硅化玻璃試管，3 000 r/min離心10 min，吸取上清，將血清分裝置于-70℃冰箱待測。

采用雙抗體夾心酶聯免疫分析法定量檢測各組患兒血清中TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平。TGF-β1和TNF-α的ELISA檢測試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，HMGB1檢測ELISA試劑盒購自美國R&D公司，使用美國BIO-RAD伯樂680型全自動酶標儀測定450 nm波長下吸光度值，用SPSS軟件繪出標準曲線，計算樣本值[4]。操作嚴格按照試劑盒要求，所有樣品設立復孔，由專人負責，在同一批內檢測。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 各組血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

與對照組比較，急性期組的TGF-β1、HMGB1水平明顯升高(P<0.05)，TNF-α升高更為顯著(P<0.01)，恢復期組TGF-β1較急性期稍降低，差異無統計學意義；TNF-α、HMGB1明顯低于急性期組，但仍高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與急性期組比較，

▲P<0.05

2.2 急性期組患兒不同時間點血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

TGF-β1第3 d、7 d無顯著變化，第14 d時明顯降低(P<0.05)；TNF-α和HMGB1診冶第3 d、7 d、14 d均依次降低，各時間點間差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 急性期組患兒診療不同時間點血清TGF-β1、TNF-α和HMGB1水平比較

注：與1 d比較，*P<0.05，**P<0.01；與7 d比較，▲P<0.05

3 討論

病毒性心肌炎是由柯薩奇等嗜心肌病毒感染人體，心肌細胞發生炎性浸潤、變性壞死或間質水腫的心血管疾病，以心肌代謝障礙和心功能改變為特點，嚴重危害兒童健康。目前認為，病毒性心肌炎的發病與病毒直接損傷、病毒誘發的免疫反應有關，細胞因子在誘發免疫病理過程中起到關鍵作用[5]。

本研究選擇病毒性心肌炎患兒96例為研究對象，檢測不同組患兒入院時血清TGF-β1、TNF-α及HMGB1的水平，結果顯示：與對照組比較，急性期組的TGF-β1、HMGB1水平明顯升高，TNF-α升高更顯著，恢復期組TGF-β1較急性期稍降低，TNF-α、HMGB1則明顯降低；結果提示：病毒性心肌炎急性期患兒血清炎性細胞因子明顯升高，病毒誘發強烈的炎癥反應，這與朱冰[6]等的研究結果一致。本研究中，恢復期組TNF-α和HMGB1均明顯恢復，而TGF-β1恢復不明顯，急性期組第14 d時仍較高，分析原因TGF-β1是重要的致纖維化細胞因子[7]，其在恢復期水平仍較高，提示病毒性心肌炎患兒炎癥消退后仍存在心肌纖維化的危險[8]。本研究觀察到急性期患兒在第3 d、7 d、14 d時血清HMGB1依次降低，提示隨著診療進展，心肌的免疫病理損傷得到一定程度的恢復。TNF-α的變化趨勢與HMGB1相同，提示病毒性心肌炎急性期時，單核巨噬細胞募集分泌TNF-α，使心肌炎性反應增強[9,10]；隨診治炎癥反應及心臟自身免疫反應減弱，TNF-α也隨之下降。總之，TGF-β1、TNF-α和HMGB1參與病毒性心肌炎的發病過程，聯合檢測有助于病情判斷及預后評估。