RNPC1、S100A6蛋白在肺腺癌中的表達及與臨床病理特征的關系

趙 璞，楊軍峰，董冠中，何 苡

(河南省人民醫院 胸外一科,河南 鄭州450003)

長期的流行病學研究證實，2010-2017年我國肺腺癌平均發病率可達2384-2483/10萬人左右[1]。肺腺癌患者的五年生存率不足45%，中位生存時間不超過38個月[2]。在對于肺腺癌相關基因或者蛋白水平的研究中發現，不同腫瘤調控蛋白的表達，能夠通過影響肺部腺體上皮細胞的侵襲和增殖過程，進而參與肺腺癌的發生發展。RNA結合蛋白(RNPC1)的表達能夠通過結合微RNA，進而參與到腫瘤細胞的增殖調控、轉錄及癌細胞的分化誘導過程中。RNPC1的表達上升能夠導致上皮細胞DNA擴增風險的顯著增加，并誘導其浸潤臨近的正常上皮組織[3]；S100A6蛋白是鈣結合蛋白家族的成員，能夠通過結合鈣離子進而促進上皮細胞間質成分的分解，提高癌細胞的變形和擴散的能力[4]。部分研究者報道了S100A6蛋白在卵巢癌或者宮頸患者中的表達情況[5]，認為S100A6蛋白的表達上升能夠顯著促進宮頸癌的臨床分期進展和臨床預后的惡化[6]，但在肺腺癌患者中的研究不足。為了深入揭示RNPC1、S100A6蛋白的表達與肺腺癌的關系，本研究選取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌組織標本81例，探討RNPC1、S100A6蛋白的表達與肺腺癌的臨床病理特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性方法，選取2015年1月至2018年3月我院保存的肺腺癌組織標本81例，其中男性55例，女性26例，年齡40-70歲，中位年齡57歲。納入標準：(1)均經病理組織學確診；(2)臨床病理資料保存完整；(3)患者及家屬知情同意。排除標準：(1)術前已行放化療等抗腫瘤治療；(2)合并其他惡性腫瘤。同時選取癌旁組織(距癌邊緣>5 cm)作為對照。

1.2 實驗方法

所有組織標本經石蠟包埋后作連續切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復合體法 (strep avidin—biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。PNPC1、S100A6蛋白通用型二抗、SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術開發公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性和陰性對照，在高倍顯微鏡下觀察PNPC1、S100A6蛋白的表達情況，具體染色步驟嚴格按照SP試劑盒說明書進行操作。

1.3 結果判斷

PNPC1、S100A6蛋白表達以胞內出現黃色或棕黃色顆粒為陽性，采用半定量積分法，隨機選取5個高倍鏡下視野，每個視野計數200個細胞，對陽性細胞比例和染色強度進行評價。陽性細胞比例：<10%為0分，10%-49%為1分，50%-69%為2分，≥70%為3分；染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。根據陽性細胞比例和染色強度評分之和，總分≥4分為陽性表達，<4分為陰性表達。

1.4 統計學方法

統計分析采用SPSS 19.0軟件對研究數據進行統計處理，計數資料比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌組織和癌旁組織RNPC1、S100A6蛋白陽性表達

肺腺癌組織RNPC1和S100A6蛋白陽性表達率分別為70.37%和81.49%，明顯高于癌旁組織的16.05%和27.17%，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1、圖1。

表1 肺腺癌組織和癌旁組織RNPC1、S100A6蛋白陽性表達 例(%)

2.2 RNPC1、S100A6蛋白表達與肺腺癌臨床病理特征的關系

RNPC1表達與肺腺癌患者吸煙、TNM分期、分化程度和淋巴結轉移有關(P<0.05)；S100A6蛋白表達與肺腺癌患者吸煙、TNM分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表2。

2.3 相關性分析

RNPC1與S100A6蛋白表達雙陽性55例，雙陰性13例，經Spearman秩相關分析，RNPC1與S100A6蛋白表達呈正相關(rs=0.595，P<0.05)，見表3。

3 討論

在長期吸煙的人群中，肺泡上皮細胞的癌變風險可顯著的上升。長期外在的病理性刺激因素及內在的遺傳易感基因的攜帶等，均能夠導致肺癌發生風險的上升[7,8]。治療隨訪研究顯示，現階段臨床上肺癌手術治療后的病情緩解率較低，同時綜合性措施治療后的患者5年內的病死率并無顯著的下降[9,10]。而免疫靶向治療能夠在輔助治療肺癌的過程中發揮一定的作用，本次研究對于肺癌病灶組織中的腫瘤相關蛋白的分析，能夠為臨床上肺癌患者的免疫靶向治療提供理論作用靶點，并能夠為肺癌患者的臨床病情評估提供免疫組化分析指標。

×400；A：肺腺癌組織RNPC1陽性表達；B：肺腺癌組織S100A6蛋白陽性表達；C：癌旁組織RNPC1陽性表達；D：癌旁組織S100A6蛋白陽性表達

表2 RNPC1、S100A6蛋白表達與肺腺癌臨床病理特征的關系 例(%)

表3 相關性分析

RNPC1對于RNA的結合作用，能夠交錯式激活患者體內的癌細胞轉錄調控因子，提高癌細胞DNA的擴增速度。RNPC1對于微小RNA的調控作用，能夠促進癌細胞膜表面糖蛋白配體的激活，促進癌細胞細胞周期調控依賴性蛋白激活的轉錄及翻譯，增加G1/S期比例[11]；S100A6蛋白能夠通過結合鈣離子，提高膠原蛋白酶的激活，促進細胞間質成分的分解。S100A6蛋白的表達還能夠提高癌細胞的突破基底膜的能力，導致癌細胞對于間質細胞、血管內皮細胞的粘附能力的顯著增強。同時基礎領域的研究也證實，S100A6蛋白的上升能夠影響上皮細胞的分化成熟過程，導致癌細胞低分化和中度分化比例的上升[12]。部分研究者報道了S100A6蛋白在肺癌患者中的表達情況，認為S100A6蛋白的表達上升能夠顯著促進肺癌的病情進展，導致患者放化療敏感性的下降[4]，但在肺腺癌患者中的研究較少。

本次研究通過對于肺腺癌患者免疫組化的分析研究提示，RNPC1、S100A6蛋白在肺腺癌病灶組織中的表達陽性率明顯的上升，高于癌旁組織，差異較為明顯，提示了RNPC1、S100A6蛋白的高表達均能夠影響到肺腺癌的病情進展過程。通過匯集不同的相關文獻，筆者認為這主要由于RNPC1、S100A6蛋白的下列的作用有關[13,14]：(1)RNPC1的表達上升，能夠影響到轉錄RNA的調控水平，導致下游肺泡上皮細胞的轉錄和增殖活性明顯的增強；(2)S100A6的表達上升，能夠通過促進上皮-間質轉化過程，進而提高了肺泡上皮細胞的浸潤能力。南巖東等[15]研究者在探討了不同病情的肺腺癌患者免疫組化資料的過程中發現，在肺腺癌患者中，S100A6的表達陽性率可平均上升30%以上，特別是在短期內病情進展速度較快或者高腫瘤負荷較高的患者中，S100A6蛋白的表達陽性率可進一步的升高。免疫組化染色分析可見，在細胞異型性較為明顯的區域，RNPC1、S100A6蛋白的染色強度較深，推測二者可能在影響到癌細胞的形態學改變方面發揮了重要作用。在探討RNPC1、S100A6蛋白的表達與肺腺癌患者臨床病理特征的過程中發現，發生了淋巴結轉移、癌細胞分化程度較差或者臨床分期較晚的患者中，RNPC1蛋白的表達陽性率可顯著的上升，提示了RNPC1蛋白對于肺腺癌臨床病理特征進展的影響，這主要由于RNPC1的表達能夠提高癌細胞粘附淋巴結內皮細胞的能力，促進癌細胞對于臨近正常肺泡上皮組織的浸潤過程；而在臨床分期較晚或者發生淋巴結轉移的患者中，S100A6蛋白的表達也明顯的上升，但并未發現S100A6蛋白的表達與癌細胞分化程度的關系，提示S100A6蛋白并不能誘導癌細胞分化成熟過程。相關關系分析也可見，RNPC1與S100A6蛋白表達呈正相關，提示RNPC1、S100A6在促進肺腺癌的病情進展過程中可能發揮了一定協同作用。

綜上所述，RNPC1、S100A6在肺腺癌患者中的表達陽性率明顯的上升，RNPC1、S100A6的表達與肺腺癌患者臨床病理特征的進展密切相關。后續臨床相關研究可以深入探討RNPC1、S100A6的表達與肺腺癌患者的臨床轉歸的關系。