雞巨型艾美耳球蟲早熟株免疫效果試驗

李瑞琪,王天成,鄭明學,白 瑞,張 黎,張雪松,康慧鑫,楊洪靜,雷 璇

(山西農業大學動物科技學院,山西 太谷 030801)

雞球蟲病是雞球蟲寄生在雞腸道黏膜上皮細胞內引起的一種原蟲病,對現代養禽業造成巨大經濟損失。已報道有9種雞球蟲,其中巨型艾美耳球蟲(E.maxima)是危害最嚴重的蟲種之一,也是集約化養殖最常見的3種球蟲之一,呈世界性分布。E.maxima寄生于雞小腸中段,影響營養物質吸收并易引起繼發性腸炎[1],對雞的生長影響明顯,若致病性強的地方蟲株感染5萬個卵囊/只,雞的相對增重率可下降50%以上[2]。

目前,防治雞球蟲病的主要手段是使用抗球蟲藥進行化學防治。但是,藥物防治面臨著日益嚴重的三大問題：耐藥蟲株的迅速出現；藥物殘留問題；對免疫力產生抑制。疫苗免疫來防控雞球蟲病可以解決抗球蟲藥遇到的難題,將來必將取代化學藥物在球蟲病控制中占據的主導地位[3-4]。目前,國內外已有多種球蟲疫苗推廣并應用到養雞生產[5]。但E.maxima不同地理株之間免疫原性差異很大,常因不同地理株的出現導致免疫失敗[6]。

山西農業大學病理實驗室從山東臨沂某雞場分離、鑒定獲得1株E.maxima親本株,經14代早熟選育,得到一株潛隱期縮短了11 h的E.maxima早熟株。但是該弱毒蟲株對雛雞的最小免疫劑量尚不明確,為此,本研究用不同劑量的E.maxima早熟株接種雛雞,用親本株進行攻毒,測定相對增重率、卵囊減少率、RLS、ACI,確定使雛雞獲得良好免疫效果的最低早熟株接種量,從而為正確使用球蟲疫苗提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗蟲株 巨型艾美耳球蟲山東株(Msd)和巨型艾美耳球蟲山東早熟株(PMsd)由山西農業大學病理實驗室保存與提供。

1.2 實驗動物 4日齡SPF雛雞,公母各半,由北京梅里亞維通實驗動物技術有限公司提供SPF種雞蛋孵化而來。

1.3 一次免疫試驗 挑選體重相近的4日齡SPF雞70只,空腹稱重,隨機分為7組(T1～T5、C1和C2組),每組10只,其中T1～T5組為免疫攻毒組,C1組為攻毒對照組,C2組為空白對照組。T1～T5組免疫接種 PMsd,免疫劑量分別為：50、100、200、400、600個孢子化卵囊/只,免疫后5～9 d,每天分別收集各組所有糞便,稱重,測定OPG,計算卵囊產量；于11日齡(第一次免疫后第7天)空腹稱重各組雞,同時用親本株Msd對T1～T5組和C1組進行攻毒,劑量為10×104個孢子化卵囊/只。攻毒后每日觀測雞的臨床狀況、死亡情況和血便堆數。攻毒后第5～7天觀測各組雞的卵囊排出量、OPG,計算卵囊減少率。攻毒后第7天稱重,剖解雞,觀測小腸病變并計算RLS、相對增重率、相對保護率、卵囊減少率和ACI。

1.4 二次免疫試驗 挑選體重相近的4日齡SPF雞70只,空腹稱重,隨機分為7組(TT1～TT5、CC1和CC2組),每組10只,其中TT1～TT5組為二次免疫攻毒組,CC1組為攻毒對照組,CC2組為空白對照組,TT1～TT5組雞于4日齡時進行早熟株第一次免疫,免疫劑量分別為：50、100、200、400、600 個孢子化卵囊/只,于11日齡(第一次免疫后第7天)進行第二次免疫,免疫劑量分別為：100、200、400、800、1 200個孢子化卵囊/只,第二次免疫后5～9 d,每天分別收集各組所有糞便,稱重,測定OPG,計算孢子化卵囊減少率。于二次免疫后第10天(21日齡)空腹稱重各組雞,同時用親本株Msd對TT1～TT5組和CC1組進行攻毒,劑量為10×104個孢子化卵囊/只,攻毒后觀察和測定指標同一次免疫試驗。

1.5 檢測指標 卵囊減少率=(不免疫攻毒組卵囊平均產量-免疫攻毒組卵囊平均產量)/不免疫攻毒組卵囊平均產量×100%；相對卵囊產量(ROP)=免疫攻毒組的卵囊產量/不免疫攻毒組的卵囊產量×100%；病變記分減少率(RLS)=(不免疫攻毒組的平均病變記分-免疫攻毒組的平均病變記分)/不免疫攻毒組的平均病變記分×100%；相對增重率=(試驗組雞平均增重/空白組雞平均增重)×100%；抗球蟲指數(ACI)=(存活率+相對增重率)-(病變值+卵囊值)；相對保護率(%)=(不免疫攻毒組OPG—免疫攻毒組OPG)÷不免疫攻毒組OPG×100%[8-9]。

免疫效果判定標準：E.maxima早熟株最小免疫劑量是指對強毒株產生抵抗力,達到良好免疫效果(相對增重率≥85%,RLS≥70%,卵囊減少率≥75%,相對保護率≥90%和ACI≥170)的最小免疫接種劑量。

2 試驗結果

2.1 一次免疫試驗 各免疫攻毒組雞均無血便、無死亡現象。免疫劑量為50個孢子化卵囊/只時(T1組),卵囊減少率可達84.42%,說明已對雞體產生部分免疫保護。 T2、T3、T4、T5組 RLS均≥70%,卵囊減少率≥75%,因此判定為有保護力。一次免疫劑量≤300個孢子化卵囊/只的T1、T2、T3組的相對免疫保護率＜90%。而免疫劑量為400個孢子化卵囊/只及以上時,相對增重率≥85%,RLS≥70%,卵囊減少率≥75%,相對保護率≥90%,抗球蟲指數≥170,符合標準,說明免疫劑量為400個孢子化卵囊/只時,早熟株可達到良好免疫效果,具備良好的免疫原性,可將早熟株一次免疫的最小免疫劑量定為400個孢子化卵囊/只(見表1和圖1)。

2.2 二次免疫試驗 各免疫攻毒組和空白組雞均無血便、無死亡現象。TT1組RLS為66.67%,孢子化卵囊減少率為93.29%,ACI為173.34,說明已對雞體產生一定免疫保護。 TT2、TT3、TT4、TT5組的 RLS≥70%、卵囊減少率≥75%、相對增重率≥85%,ACI≥170,均達到了良好免疫效果。故早熟株兩次免疫的最小免疫劑量可定為一免100個孢子化卵囊/只、二免200個孢子化卵囊/只(見表2及圖2)。

圖1 一次免疫不同劑量E.maxima早熟株對抗球蟲指數的影響

表1 E.maxima早熟株一次免疫保護效果

2.3 E.maxima早熟株一次免疫對雛雞生長性能及卵囊產量的影響 在一次免疫期間(4～11日齡)試驗雞群的精神狀態未見異常,隨著免疫劑量增加,免疫組雞平均增重、相對增重率均下降。免疫劑量在50～600個孢子化卵囊/只時,早熟株組雞的相對增重率均在90%以上；免疫接種后卵囊產量呈上升趨勢。各免疫組雞無死亡、無血便現象,見表3。

表2 E.maxima早熟株二次免疫保護效果

圖2 二次免疫不同劑量E.maxima早熟株對抗球蟲指數的影響

表3 一次免疫對雞生長性能及孢子化卵囊產量的影響

2.4 E.maxima早熟株二次免疫對雛雞生長性能的影響 在兩次免疫期間(4～21日齡)試驗雞群的精神狀態未見異常,隨著免疫劑量增加,二次免疫組雞平均增重、相對增重率均下降,一免/二免劑量在50個孢子化卵囊/100～400個孢子化卵囊/800個孢子化卵囊/只時,雞相對增重率均在90%以上；各組雞無死亡、無血便現象,見表4。

表4 二次免疫對雛雞生長性能影響

3 討論

本試驗結果表明,用不同免疫劑量的E.maxima早熟株對試驗雛雞進行一次免疫,免疫后以10×104個孢子化卵囊/只同源親本株攻毒,各免疫組的卵囊產量比非免疫攻毒組明顯減少。表明E.maxima早熟株(PMsd)具有良好免疫原性,不同免疫劑量均能誘發雛雞產生保護力。

本試驗對E.maxima早熟株一次免疫與二次免疫效果進行比較分析發現,二次免疫組攻毒后相對增重率、卵囊減少率、相對保護率、ACI值高于一次免疫組；當免疫劑量為一免50～200個孢子化卵囊/只,二免劑量為100～400個孢子化卵囊/只時,二免組的RLS高于一免組；二免后ROP低于一免組。無論對4日齡SPF雞進行一次免疫還是先后進行兩次免疫,隨著免疫劑量的增加,免疫攻毒組雞的ROP降低,相對增重率、卵囊減少率、相對保護率、RLS、ACI等升高,產生的免疫保護力越大,但疫苗株對雛雞增重的不良影響也越大。進行兩次免疫的效果優于只進行一次免疫。

杜愛芳等[10]研究了GC02雞球蟲疫苗的免疫效果,結果表明二次免疫的效果優于一次免疫和三次免疫；二次免疫能有效地控制雞球蟲病的發生,并對雛雞有明顯的促生長作用。卞國志等(2006)[11]研究了不同免疫劑量和免疫次數對雞毒害艾美耳球蟲免疫保護力的影響,表明在籠養條件下,2次免疫處理組各項指標明顯優于1次免疫組,由于較少或基本缺乏卵囊的循環感染,1次免疫后所激發的免疫力持續時間較短,要達到球蟲病的免疫控制,以進行2次免疫接種為好。

本試驗以分離誘導的山東E.maxima早熟株對同源強毒株的免疫效果進行了研究,結果表明,該早熟株一次免疫的最小免疫劑量為400個孢子化卵囊/只；兩次免疫的最小免疫劑量為一免100個孢子化卵囊/只、二免200個孢子化卵囊/只,為研制適合一定區域的球蟲地方疫苗提供新的疫苗蟲株和理論依據。