規模化豬場仔豬圓環病毒2型與3型混合感染的檢測與控制

朱秀高,李艷青,史 紅,徐偉超,方 浩

(1.武漢回盛生物科技股份有限公司,湖北 武漢 430042；2.中國農業大學動物醫學院,北京 海淀 100193 3.濰坊科技學院生物研發中心 ,山東 壽光 262700；4.回盛生物豬病研究院 ,湖北 武漢 430042)

豬圓環病毒(PCV)感染在豬場普遍存在,自出現以來,雖然有1型和2型兩種基因型,但一直以2型為主致病,臨床表現多以斷奶后多系統衰竭綜合征(PMWS)為主。2016年Phan等報道PCV3型在美國引起母豬繁殖障礙和皮炎腎病問題[1],何其蓋等隨后報道了PCV 3型在國內豬場的發病情況[2]。從對病料的回顧性檢測中發現,PCV 3型在國內存在已有較長時間,且很多出現PCV 3型感染的豬場都已經免疫過PCV 2型疫苗[3]。因此3型的出現加重了豬場PCV防控的壓力。

2017年9月,山東某存欄1 300頭母豬豬場反饋該場連續3批體重40 kg左右的生長豬出現以外觀漸進性消瘦、皮膚丘疹樣病變(見中插彩版圖1),剖檢以淋巴結腫大、肺間質增寬為主要特征的疾病(見中插彩版圖2、3),發病率為15%,死亡率不到1%。經現場診斷與實驗室檢測確診為PCV 2型和PCV 3型混合感染。

圖1 發病豬消瘦、皮膚丘疹樣凸起

圖2 發病豬淋巴結腫脹

圖3 發病豬肺間質增寬、出血及膠凍樣滲出

1 材料與方法

1.1 材料 檢測樣品：A.組織病料：現場宰殺病豬3頭,分別取其脾臟、淋巴結和肺臟組織凍存；B.唾液：用滅菌后的棉繩采集2個發病豬圈的圈內混合唾液樣本2份凍存；C.血清：經前腔靜脈采集發病豬血液15份,離心分離血清凍存；所有樣品標記凍存后,送實驗室進行PCR診斷,測定樣品中是否存在PCV。

主要檢測試劑：Transgen EasyPure Viral DNA/RNA Kit。

主要檢測儀器：BIO-RAD PCR儀 S1000、天能1600凝膠成像系統。

引物：根據GenBank中公布的PCV相關全基因組序列和Ku等報道[2],分別設計針對 PCV2與PCV3 的引物：PCV2-F：5′-AAGGGCTGGGTTATGGTATGv3′、 PCV2-R： 5′-CGCTGGAGAAGGAAAAATGG-3′、 PCV3-F：5′-TTACTTAGAGAACGGACTTGTAACG-3′、PCV3-R：5′-AAATGAGACACAGAGCTATATTCAG-3′,預期擴增片段分別為353 bp和649 bp。

1.2 方法 將組織病料用無菌生理鹽水沖洗、研磨成組織懸液,反復凍融3次,6 000 r/min離心30 min取上清液,0.22 μm濾膜除菌后使用；血清和唾液經6 000 r/min離心30 min取上清,經0.22 μm濾膜過濾除菌后使用。處理的樣品液按試劑盒推薦方法提取 DNA后進行PCR反應,反應體系：95℃預變性 5min、94 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72 ℃ 45 s,30 個循環后72℃延伸10 min。取反應產物5 μL在1%瓊脂糖凝膠上電泳檢測。

2 結果與處理

2.1 結果 電泳后的凝膠圖像(見中插彩版圖4)顯示,1、3、5、7、11、13、15、17 號和 19 號樣品為PCV2陽性,10號和14號樣品為PCV3陽性。

圖4 送檢樣品PCV檢測結果

綜合臨床、剖檢及實驗室檢測結果,確診該豬場發病是由PCV2和PCV3混合感染造成。

2.2 處理 針對確診結果,建議豬場及時采取“增強抵抗力+抗病毒+防止繼發感染+防應激”的措施,在生長豬階段,每噸飼料添加茯苓多糖散500 g、10%磺胺二甲嘧啶+10%酒石酸泰樂菌素1 500 g和復方維生素+氨基酸+活菌添加劑2 000 g,連用15 d；母豬群及時間隔1個月免疫2次PCV 2型疫苗,飼料中添加茯苓多糖散500 g/噸,每月1次,每次15 d,連用3個月。

豬場反饋處理后5 d大群采食量開始上升、活動頻率加大,10 d后被毛開始變得柔順有光澤、消瘦情況逐步緩解,皮膚上的疹塊逐步消退。

3 分析與建議

通過查閱該豬場的生產記錄,并與生產各崗位人員交流發現,發病仔豬的母豬在5月份的圓環疫苗普免中由于人為因素出現漏免,造成免疫空白長達8個月,使得豬群特別是出生仔豬缺少母源抗體的保護。另一方面,該豬場7月份引入190頭后備母豬40 d左右,場內少量經產母豬出現了以木乃伊為主要特征的中后期流產,懷疑乙腦感染直接采取淘汰措施后再未有新流產病例出現,錯過了早期發現PCV潛在感染的機會?！奥┟?引種帶毒”兩重因素疊加,造成了本次仔豬的發病。

雖然豬場自身管理因素是本次發病的主要原因,但檢測中發現的PCV 3型問題應引起廣大養豬從業人員的高度重視。近年來國內養豬業中頻頻出現的“舊病復發”問題,如仔豬病毒性腹瀉(PED)、偽狂犬病(PRD)和藍耳病(PRRS)等,究其主要原因都是出現了新基因型致病毒株,由于現有疫苗對此類流行毒的交叉保護力欠佳,導致這些疾病在全國范圍快速暴發,給一線養豬生產造成巨大損失。PCV 3型病毒首次報道后,韓國[4]、意大利[5]、波蘭[6]、巴西[7]和英國[8]等隨后確認該國豬群出現了PCV 3型感染,國內如河北[9]、山東等13省[10]也檢測發現存在PCV 3型感染。根據國內豬場圓環疫苗的免疫現狀及臨床調查,很多PCV 3型感染豬場都免疫過PCV 2型疫苗,此外,從基因型分析,PCV 2和PCV 3存在較大差異,進化樹中兩者屬于不同分支。因此可以推測目前使用的PCV 2型疫苗不能給予PCV 3型感染以充分保護,兩者交叉免疫保護力偏低。在目前尚無PCV 3型疫苗的情況下,豬場在面對PCV感染時應考慮如何在PCV 2型防控基礎上進一步做好PCV 3型的控制,建議可以考慮采取“PCV 2疫苗+中藥增強免疫+防止繼發感染”組合來進行控制。