HE染色和巴氏染色兩種不同方法在宮頸液基細胞檢查中應用價值

何天近

【摘 要】 目的：探索HE（Haematoxylinandeosin）染色和巴氏染色兩種方法處理宮頸液基細胞學檢查（TCT）中應用價值。方法：選取我院2017年1月-2018年12月2000例宮頸液基細胞學檢查（TCT）制片，平均分成兩組，分別用HE染色和巴氏染色，按照TBS分類，ASC-H及以上判讀為陽性、ASC-H及以上陰道鏡活檢、比較兩組染色方法處理宮頸TCT檢查的陽性率與病理活檢診斷符合率。結果：巴氏染色組TCT細胞學陽性率為4.7%、與病理活檢診斷符合率為77.3%，HE染色組TCT細胞學檢查陽性率為4.5%、與病理活檢診斷符合率為76.7%。結論：兩種染色方法在液基細胞學（TCT）檢查中應用價值無明顯差異、我們可以根據醫院的條件合適選擇這兩種方法中一種應用于宮頸液基細胞學檢查。

【關鍵詞】 液基細胞學;巴氏;H-E染色;應用價值

【中圖分類號】R365【文獻標志碼】A【文章編號】1005-0019（2019）09-219-02

宮頸癌是我國女性健康的重要殺手、從癌前病變轉變成癌有一個過程、一般所需10年左右、因此早癌篩查很重要，而液基細胞學（TCT）檢查是目前國際上較先進的一種宮頸癌細胞學檢查技術，檢出率為100%，在宮頸病變診斷中普及，改變了傳統手工涂片的方法，制片效果好，利于觀察，陽性檢出率高，是應用于婦女宮頸癌篩查的一項先進的技術[1]。宮頸細胞學的常用染色方法以巴氏染色，HE染色為主，效果各有優劣。比較兩種染色方法，分析各自的優缺點，便于在工作中選擇合適的染色方法。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

我院TCT采用武漢呵爾醫療科技發展有限公司的薄層液基細胞涂片試劑盒（細胞保存液），細胞保存液I型，規格15ml/瓶人份，保存條件4℃-30℃保存。細胞保存液I型成分為：無水乙醇﹑氯化鈉和去離子水等，I型主要用于宮頸癌篩查，對取得的宮頸細胞進行固定和保存。

H-E 染色，其染液用蘇木素染色液采用Harris液為珠海貝索生物技術有限公司生產的。伊紅（水溶性）為珠海貝索生物技術有限公司生產的。按《臨床技術操作規范》病理學分冊介紹的方法自行進行染液配制。

1.2 取材與制片方法

取材方法：將宮頸充分暴露以后，用一次性宮頸刷采集宮頸細胞標本，大拇指和食指捏住刷柄，將宮頸刷伸入到宮頸口內，順時針旋轉3-5圈，抽出宮頸刷，卸下刷頭放入裝有15ml的細胞保存Ⅰ液的小瓶中。從而成功提取宮頸處的表皮細胞，在這里值得注意的是，（如果病人宮頸上的粘液或分泌物較多，應先用棉球將該粘液或分泌物提前擦拭一下后再取樣）。

液基細胞制片，婦科取材保存于細胞保存液中送檢。通過95%酒精固定30min，水沖洗，分別用巴氏、HE兩種染色法。

巴氏染色：液基細胞涂片置蘇木素染液浸染3min，水沖洗，鹽酸酒精分化5s，水沖洗堿水反藍，95%酒精2min，EA-50染色2min，95%酒精第一次lmin，95%酒精第二次lmin，100%酒精第一次2min，100%酒精第二次5min，二甲苯1～2min，中性樹膠封固[2]。

HE染色：浸入蘇木素染液浸染10～15min，水沖洗30s～1min，1%鹽酸酒精分化30S，流水沖洗15min，1%伊紅染色3～5min，水沖洗，90%～95%酒精第一次分化30s，95%酒精第二次1min，95%酒精第三次分化1min，100%酒精第一次分化2min，100%酒精第二次分化5min，二甲苯1～2min，中性樹膠封固。

2 結果

巴氏染液染出的涂片， 其細胞透明度好， 細胞核結構清新， 胞質色彩豐富而鮮艷。染色結果：細胞核呈深藍色，核仁呈紅色;不同分化類型的鱗狀上皮細胞，其胞質染色顏色不一。

HE（Haematoxylinandeosin）染色：蘇木素染色后的細胞核呈現藍色，染色透明度好，核與胞質對比鮮明、紅藍適度。兩組染色方法處理宮頸TCT診斷均按照TBS分類、ASC-H及以上判讀為檢查陽性。巴氏染色組診斷ASC62例（ASC-H8例、ASCUS54例）、LSIL26例、HSIL10例、SCC3例，HE染色組：ASC50例（ASC-H7例、ASCUS43例）、LSIL29例、HSIL7例、SCC2例，兩組染色方法處理TCT診斷結果與病理活檢診斷結果符合情況如下表由上述得出結果：巴氏染色組處理TCT檢查陽性率4.7%（47/1000）、HE染色組處理TCT檢查陽性率4.5%（45/1000），巴氏染色組處理宮頸TCT陽性病例與病理組織學診斷符合率77.3%（34/46）、HE染色組處理宮頸TCT檢查陽性病例與病理組織學診斷符合率76.7%（33/43），通過兩組染色方法處理宮頸TCT檢查陽性率及病理組織學診斷符合率對比分析、發現宮頸TCT檢查陽性率及與病理組織學診斷符合率、兩種染色方法無統計學差異。

3 討論

宮頸液基薄層細胞學檢查技術是細胞學診斷的一場革命，它通過技術處理去掉涂片上的雜質，直接制成清晰的薄層涂片，液基薄片背景中細胞分布均勻、重疊現象較少、細胞形態保存完好、細胞不容易退變（與傳統涂片相比）、使閱片者更易觀察，它由于更全面、也更實用、更具有臨床應用價值，其診斷準確性比傳統的細胞涂片要高[3]，目前在我國大部分地區已開始應用起來。

涂片的正確診斷除了與涂片質量、涂片固定有關外，與染色的好壞關系密切，染色的好壞很影響觀察[4]HE（Haematoxylinandeosin）染色的特點，首先染液的滲透性強，染色透明度好，核漿對比鮮明，操作簡便、核仁清晰;再者宮頸陰道為非角化復層鱗狀上皮，H-E染色后的細胞涂片更易與組織切片相對照[5].其次，當HE（Haematoxylinandeosin）染色不理想時，還能進行彌補，如染色較淺，可分別進行蘇木素及伊紅復染;如用蘇木素使涂片染色過深，后用鹽酸酒精處理，直到背景干凈，至滿意為止，最后H-E染色液也可以重復使用，直至認為效果不佳時再換用新的染色液，缺點：胞質染色顏色單一、胞核內部結構不夠清晰、不利于沒有經驗的診斷醫師閱片。巴氏染色背景干凈、細胞質染色顏色不一、豐富而鮮艷、胞核深藍色、胞核與胞質對比度明顯、胞核內結構清晰、核仁清晰、尤其是染色質粗細情況更為能夠保證HPV感染引起的細胞嗜異染和雙染以及異常角化方面給予更多信息表達，缺點：染色成本較高，工作步驟繁多，而宮頸液基細胞學檢查（TCT）TBS判斷標準是根據細胞核大小、細胞核異型、細胞核染色質粗細、核仁情況、核漿比來判斷將鱗狀上皮分為未見上皮內病變（NILM）、非典型不明確意義鱗狀上皮（ASC，包括ASCUS、ASC-H）、低級別上皮內病變（LSIL）、高級別上皮內病變（HSIL）、鱗狀細胞癌（SCC）。從這個角度兩種染色方法都能滿足液基細胞學檢查診斷需要;從本文隨機選取的2000例平均分成兩組、檢查陽性率4.7%和4.5%，在與病理組織學診斷符合率77.3%和76.7%、兩組無顯著的統計學差異。我們在實踐工作中可以根據醫院的具體情況來選擇巴氏染色方法和HE染色方法處理宮頸液基細胞學檢查。

參考文獻

[1] 朱燕燕，懷建國，蔣艷.細胞DNA定量分析結合液基細胞學檢測在肺癌診斷中的價值[J].臨床與實驗病理學雜志，2016，32（5）：92-97.

[2] 王俊生.探討HE染色方法在臨床病理診斷中的應用價值[J].世界最新醫學信息文摘，2016，16（68）：96-97.

[3] 王瑩 卞美璐主編 液基薄層宮頸細胞學圖譜[M]，第一版 科學技術文獻出版社團組織，2005，11-14。陳樂直，主編。婦產科診斷病理學[M]，第1版。，北京：人民軍醫出版社，2002。478-503。

[4] 廖秦平 宮頸癌病因學研究新進展[J]，中國婦產科臨床雜志，2003，4（4）：243-245。

[5] 于芳，李純.DakeweDP260全自動智能染色機在細胞染色中的使用體會[J].診斷病理學雜志，2017（3）：52-53.