乳腺癌患者超聲檢查中PSV、RI值與術后組織中MMP-11、VEGF表達的相關性探討

譚興利,陸偉輝,湯學文,繆賢盛,徐 蓓,彭世義△

1.復旦大學附屬中山醫院青浦分院超聲科 (上海201799);2.復旦大學附屬中山醫院青浦分院普外科(上海201799)

乳腺癌是女性最常見的腫瘤之一，主要發生于中老年女性[1]。超聲是常規篩查的重要方法，近年認為收縮期峰值血流速度(PSV)和阻力指數(RI)對判斷病變性質有重要價值[2]。乳腺腫瘤在生長時間質的血管生成作用明顯，可以用CD31和CD34等血管內皮標記物輔助觀察，這種新形成的血管常伴隨著血管內皮生長因子等血管生成因子的大量分泌[3]。血管內皮生長因子(VEGF)具有經典的血管生成的作用，可以通過其受體VEGFR2調節血管內皮的增殖[4]。MMPs家族的多個成員在乳腺癌的生長及轉移中起重要的調節作用，也能通過調節VEGF的表達，間接促進血管的生成[5]，基質金屬蛋白酶-11(MMP-11)作為家族的重要成員，具有對細胞外基質的調節作用和間接的促血管生成的作用。本研究觀察乳腺癌患者超聲中PSV和RI值的特征，并探討兩者與術后組織中MMP-11和VEGF的關聯性，現報道如下。

資料和方法

1 一般資料 收集2016年8月至2018年3月在我院診斷為乳腺癌的患者作為研究組，共71例，患者均為女性，年齡41～87歲，中位年齡59歲。納入標準：①經術后病理醫師確診并分級，符合WHO中的診斷標準；②均為首次乳腺癌發病；③家屬或患者簽署知情同意書。排除標準：①術前行放、化療的患者；②有家族遺傳病史者；③伴有其它器官惡性腫瘤者。收集19例乳腺良性病變患者作為對照組，均為女性，年齡41～78歲，中位年齡53歲，均經術后病理確診，其中乳腺腺病10例，乳腺纖維腺瘤9例。

2 超聲檢測PSV和RI值 患者檢查時取仰臥位，應用GE logiq E9百勝MyLab 30彩色超聲診斷儀，選擇高頻淺表探頭，頻率是5～12 MHz，兩上肢肘關節呈90度，顯露乳房，以乳頭為中心由內向外探查，發現腫塊標記，觀察部位、大小、形態、邊緣及血供情況，同時測量腫塊的血流動力學參數，重點關注PSV和RI值。

3 MMP-11和VEGF表達檢測 術后組織常規行中性福爾馬林固定、脫水、石蠟包埋及切片。MMP-11和VEGF的檢測均應用免疫組化方法。MMP-11和VEGF的試劑均為濃縮液，先按不同比例稀釋后進行預實驗，以最佳顯色濃度用于正式實驗(MMP-11為1∶250，VEGF為1∶500)。標本均集中檢測，由同一病理科技師進行操作，嚴格按說明書中的操作步驟完成實驗，做好質控工作。

4 MMP-11和VEGF結果判定 MMP-11和VEGF的陽性部位是細胞漿，以呈現淺黃色、黃色及棕黃色為陽性。顯色強度：無著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。陽性百分比評分：選擇上皮細胞分布且顯色較為集中的熱點區，并在400倍視野下進行百分率評估，以小于5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，大于51%為3分。以顯色強度和陽性百分比兩者評分相加為最后得分。以<2分為陰性，以≥2分為陽性。計算陽性率。

結 果

1 兩組中PSV和RI值比較 兩組中PSV和RI值比較差別有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 兩組中PSV和RI值比較

2 兩組中MMP-11和VEGF陽性率比較 兩組中MMP-11和VEGF的陽性率差別有統計學意義(P<0.01),見表2。

表2 兩組中MMP-11和VEGF陽性率比較[例(%)]

3 PSV和RI值在觀察組不同臨床特征分組中的比較 觀察組中PSV、RI的表達與腫瘤的最大徑和組織學評分相關,見表3。

4 MMP-11和VEGF在觀察組不同臨床病理特征中的比較 觀察組中MMP-11和VEGF的表達與腫瘤的最大徑和組織學分級相關，MMP-11與淋巴結轉移相關，VEGF與腫瘤的增殖指數相關，見表4。

5 觀察組中PSV、RI值與MMP-11和VEGF表達的相關性分析 線性相關分析顯示RI 與VEGF(r=0.45，P=0.0412)、RI與MMP-11(r=0.41，P=0.0458)、MMP-11與VEGF(r=0.53，P=0.0129)均具有正相關性。其它指標間未見明顯相關性。

表3 PSV和RI值在觀察組不同臨床特征分組中的比較

表4 MMP-11和VEGF在觀察組不同臨床病理特征中的比較[例(%)]

討 論

乳腺癌二級預防是惡性腫瘤中最能有效提高生存率和降低死亡率的重要措施，臨床上早期乳腺癌的發現率僅25%，超聲檢查是早期篩查的重要方法[6]。乳腺癌發生初期主要局限在輸乳管或終末小葉單位內的上皮，表達為上皮的異型增生和癌變，如果增生的上皮尚未突破基底膜或肌上皮細胞構成的屏障，則為原位癌，如果突破基膜或肌上皮細胞構成的屏障則形成浸潤性癌。組織學表現為病灶不規整，邊緣不清晰。超聲檢查可見邊界不規則、有鋸齒狀改變、回聲不均勻、微粒樣鈣化等[7]，尤其是病灶后方回聲衰減、微鈣化是臨床診斷的重要依據。研究認為腫瘤細胞數量增加時，血管內皮細胞間的連接也明顯增加，血流供應豐富。CDFI/PDI能觀察到直徑大于0.1 cm的血管，并能初步判斷血管分枝和級聯的方式[8]。PSV和RI是超聲中觀察血管的重要指標。惡性腫瘤患者可以觀察到血流信號，并發現RI值超過0.65的病變，呈現高速高阻型頻譜的現象。近年學者在組織學中可以觀察到惡性腫瘤間質的血管生成，并發現了相關的蛋白。VEGF是血管生成的促進因子，在惡性腫瘤進展時，腫瘤細胞分泌增加，并且對腫瘤間質的內皮細胞增殖有明顯的促進作用，新生血管在機械性的沖擊下形成管腔，使腫瘤的血液供應增加，為細胞生長提供必要的養料[9-10]。MMP-11是MMPs家族中間質溶解素成員，其對基質蛋白的降解在不同腫瘤中的程度不一樣，但是其對絲氨酸蛋白酶抑制因子有明顯的作用，并且可以被弗林蛋白激活，與MMPs家族中其它成員的對機體的作用相似[11]。史曉宇等[12]認為MMP-11在結腸腺癌中表達的陽性率明顯升高，其與TNM分期、分化程度和淋巴結轉移相關，且二者具有正相關性，認為二者的高表達與病變的形成密切相關，并且可以作為臨床早期診斷、監測轉移及預后的指標。

本研究結果顯示兩組術前超聲中PSV和RI值的表達差別有統計學意義，提示兩者的升高可能提示有乳腺癌的風險。結果顯示兩組術后組織中MMP-11和VEGF的表達差別有統計學意義，提示者具有癌基因樣的作用，可能是腫瘤形成的促進蛋白。觀察組中PSV、RI值、MMP-11和VEGF的表達均與腫瘤的最大徑和組織學分級相關，提示PSV、RI值提示腫瘤生長和進展，MMP-11和VEGF是促進腫瘤生長和進展的蛋白，即MMP-11和VEGF高表達引起腫瘤細胞生長和蔓延。線性相關分析顯示RI 與VEGF、RI與MMP-11均具有正相關性，提示RI值與術后組織中MMP-11和VEGF的表達有一致性。近年認為VEGF與預后有關，因此術前RI值升高不僅在一定程度上提示腫瘤性質，其也可能反應出患者預后的特征。實驗結果也證實RI值的不同對術后組織學分級有一定的預測價值。VEGF與腫瘤細胞增殖有明顯關聯，即VEGF高表達可以促進腫瘤細胞的增生和繁殖，腫瘤細胞生長加速，腫瘤體積增大，細胞異型性明顯，預后較差。而MMP-11可能具有多種功能，其在乳腺癌中可以在一定程度上降解細胞外基質，還可能對血管生成有一定的調控作用，這也是MMPs家族成員中多種蛋白的作用之一[13]。MMP-11對血管的調控可能是間接的，與機體中其它蛋白協同作用后，進而促進內皮細胞增殖[14]。本實驗觀察到MMP-11和VEGF的相關性也證實了MMP-11對血管生成的間接作用。VEGF對腫瘤血管生成的調節是直接的，通過分泌作用，直接促進內皮細胞的生長。

總之，超聲檢測PSV和RI值在術前判斷乳腺癌有一定幫助，組織中MMP-11和VEGF的表達與病變的進展有關。RI值與MMP-11和VEGF的表達有一定相關性。RI值升高的意義可能更明顯。這種無創性檢查在術前評估有明顯意義，適于在臨床中應用。