嬰幼兒支原體肺炎免疫球蛋白及T淋巴細胞亞群表達水平變化

馮伊利，羅會萍，李成軍，王金國，李鳳娟

(臨海市第二人民醫(yī)院 兒內(nèi)科，浙江 臺州 317016)

肺炎支原體(mycoplasma pneumonia，MP)是介于細菌和病毒之間的一種微生物，MP感染是一種全球性感染性疾病，主要通過呼吸道飛沫傳播，是嬰幼兒下呼吸道感染的最主要病原體之一[1]。由于嬰幼兒免疫系統(tǒng)不完善，是MP感染的高危人群，易發(fā)生肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)，發(fā)生MPP后免疫功能會受到不同程度的影響[2]。免疫因素在MP引發(fā)機體損傷的過程中具有重要作用，但有關嬰幼兒MP感染時的免疫功能變化相關研究還十分有限。本研究探討嬰幼兒肺炎支原體肺炎發(fā)病后的免疫功能變化情況，現(xiàn)將研究過程及結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2016年12月—2017年12月收治的MPP患兒68例為MPP組。納入標準：符合《兒科學》(第6版)[3]中MPP診斷標準；經(jīng)臨床診斷無其他病原體感染；留取標本前1周，未使用免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)激素等影響免疫功能藥物；家長知情同意。排除標準：自身免疫性疾病、先天性免疫功能缺陷病、支氣管哮喘、肺結(jié)核、其他感染性疾病以及惡性腫瘤者。另外選取同期于我院進行健康體檢的68例嬰幼兒為對照組，無近期發(fā)熱、感染及咳嗽病史，既往無慢性疾病史和免疫性疾病。MPP組中男38例，女30例；年齡2～34個月，平均12.9±5.9個月。對照組中男36例，女32例；年齡2～35個月，平均12.6±6.0個月。兩組患兒一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本次研究獲醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 分別在急性期MPP患兒抗感染治療前(入院后2 h內(nèi))和應用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療2～4周后(臨床及影像學癥狀均顯著好轉(zhuǎn))，采集靜脈血3 mL。同時采集對照組靜脈血3 mL。將所采集血標本平均分成2管，一管不抗凝，離心獲得血清，用于補體、免疫球蛋白檢測；另一管ETDA抗凝，用T淋巴細胞亞群檢測。MPP急性期的診斷標準：明顯氣促或心動過速；應用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周后無效(體溫持續(xù)在38.5℃及以上)；肺部影像學資料顯示大片狀致密影。MPP恢復期的診斷標準：應用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周及以上出現(xiàn)氣促癥狀減輕；肺部影像學資料顯示肺炎好轉(zhuǎn)；患兒高燒消退(體溫低于38.5℃)[4]。

1.2.2 補體、免疫球蛋白檢測 采用ELISA法檢測IgE，試劑盒為北京利德曼生化股份有限公司提供；采用免疫散射比濁法檢測IgG、IgA、IgM、C3、C4，試劑盒為北京利德曼生化股份有限公司提供。嚴格按照廠家說明書操作。

1.2.3 T淋巴細胞亞群檢測 取 CD3、CD4、CD8單抗各20 μL，加入抗凝全血50 μL，充分混勻，室溫避光孵育15 min，于BD FACSCalibur流式細胞儀檢測CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞百分比，同時計算得出CD4+/CD8+T比值。

2 結(jié)果

2.1 補體C3、C4水平 MPP組急性期補體C3、C4水平均顯著低于MPP組恢復期和對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 IgG、IgA、IgM、IgE水平 MPP組急性期IgA、IgM水平均顯著高于MPP組恢復期，對照組IgE水平顯著低于MPP組急性期和MPP組恢復期；差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。三組血清IgG水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 三組補體C3、C4水平比較(g/L)

注：*與MPP組恢復期比較，P<0.05；▲與對照組比較，P<0.05。下同。

表2 三組IgG、IgA、IgM、IgE水平比較

2.3 T淋巴細胞亞群比例 MPP組急性期CD4+T和CD4+/CD8+T均低于對照組和MPP組恢復期，CD8+T高于MPP組對照組和MPP組恢復期；差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。三組CD3+T比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 三組T淋巴細胞亞群比例比較

3 討論

MPP是嬰幼兒常見肺炎，目前對其確切的發(fā)病機制還不十分清楚，其中免疫功能紊亂學說、MP直接侵入學說及上皮細胞吸附是當前接受最為廣泛的解釋機制[5]。既往大量臨床研究顯示，體液免疫和細胞免疫在 MPP 發(fā)生、發(fā)展過程中變化明顯，提示體液免疫和細胞免疫在MPP的發(fā)病過程扮演重要角色[6-7]。本研究主要對MPP急性期和恢復期體液免疫和細胞免疫變化進行分析。

B淋巴細胞是一種體液免疫的要細胞，可分泌IgM、IgG、IgA以及補體 C3、C4等[8-9]。本研究結(jié)果顯示，健康嬰兒和支原體肺炎恢復期患兒的補體C3、C4水平均顯著高于支原體肺炎急性期患兒；IgA、IgM水平對比，肺炎支原體肺炎急性期患兒顯著高于恢復期患兒；表明在 MPP 感染急性期血清補體C3、C4及IgA、IgM顯著上升，在進入恢復期后隨之下降， IgG則變化不明顯。因此，在MPP患兒急性期和恢復期時免疫功能均存在紊亂變化。同時，這也表明在MP感染后，患兒機體發(fā)生了針對免疫復合物的炎癥反應，在有效殺滅MP的同時，也對自身器官產(chǎn)生一定的損害作用。大量研究證實在MP感染后容易造成氣道高反應性，這可能與機體產(chǎn)生高水平的IgE，誘發(fā)I型變態(tài)反應有關[10-12]。IgM、IgG、IgA等免疫球蛋白的主要生物學特性是，與相應的抗原特異性結(jié)合，激活補體，促進吞噬功能，并對毒素及多種病原微生物具有抑制作用，當炎癥發(fā)生后機體內(nèi)的IgM、IgG、IgA等表達水平有不同程度的升高[13]。

T淋巴細胞按表型不同可分為CD3+、CD4+和CD8+等亞群，其中CD3+T數(shù)量反映機體參與免疫應答的免疫活性細胞數(shù)量；CD4+為輔助性T細胞，其功能是促進B淋巴細胞分泌抗體，參與體液免疫的調(diào)節(jié)和CD8+細胞增殖、活化的調(diào)節(jié)；CD8+是一種殺傷性T細胞，其在病毒等病原體的清除過程中發(fā)揮重要作用[14]。有研究表明，宿主感染MP后產(chǎn)生異常的細胞免疫反應在MPP發(fā)病機制中起了更為關鍵的作用，主要表現(xiàn)為支原體于氣道上皮細胞表面黏附,釋放毒素,易影響宿主免疫系統(tǒng),誘發(fā)免疫系統(tǒng)改變[15]。本研究結(jié)果顯示，MPP組急性期CD4+T細胞下降，CD8+T細胞上升，CD4+T/CD8+T比值降低，表明MP感染患兒細胞免疫功能受損，經(jīng)有效治療后細胞免疫功能逐漸得到恢復。CD3+T細胞屬于成熟 T 淋巴細胞的典型性標志，CD4+T細胞屬于輔助性 T 淋巴細胞的特征性標志，CD8+T細胞屬于細胞毒 T 淋巴細胞，CD4+T/CD8+T反應細胞免疫系統(tǒng)功能的強弱，當機體受到病原體感染后，機體中細胞免疫系統(tǒng)被激活，產(chǎn)生的免疫因子對大量的病原體進行清除，進而機體損失大量的免疫因子，致使細胞免疫功能異常受損[16]。國內(nèi)外多位學者的研究表明，MPP組急性期CD8+T細胞升高，CD4+T細胞降低，CD4+/CD8+比值降低，認為MP感染患兒免疫功能受損[17-18]，這與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，嬰幼兒MPP急性期體液免疫和細胞免疫功能均存在明顯的紊亂，且在MPP恢復期免疫功能仍有一定的問題。因此，在對MPP患兒對癥治療的同時，適度進行免疫調(diào)節(jié)治療對于提高患兒治愈率具有重要意義。