膽囊癌患者血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平變化及其與臨床病理特征和預后的關系

尹紀來，高飛，李浩，王大平

(海南醫學院第一附屬醫院，海口570102)

膽囊癌是膽道系統最常見的惡性腫瘤，近年來其發病率呈明顯上升趨勢[1]。膽囊癌早期診斷困難，且易發生侵襲和轉移，患者預后較差[2]。基質金屬蛋白酶(MMPs)是一類由Zn依賴性內肽酶組成的酶家族，幾乎能降解細胞外基質的所有成分。近年研究發現，MMPs與腫瘤血管生成以及侵襲和轉移有關[3]。MMP-7、MMP-10和MMP-12是MMPs家族的重要成員。有研究表明，在食管癌、結直腸癌組織中MMP-7、MMP-10、MMP-12異常表達，且其表達變化與患者預后密切相關[4,5]。已有研究證實，血清MMP-7水平變化與膽囊癌患者預后有關。但血清MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者預后的關系尚不清楚。本研究觀察了膽囊癌患者血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平變化，并探討其水平變化與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年4月～2013年8月海南醫學院第一附屬醫院收治的膽囊癌患者62例(膽囊癌組)。所有患者經術后組織病理檢查明確診斷[6]。納入標準：①符合膽囊癌診斷；②初診，術前未接受任何抗腫瘤治療；③均行膽囊癌根治性手術；④臨床病理資料完整。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤者；②合并嚴重肝、腎功能障礙或心血管疾病者；③臨床病理資料不完整或不能配合后期隨訪者。其中，男35例、女27例，年齡42～71(56.37±10.92)歲；腫瘤浸潤深度：淺肌層20例，深肌層31例，全層11例；臨床分期[7]：Ⅰ、Ⅱ期29例，Ⅲ、Ⅳ期33例；組織分化程度：高分化10例，中分化37例，低分化15例；有淋巴結轉移22例，無淋巴結轉移40例。同期選擇海南醫學院第一附屬醫院收治的膽囊炎患者55例(膽囊炎組)，男31例、女24例，年齡40～70(55.19±9.88)歲。另選在海南醫學院第一附屬醫院體檢的健康志愿者50例(對照組)，男28例、女22例，年齡35～75(57.24±10.87)歲。三組性別、年齡具有可比性。本研究經海南醫學院第一附屬醫院醫學倫理委員會批準，所有研究對象或其家屬知情同意。

1.2 血清MMP-7、MMP-10、MMP-12檢測 采集所有研究對象清晨空腹肘靜脈血5 mL，2 500 r/min離心10 min，取上層血清，-80 ℃冰箱保存。采用ELISA法檢測血清MMP-7、MMP-10、MMP-12。檢測儀器為Multiskan FC型酶標儀，所有操作嚴格按試劑盒說明進行。

1.3 隨訪 膽囊癌患者術后采用電話、門診等形式定期隨訪，隨訪截至2018年8月31日。共隨訪0～60(31.25±8.63)個月。統計患者生存情況，計算5年生存率。

2 結果

2.1 三組血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平比較

見表1。

表1 三組血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與膽囊炎組比較，#P<0.05。

2.2 血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者臨床病理特征的關系 見表2。

表2 血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者臨床病理特征的關系

2.3 血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者預后的關系 膽囊癌患者血清中位MMP-7、MMP-10、MMP-12水平分別為7 437.39、404.96、921.81 pg/mL。以此為臨界值，將膽囊癌患者分為血清MMP-7、MMP-10、MMP-12高水平者和低水平者。62例膽囊癌患者中，血清MMP-7高、低水平者分別為26、36例，血清MMP-10高、低水平者分別為30、32例，血清MMP-12高、低水平者分別為28、34例。血清MMP-7高水平者與低水平者5年生存率分別為3.85%(1/26)、36.11%(13/36)，血清MMP-10高水平者與低水平者5年生存率分別為10.00%(3/30)、36.67%(11/32)，血清MMP-12高水平者與低水平者5年生存率分別為10.71%(3/28)、32.35%(11/34)。血清MMP-7、MMP-10、MMP-12高水平者5年生存率均明顯低于其低水平者(χ2分別為8.990、5.963、4.113，P均<0.05)。

3 討論

膽囊癌是膽道系統最常見的惡性腫瘤，占膽道惡性腫瘤的80%～95%。由于膽囊癌早期缺乏特異性臨床表現，且無敏感的檢查手段，因此誤診率和漏診率較高。多數患者就診時已屬中晚期，常伴有淋巴結轉移和鄰近器官轉移，5年生存率較低。因此，尋找與膽囊癌發生、發展相關的分子標志物，對指導其臨床治療、改善預后具有重要意義。

MMPs是一類由Zn依賴性內肽酶組成的酶家族，幾乎能降解細胞外基質的所有成分。近年研究發現，MMPs還能促進腫瘤生長、侵襲和轉移，其作用機制可能涉及以下幾點。第一，降解細胞外基質。基底膜是腫瘤侵襲和轉移的天然屏障。MMP-9又稱明膠酶B，是被糖化了的明膠酶，具有降解多種膠原的能力，主要降解構成基底膜主要成分的Ⅳ型膠原。第二，促進血管內皮細胞生成。MMPs降解細胞外基質時，可釋放血管生成相關因子，從而促進腫瘤血管生成[8]。第三，調節細胞與細胞或細胞與細胞外基質之間的黏附。MMPs可通過與細胞外基質中的底物結合，改變細胞與細胞或細胞與細胞外基質之間的黏附作用，繼而促進腫瘤細胞生長并抑制其凋亡。有研究表明，膽囊癌組織MMP-9陽性表達明顯高于慢性膽囊炎組織和膽囊上皮輕度不典型增生組織，且其陽性表達與膽囊癌臨床分期、組織分化程度、淋巴結轉移及患者預后有關。提示MMP-9在膽囊癌病情進展和患者預后中具有重要作用[9]。范躍祖等[10]研究表明，膽囊癌組織MMP-1高表達，并可作為評估膽囊癌浸潤深度、淋巴結轉移及患者預后的生物標志物。以上研究提示，MMPs與膽囊癌病情進展和患者預后密切相關。

MMP-7是MMPs家族的重要成員之一，其作用的底物范圍廣泛，包括細胞外基質和非細胞外基質蛋白。與其他MMPs不同的是，MMP-7是由腫瘤細胞分泌的，不僅可作為腫瘤的生物標志物，還可作為腫瘤藥物治療的潛在靶點[11]。已有研究證實，MMP-7可作為評估膽囊癌病情進展和患者預后的生物標志物之一，且其基因多態性與膽囊癌易感性有關[12]。MMP-10主要作用于細胞外基質蛋白，通過降解層黏連蛋白、彈性硬蛋白及Ⅳ型膠原等細胞外基質蛋白，改變細胞外基質結構和形態，對腫瘤轉移起促進作用。目前已證實，在結直腸癌、腎癌、胃癌等組織中MMP-10高表達，并可促進腫瘤的侵襲和轉移[13]。MMP-12是由活化的炎性巨噬細胞分泌，其在肺癌、結直腸癌等組織中表達升高，并與腫瘤進展有關[14]。張英峰等[15]研究表明，膽管癌患者血清和膽汁MMP-7水平均明顯高于膽道良性病變者，這對膽管癌診斷和鑒別診斷具有一定臨床價值。但血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者臨床病理特征和預后的關系尚不完全清楚。

本研究結果發現，膽囊癌組血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平均明顯高于膽囊炎組和對照組；膽囊癌患者血清MMP-7水平與腫瘤浸潤深度、臨床分期、組織分化程度和淋巴結轉移有關，血清MMP-10水平與腫瘤浸潤深度、臨床分期和淋巴結轉移有關，血清MMP-12水平與腫瘤臨床分期和淋巴結轉移有關。說明MMP-7、MMP-10、MMP-12可能參與膽囊癌的發生、發展。進一步研究發現，膽囊癌血清MMP-7、MMP-10、MMP-12高水平者5年生存率均明顯低于其低水平者。說明血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平與膽囊癌患者預后有關。

綜上所述，膽囊癌患者血清MMP-7、MMP-10、MMP-12水平明顯升高，其水平變化可能與腫瘤侵襲、轉移和患者預后有關。但由于本研究納入樣本量較少，其結論準確性還需擴大樣本量進一步研究證實。