強直性脊柱炎中HLA-B27表達及其與RF、外周血Th17細胞比率的關系

韓交玲

強直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)是一種以脊柱僵硬并逐漸強直畸形為特征的慢性進行性自身免疫性疾病，以骶髂關節、脊柱關節、附著點炎癥反應為主要特征。免疫調節異常是該病特征之一，因此，對造血系統產生不良影響，臨床上可以用外周血細胞成分的變化檢測和診斷某些結締組織病[1-2]。輔助性T細胞17(T helper cell 17，Th17)是一種新發現的能夠分泌白介素17(interleukin 17，IL-17)的T細胞亞群，在自身免疫性疾病和機體防御反應中具有重要的意義，Th17細胞不恰當的激活與多種自身免疫性疾病密切相關。但有關Th17細胞及相關效應因子在強直性脊柱炎患者體內表達及其與疾病活動關系的報道較少見[3-4]。本文對活動期和穩定期強直性脊柱炎患者的外周血Th17細胞進行檢測，并與健康對照者進行比較，探討強直性脊柱炎中人體白細胞抗原(HLA-B27)表達及其與類風濕因子(RF)、外周血Th17細胞比率的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2016年5月至2018年6月確診為強直性脊柱炎的患者131例，其中活動期患者60例(活動組)，男43例，女17例，年齡20～65歲，平均年齡(36.6±5.9)歲；穩定期患者71例(穩定組)，男50例，女21例，年齡25～63歲，平均年齡(37.5±5.5)歲；另選擇同期接收健康體檢者80例(對照組)，男52例，女28例，年齡22～68歲，平均年齡(37.8±6.1)歲。三組一般資料差異無統計學意義，P＞0.05，具有可比性。均進行HLA-B27、RF、外周血Th17細胞檢測。

1.2 納入標準 下腰痛3個月以上；胸廓活動度明顯低于同性別或同年齡的人；單側骶髂關節炎3級以上；雙側骶髂關節炎2級以上。

1.3 排除標準 骶髂關節融合者；晚期強直性脊柱炎患者；惡性腫瘤患者；依從性差者；精神疾病者。

1.4 標本收集 采集所有人員靜脈血5 mL，離心處理，3 200 r/min，離心8 min，取上層血清，將血液標本送至檢驗室，檢測HLA-B27、RF、Th17水平。肝素鈉抗凝，對外周血單個核細胞(PBMC)進行分離，用于流式細胞術檢測。

1.5 儀器與試劑 HLA-B27：流式細胞儀(美國Becton Dickinson 公司)、HLA-B27檢測試驗盒(Becton Dickinson公司產品)。DNM-9602酶標分析儀，上海醫療儀器廠提供的S648型電熱恒溫水浴箱。采用ELISA方法檢測，于450 nm波長處測定吸光度，A值＜0.4為陰性。A值≥0.4為陽性。RF：采用ELISA法檢測，用0.05 M pH 9碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10 μg/mL。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1 mL，4 ℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，3 min/次。加樣、加酶標抗體、加底物流顯示、終止反應、判斷結果，嚴格按照說明說執行。外周血Th17：流式細胞儀(美國Becton Dickinson 公司)、HLA-B27檢測試驗盒(Becton Dickinson 公司產品)。酶聯免疫反應均采用雙抗體夾心法，操作嚴格按照說明書執行。

1.6 統計學處理 采用SPSS 22.0軟件進行分析，表達率用Kolmogorov-SmirnovTest正態分布檢驗，檢驗結果均為非正態數據，各組數據兩兩比較采用U檢驗，變量間相關性采用Pearson相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組人員流式細胞術HLA-B27表達結果(表1) 強直性脊柱炎患者HLA-B27表達率明顯高于對照組患者，且活動期患者明顯高于穩定期患者，差異有統計學意義，P＜0.05。

表1 三組人員流式細胞術HLA-B27表達率結果 單位：%

2.2 三組人員HLA-B27、RF、Th17陽性率比較(表2) 強直性脊柱炎患者的HLA-B27、RF、Th17細胞比率陽性率明顯高于對照組，且活動組患者HLA-B27、RF、Th17細胞比率陽性率明顯高于穩定組患者，差異有統計學意義，P＜0.05。

表2 三組人員HLA-B27、RF、Th17陽性率比較

2.3 HLA-B27表達與RF、Th17細胞比率的相關性分析(表3) HLA-B27表達與Th17細胞比率呈正相關，P＜0.01。

表3 HLA-B27表達與RF、Th17細胞比率的相關性分析

3 討論

HLA-B27 是人類白細胞抗原Ⅰ類分子，HLA-B27有兩條鏈，重鏈位于第6對染色體上HLA的基因編碼，輕鏈是第15號染色體上非HLA基因編碼。HLA-B27充當一種感染因子的受體部位，是免疫應答基因的標志物，決定對環境激發因素的易感性，在內質網中，HLA-B27重鏈有異常折疊傾向，可在細胞表面形成二聚體表達，參與疾病的發生和發展，可與外來抗原交叉反應，從而誘導產生對外來抗原的耐受性，增強中性白細胞活動性。HLA-B27作為強直性脊柱炎的重要實驗室檢測指標，對強直性脊柱炎的早期診斷具有重要意義，但是，淋巴細胞HLA-B27表達檢測結果對于強直性脊柱炎患者的臨床分期及病情進展程度的預測有無價值，是否可用于病情監測目前仍不得而知[5-6]。本研究結果提示，活動期患者，大多病情比較嚴重，且HLA-B27表達量與強直性脊柱炎疾病活動有關，可知HLA-B27水平與強直性脊柱炎活動性呈正相關(r＝0.719，P＜0.01)，因此，可以推斷HLA-B27表達量可作為強直性脊柱炎病情活動度評估的實驗室指標，客觀地反映病情嚴重程度。

Th17是一種新發現的能夠分泌IL-17的T細胞亞群，主要通過其分泌的細胞因子IL-17A、IL-17F、IL-6、IL-22等發揮作用，其中最主要的是IL-17A，即IL-17，在自身免疫性疾病和機體防御反應中具有重要的意義。Th17輔助細胞主要為對抗細胞外細菌及霉菌的免疫反應，最重要的執行細胞為嗜中性粒細胞(neutrophil)以及IgG/IgA/IgM的B細胞以及分泌IL-17的CD4T細胞等，其產生的IL-17能有效地介導中性粒細胞動員的興奮過程，從而有效地介導了組織的炎癥反應。研究證明[7-8]，一旦誘導產生了Th17細胞，并分泌IL-17，即可形成一個正反饋，通過誘生IL-6，導致Thl7細胞進一步產生。因此，Th17細胞主要是通過分泌促炎細胞因子IL-17，確保中性粒細胞分化、成熟和活化，刺激單核細胞和成纖維細胞活化來參與強直性脊柱炎的炎癥反應。本研究結果提示，Th17細胞與強直性脊柱炎活動性呈正相關(r＝0.366，P＜0.01)，這提示Th17細胞主要介導強直性脊柱炎的炎癥反應，并參與疾病的進展。

RF是變性的IgG刺激機體產生的一種自身抗體，是類風濕性關節炎診斷的指標，RF在類風濕性關節炎患者中的檢出率很高[9-10]。本文研究的結果表明，強直性脊柱炎患者中RF的陽性率較低，說明了強直性脊柱炎患者很少伴有風濕熱和類風濕性關節炎的存在，因此HLA-B27的檢測有助于強直性脊柱炎與風濕熱和類風濕性關節炎的鑒別診斷。綜上所述，HLA-B27與Th17同時檢測，更有助于強直性脊柱炎活動期的診斷。