血清腫瘤標志物聯合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的診斷價值及臨床意義

張翠紅,夏云亞,胡 佩,仇家高

(高郵市人民醫院：1.檢驗科；2.病理科,江蘇高郵 225600)

在全球范圍內，肺癌在不同地區、不同人種中都是主要癌癥發病和癌癥死因之一。隨著經濟發展、空氣質量改變等原因，肺癌多年占據我國惡性腫瘤死亡首位，病死率高、預后差、且發病年齡有年輕化趨勢[1]。早發現早治療依舊是改善其預后的最有效手段。

當前用于癌癥篩查的腫瘤標志物包括癌胚抗原(CEA)、神經特異度烯醇化酶(NSE)、細胞角質素片段抗原21-1(CYFRA21-1)等[2]。但上述抗原在很多良性病變，如胸腹水、直腸息肉等的檢測中也會出現陽性結果[3]，對肺癌的檢測靈敏度和特異度相對較差。Ki-67是一種細胞核抗原，基因定位于10號染色體上，其功能與有絲分裂密切相關，多表達于增殖旺盛的細胞中，可做為細胞增殖旺盛的標志物[4]。已有研究者發現，Ki-67與一些腫瘤的惡性程度呈正相關，如肺癌、惡性淋巴瘤、乳腺癌等[5]。HSP90α是一種細胞質蛋白質，具有分子伴侶功能，能夠維持癌基因蛋白的穩定性[6]。因此探索不同腫瘤標志物的組合方式用于提高肺癌的診斷效能。本研究旨在探討目前臨床上已有的血清腫瘤標志物CEA、NSE、CYFRA21-1聯合Ki-67和HSP90α針對肺癌進行篩查診斷的特異度和靈敏度，以求探索出高靈敏度和高特異度的肺癌篩查手段，達到早發現早治療的目的，指導臨床應用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年8月至2017年7月本院收治的肺癌患者(均為初治肺癌患者)58例(肺癌組)，其中男性患者30例、女性患者28例，年齡31～84歲，平均(52.3±17.9)歲，患者經細胞學和病理檢查為腺癌18例、鱗癌26例、小細胞癌14例。納入及排除標準：(1)所有患者均無接受化療及其他治療史；(2)無心、肝、腎等重要器官的感染、貧血、病變和內分泌及相關的代謝疾??；(3)無其他器官的腫瘤病史和家族史。此外，選取同期本院收治的50例肺部良性腫瘤患者作為對照組，其中男26例、女24例，年齡30～84歲，平均(55.1±16.4)歲，兩組患者的一般資料對比差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經本院倫理會審核通過，受試者知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血清腫瘤標志物測定 在清晨空腹時采集兩組患者的靜脈血約3 mL，室溫靜置30 min后，5 000 r/mim，4℃離心10 min以徹底分離血清組分，離心后吸取血清組分，置于-20 ℃冰箱保存待測。采用Roche Elecsys2010電化學發光免疫分析儀(羅氏，美國)對三種血清腫瘤標志物：CEA、NSE、CYFRA21-1的水平進行測定。將CEA>15 μg/L，NSE>16.3 μg/L，CYFRA21-1>3.3 μg/L時判定為陽性。

1.2.2Ki-67水平的測定 手術后獲取肺癌組患者的癌及癌旁組織，并制成石蠟標本，采用免疫組化法測定Ki-67水平，采用免疫組化試劑盒(Cell Signaling Technology，美國)進行測定，操作步驟按嚴格試劑盒中提供的說明書進行。選擇兩位具有豐富經驗的病理科醫生進行閱片，每個切片選取5個高倍視野，對每個視野進行計數的細胞個數為100個，Ki-67為陽性信號為棕色顆粒，位于細胞核。將Ki-67在細胞中的表達率(即陽性細胞占總細胞的比例)分為四個等級：<5%(-)，5%～25%(+)，>25%～50%(++)，>50%(+++)，同時將Ki-67表達率>5%時判定為陽性。

1.2.3HSP90α水平測定 HSP90α測定采用酶聯免疫法(ELISA)試劑盒(普羅吉生物科技有限公司)進行，操作步驟嚴格按試劑盒中提供的說明書進行。具體操步驟為在清晨空腹時采用EDATA-K2抗凝管收集兩組患者靜脈血約2 mL，5 000 r/min，4 ℃離心10 min后搜集血漿組分，置于-20 ℃冰箱保存待測。采用ELISA法測定血漿中的HSP90α水平。當HSP90α>82.060 ng/mL時，判定為陽性，HSP90α<82.060 ng/mL時，判定為陰性。

2 結 果

2.1兩組患者血清腫瘤標志物和HSP90α表達水平對比 肺癌組患者的三種血清腫瘤標志物：CEA、NSE和CYFRA21-1的水平均高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。肺癌組患者HSP90α表達水平及陽性率均高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)見表1～2。

表1 兩組患者血清腫瘤標志物和HSP90α表達水平對比

表2 兩組患者HSP90α表達水平及陽性率對比

2.2不同類型肺癌患者腫瘤標志物的陽性率對比 腺癌患者的CEA陽性率顯著高于鱗癌患者和小細胞癌患者，差異均有統計學意義(P<0.05)。小細胞癌患者的NSE陽性率顯著高于腺癌患者和鱗癌患者，差異均有統計學意義(P<0.05)。鱗癌患者的CYFRA21-1顯著高于腺癌患者和小細胞癌患者，差異均有統計學意義(P<0.05)，詳見表3。

表3 不同類型肺癌患者腫瘤標志物的陽性率對比[n(%)]

2.3肺癌患者癌及癌旁組織Ki-67表達水平對比 通過對術后35例肺癌組患者癌及癌旁組織Ki-67表達水平對比的結果顯示：Ki-67在癌組織中表達的陽性率為85.7%(30例)，而癌旁組織中Ki-67的陽性率則為0%(0例)，見表4。

表4 肺癌患者癌及癌旁組織Ki-67表達水平對比(n)

2.4血清腫瘤標志物聯合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的特異度和靈敏度對比 Ki-67單一檢測肺癌的靈敏度最高(85.7%)，HSP90α單一檢測肺癌的特異度最高(90.0%)，血清腫瘤標志物CEA、NSE和CYFRA21-1聯合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的靈敏度達到100%。見表5。

表5 血清腫瘤標志物聯合Ki-67、HSP90α檢測肺癌的特異度和靈敏度對比

注：-表示無此項

3 討 論

血清中的CEA、NSE、CYFRA21-1是目前臨床上用于肺癌檢測的常用指標。CEA最早發現于胎兒和結腸癌相關組織中，是最廣譜的腫瘤標志物，常見于胃癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤[7-8]。CEA用于肺腺癌的檢測能顯著提高肺腺癌的檢出水平，本研究中腺癌患者的CEA陽性率顯著高于鱗癌患者和小細胞癌患者(P<0.05)。NSE是小細胞肺癌最靈敏和特異的腫瘤標志物，本研究中小細胞癌患者NSE陽性率顯著高于腺癌和鱗癌患者(P<0.05)；但是NSE非常不穩定，在檢測過程中發生溶血會導致結果升高，從而導致誤判[8-10]。CYFRA21-1是檢測肺癌的經典指標，本研究結果顯示其對鱗癌最為敏感(陽性率61.5%)，對腺癌、小細胞癌的靈敏度依次降低，與已有的文獻報道一致[11-13]。綜上可知：僅靠血清腫瘤標志物來對肺癌進行診斷的檢測靈敏度和特異度相對較差，無法很好地描述腫瘤的特性，易造成臨床誤判，因此需聯合其他的標志物進行多維診斷，才能提高診斷的準確率。

Ki-67是一種細胞核抗原，由于其功能與有絲分裂密切相關，可作為細胞增殖旺盛的標志物，已有研究者發現其與一些腫瘤的惡性程度呈正相關[14]。比較Ki-67在癌組織和癌旁組織中的陽性率，認為Ki-67對腫瘤檢測的特異度較高，避免了其他抗原可能產生的良性病變導致檢測結果陽性的誤判。HSP90α是一種細胞質蛋白質，具有分子伴侶功能，能夠維持癌基因蛋白的穩定性，在正常情況下僅在細胞內表達，但當細胞發生惡變或在應激狀態下時，其表達增多并在胞外分泌表達[15]。2013年，羅永章團隊通過肺癌臨床試驗證明血漿HSP90α是一種全新的腫瘤標志物。目前已經有商業化的HSP90α檢測試劑盒被批準上市，在臨床應用于癌癥抗原篩查。有研究對手術和內科治療的肺癌患者血漿中Hsp90α含量進行動態監測，發現其水平變化與患者病情變化具有相關性[16]。本研究中肺癌組患者HSP90α表達水平及陽性率均顯著高于對照組(P<0.05)，進一步支持了上述論據。

本研究結果顯示：Ki-67單一檢測肺癌的靈敏度最高(87.9%)，HSP90α單一檢測肺癌的特異度最高(90.0%)。臨床上，常對多種抗原進行篩查以保證篩查結果的可靠性。本研究將3種對肺癌具有一定相關性的血清抗原分別與Ki-67、HSP90α的篩查結果進行交叉評價。結果顯示血清腫瘤標志物CEA、NSE和CYFRA21-1同時聯合三種血清抗原、Ki-67和HSP90α進行篩查時，靈敏度可達到100%，提示在篩查過程中將很少出現漏診現象，同時可保證特異度>75%。臨床上，對于癌癥的篩查多依賴于對多種抗原的聯合檢測結果。鑒于對于癌癥應采取早發現早治療的指導方針，在臨床篩查中，應將檢測靈敏度作為考慮的首要因素。

4 結 論

血清腫瘤標志物CEA、NSE和CYFRA21-1聯合Ki-67和HSP90α進行肺癌的篩查具有較高的靈敏度，對臨床篩查具有指導意義。