某部隊女性HPV感染情況及流行病學分析*

歐紅玲，馬盈盈，李曉寧，白 靜，張巧云，王 巖，王欣茹

(火箭軍特色醫學中心醫學檢驗科，北京 100088)

人乳頭瘤病毒(HPV)是感染人表皮和黏膜鱗狀上皮細胞的常見DNA病毒。在已發現的HPV 200多種不同亞型中，超過40種可以感染人類的生殖器官，約30種與腫瘤有關[1]。HPV 可以通過多種途徑感染生殖道而導致尖銳濕疣及宮頸病變，甚至引起宮頸癌的發生[2]。本研究應用熒光PCR方法對2012年1月至2018年4月期間660例某部隊患者的生殖道脫落細胞進行基因分型，旨在探討 HPV基因分型檢測在部隊女性宮頸癌防治方面的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 標本來源于2012年1月至2018年4月期間來本院篩查的某部隊660例女性患者的宮頸脫落細胞。年齡19～65歲，平均37.2歲。

1.2儀器與試劑 上海之江SLAN 96P PCR擴增儀(上海之江生物科技股份有限公司)，高危型HPV分型核酸測定試劑盒(上海之江生物科技股份有限公司)，低危型HPV分型核酸測定試劑盒(上海之江生物科技股份有限公司)。

1.3方法

1.3.1標本采集 使用專用配套的HPV 采樣管。采樣前拭去宮頸口過多的分泌物，再用宮頸刷于子宮頸外口處，輕壓并依順時針方向旋轉3～4周。采樣宮頸刷浸入盛有1 mL無菌生理鹽水的專用HPV樣本管中，充分漂洗貼壁擠干后丟棄，立即送檢。未即時檢測樣本置于2～8 ℃醫用冰箱保存，所有樣本均于當天或次日檢測完畢。

1.3.2標本處理 從專用HPV 采樣管中吸取混勻后液體1～1.5 mL離心管中(如分泌物較多，只取0.2 mL)13 000 r/min離心5 min。小心吸棄上清，沉淀加無菌生理鹽水1 mL混勻，13 000 r/min離心5 min，再次小心吸棄上清。沉淀直接加100 μL核酸提取液充分混勻，沸水浴10 min，然后13 000 r/mim離心5 min，取上清作為PCR反應模板。吸棄的上清液、核酸提取后的剩余上清液及相關廢棄物均按醫療廢棄物處理。每次檢測均設置陰陽對照：取陰陽對照品各100 μL置于1.5 mL離心管中(凍存試劑融解后震蕩混勻10 s)，分別加入核酸提取液50 μL充分混勻，沸水浴10 min，然后13 000 r/min離心5 min，取上清作為PCR反應模板。

1.3.3PCR擴增 取4種HPV核酸熒光PCR檢測混合液n×36 μL分別與4份n×0.4 μL Taq酶，振蕩混勻數秒，3 000 r/min離心數秒。加入已提取好的待測樣本DNA 4 μL配置PCR反應體系，然后，低速離心數秒后，按下述參數進行PCR反應：94 ℃×2 min；再按93 ℃×10 s →62 ℃×31 s，循環40次；單點熒光檢測在62 ℃。反應體系為40 μL。儀器自動讀取實驗結果。4種HPV核酸熒光PCR檢測混合液分別用于檢測16、56、31和內部參照；18、52、58、68；45、82、33、35；39、51、59、66基因型。當陽性對照品擴增曲線為典型的S型，且FAM和VIC通道ct值 35，陰性對照為陰性時，判斷結果有效。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0軟件對實驗數據進行統計學分析，各年齡段的陽性率統計分析用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV總體感染和各亞型分布情況 對570例女性患者的宮頸脫落細胞進行 13種高危型HPV基因分型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型。570例女性患者中，后期入組的294例女性患者的宮頸脫落細胞增加了 2種高危型HPV基因分型，包括66和82型。對90例女性患者的宮頸脫落細胞進行2種低危型HPV(6+11)檢測。HPV陽性者共203例，其中156例為高危型感染，47例為低危型感染。HPV高危亞型感染率前五位依次是：HPV 58(4.9%)、HPV 39(4.04%)、HPV 16(3.68%)、HPV 52(3.5%)、HPV 66(2.72%)，低危型HPV(6+11)陽性率52.2%。見表1。

2.2HPV混合感染情況 156例高危HPV感染者中，以單一感染為主，其次為雙重感染，三重感染次之。單一高危HPV感染111例，占總感染者71.15%，雙重HPV感染29例，占總感染者18.59%，三重及以上感染(同時存在3種或以上HPV亞型感染)共16例，占10.26%，見表2。

表1 檢測標本HPV 17種基因亞型分布情況

表2 570例標本中HPV混合感染情況[%(n/n)]

2.3各年齡段高危HPV感染情況 3個年齡段高危HPV感染檢測數、例數百分比、陽性率、檢出率和占陽性數百分比最高的年齡段均是>30～50歲，其次是≤30歲年齡段。對3個年齡段的陽性率進行χ2檢驗，表明感染者的年齡差異有統計學意義(χ2=9.96，P<0.05)。見表3。

表3 不同年齡段HPV感染情況

3 討 論

在全球婦科腫瘤中，宮頸癌的發病率位居第二，僅次于乳腺癌，嚴重威脅女性健康。據統計全球每年約有46.6萬宮頸癌新發病例，中國約占世界新發病例總數的1/5[3]。近年來，大量研究表明HPV感染是引起宮頸癌變的主要因素之一，宮頸癌患者約有99.7%能檢測出HPV DNA[4]。HPV屬于乳頭瘤病毒科，目前已發現200多種基因亞型[5]。根據HPV亞型致病力大小或致癌危險性大小不同，HPV可分為高危型和低危型。低危型致病力相對較弱，不整合于細胞基因組中，主要導致皮膚疣類感染、生殖道及肛門周圍皮膚等濕疣樣良性疾病(如尖銳濕疣和性傳播疾病)，而高危型致病力強，整合于細胞基因組中，主要導致宮頸癌和非典型增生。有學者認為HPV病毒載量與宮頸癌及宮頸癌前病變呈正相關[6]，HPV DNA病毒載量越高，整合到宿主細胞的機會越多，患者宮頸病變越嚴重[7]。特別在免疫機能較弱的女性，因無法消滅進入體內的HPV，導致高危HPV持續感染，從而增加了罹患宮頸癌的風險，因此將HPV檢測列入宮頸癌篩查方案，用于指導宮頸癌的預防[8]。

本研究中，某部隊女性人群高危 HPV 感染率為23.64%，在156例高危HPV感染者中，HPV單一型別的感染率為71.15%，雙重感染率次之，為18.59%，多重感染率(>3)最低，為3.85%。與李欣榮等[9]報道的湖南HPV陽性率為26.57%，單一感染占72.52%，雙重感染率為19.74%的結果相似。另外，從本研究基因亞型分布情況可見，HPV高危亞型感染以58(4.9%)、39(4.04%)、16(3.68%)、52(3.5%)、66(2.72%)最為常見，而16和18亞型在單一感染中出現頗多，在混合感染中也較常出現，可見16和18亞型與宮頸病變之間有密切聯系。低危型(6+11)感染在臨床有癥狀病人中檢出率很高，達到了52.2%，表明其對尖銳濕疣等疾病的發生發展發揮了重要的作用。再者，本研究中HPV感染前七位亞型分別是58、39、16、52、66、18和31，與DE SANJOSé等[10]報道的東南亞地區不一致，與趙芹等[11]報道的東莞地區常見亞型不一致，也與龍馨等[12]報道的重慶地區亞型分布有差異。結果表明，在HPV基因亞型分布上，存在明顯的地區差異。本研究中，進行HPV檢測數最多的年齡段是>30～50歲，這個年齡段的檢出率較高，可能與HPV傳播途徑有關，凡有性生活的女性，都有可能通過性接觸將HPV帶入生殖道內，因此加強此年齡段女性篩查的力度及宣傳教育，對宮頸癌的早預防具有積極作用。另外，≤30歲年齡段的檢出率也不低，為19.15%，說明高危HPV感染具有年輕化的趨勢，這可能與年齡相對小的女性對HPV抵抗力弱或過早性交有關，因此應加大部隊中青年女性HPV的普查力度。

4 結 論

綜上所述，持續的高危型HPV感染是宮頸癌發生的危險因素。利用實時熒光PCR技術對HPV進行基因分型檢測，靈敏度高，重復性好，操作簡單，適合大批量樣本檢測。通過HPV篩查，可進一步了解HPV感染及各亞型的分布情況，有助于指導部隊進行女性宮頸癌的預防篩查及宮頸癌的早期診斷、早期治療，從而降低宮頸癌的發生率和病死率。