miRNA-329和Tiam1在胃癌中的表達及其臨床意義*

田 衍，舒 若，曾玉劍，王昆華，羅華友

(昆明醫科大學第一附屬醫院胃腸與疝外科，昆明 650032)

胃癌是最常見的癌癥之一，主要發生在亞洲國家，包括韓國、日本和中國[1]。胃癌的發生受到多種因素的影響，包括高鹽食物、硝化食品和酒精攝入過量，水果和蔬菜攝入過少，吸煙和幽門螺旋桿菌感染等[2]。與其他惡性腫瘤一樣，遺傳和表觀遺傳因素均參與了胃癌的發病機制[3]。如果在發病早期診斷出胃癌，其病死率會大大降低[4]，因此尋找發病早期的特異性腫瘤標記物來篩選高風險人群具有重要作用。但是，由于腫瘤標記物的低敏感度和特異度，檢測胃癌的標記物較為有限[5]。因此，發現診斷胃癌的新的標記物是學界目前亟待解決的重大問題。

表1 RT-qPCR檢測基因的引物序列

miRNA是一類片段大小為21～25 bp的非編碼RNA，它們能夠通過抑制mRNA的翻譯或者綁定mRNA的3′-UTR區減少mRNA分子，從而沉默它們同源的靶基因,在不同的細胞過程中發揮重要作用，維持正常的生理環境[6-8]。在癌癥中，特別的miRNA能夠作為抑癌因子或致癌因子，因此被認為是癌癥早期診斷和判斷預后的生物標記物[9]，能夠控制腫瘤的多種功能，包括細胞增殖、轉移、入侵、分化、凋亡和代謝過程等[10]。研究發現，miRNA-329(miR-329)在胃癌中低表達，而其靶基因T淋巴瘤浸潤轉移誘導因子1(Tiam1)在胃癌中高表達[11-12]。但目前綜合分析miR-329和Tiam1在胃癌中的表達及其臨床意義的文獻較少，本研究通過檢測胃癌組織和癌旁組織中miR-329、Tiam1 mRNA表達，分析兩者相關性，并且觀察它們與胃癌病理特征的關系，以探討胃癌的發病機制和潛在的藥物治療靶點。

1 資料與方法

1.1一般資料 在取得患者知情同意后，收集本院2015年6月至2017年3月手術切除的胃癌組織標本及正常的癌旁組織(距離癌組織大于3 cm)，手術切除的新鮮標本置于-80 ℃冰箱保存。標本共計36例，其中男23例，女13例；年齡40～79歲，平均(67.89±8.19)歲。參考2010年國際抗癌聯盟/美國癌癥聯合委員會(UJCC/AICC)的TNM分期標準對胃癌組織進行臨床分期[13]。

1.2方法

1.2.1檢測方法 按照Trizol試劑說明書取約50 mg組織提取總RNA，RNase-Free H2O溶解RNA，微量分光光度計檢測RNA濃度及純度，然后反轉錄合成cDNA，-80 ℃保存備用。采用Taqman RT-PCR kit進行PCR擴增，檢測miR-329以U6為內參基因，檢測Tiam1 mRNA表達水平以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內參基因，引物序列見表1。反應在ABIQ6型實時熒光定量PCR儀上進行，測定每個樣品的Ct值，相對含量為2-△△Ct。

1.2.2觀察指標 記錄并統計所有患者標本的臨床分期及是否出現淋巴結轉移情況。

2 結 果

2.1miR-329與Tiam1 mRNA在胃癌組織和癌旁組織中的相對表達量分析 胃癌組織的miR-329水平比癌旁組織低，差異有統計學意義(P<0.05)；胃癌組織Tiam1 mRNA水平比癌旁組織高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 miR-329、Tiam1 mRNA在胃癌組織和癌旁組織中的水平比較

2.2miR-329與Tiam1 mRNA的相關性分析 將miR-329與Tiam1 mRNA在胃癌組織與癌旁組織中的相對表達量進行相關分析，結果顯示二者表達呈明顯負相關(r=-0.854，P<0.01)，見圖1。

圖1 miR-329與Tiam1 mRNA表達的相關性

2.3miR-329、Tiam1表達與胃癌主要臨床病理特征的關系 在不同臨床分期中，miR-329和Tiam1 mRNA水平表現出不同的趨勢。隨著臨床分期的進展，miR-329水平下降，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織中miR-329水平明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌組織(P<0.05)。隨著臨床分期的進展，Tiam1 mRNA表達上升，其中Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織中Tiam1 mRNA水平明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期胃癌組織(P<0.05)。miR-329在有淋巴結轉移的胃癌組織中的表達明顯低于無淋巴結轉移者(P<0.05)，而有淋巴結轉移的胃癌組織中Tiam1 mRNA的水平明顯高于無淋巴結轉移者(P<0.05)，見表3。

表3 miR-329、Tiam1 mRNA水平與胃癌臨床病理特征的關系

3 討 論

胃癌是一種惡性上皮腫瘤疾病，具有高發病率和病死率[14-16]。研究表明，miRNA在多種癌癥中異常表達，并且參與癌癥的發生和發展[17-19]。miR-329在許多癌癥中低表達，如神經母細胞瘤、多形性膠質細胞瘤和胰腺癌等[20-22]。miR-329通過綁定KDM1A能夠抑制神經母細胞瘤細胞的生長和運動[20]。而在胃癌中，通過下調Tiam1、miR-329能夠抑制細胞的入侵和生長[11]。

本研究發現，胃癌組織中miR-329表達下降，同時Tiam1過表達，兩者呈明顯負相關。結合相關文獻報道及生物信息學分析，猜測腸道正常組織miR-329對Tiam1的表達負向調控。在各種致瘤因子的刺激下，miR-329對Tiam1的負向調控相對較弱，從而使Tiam1的表達在病理狀態下增加，影響腫瘤的微環境，從而進一步誘導和促進腫瘤細胞的轉移。本研究發現，與癌旁正常組織相比，Tiam1在胃癌組織中的表達升高，且TNM分期為Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織中miR-329的表達水平明顯高于Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織(P<0.05)，而Ⅰ、Ⅱ期胃癌組織中Tiam1 mRNA的表達水平明顯低于Ⅲ、Ⅳ期胃癌(P<0.05)，因此推測miR-329和Tiam1 mRNA可能成為胃癌臨床分期的指標。另外，miR-329在有淋巴結轉移的胃癌組織中的表達明顯低于無淋巴結轉移者，Tiam1 mRNA表達則與其相反。曹蘇娟等[23]研究發現，與正常胃黏膜組織相比，Tiam1在胃癌組織中高表達，且隨著TNM分期的升高和淋巴結轉移的發生，Tiam1蛋白染色陽性率逐漸升高。LIU等[24]研究發現Tiam1在轉移性結腸癌細胞系(LoVo和SW620)中的表達明顯高于原發性結腸癌細胞系(LS174T、SW480、HCT116、LST、HRT和Hee8693)的表達，這說明Tiam1基因與癌癥轉移性相關。上述結果均證明，Tiam1的表達與癌癥的侵襲、轉移密切相關。而本文結果提示，胃癌中miR-329表達下降，Tiam1表達上調可能是胃癌的發病機制之一，miR-329和Tiam1可能是胃癌潛在的診斷標志物。