磷酸哌喹分散片的處方前研究

唐嘉曦，許小紅

成都醫(yī)學院 藥學院(成都 610500)

磷酸哌喹(piperaquine phosphate，PQP)為 4-氨基喹啉類抗瘧藥，通常與雙氫青蒿素合用，具有協(xié)同增效作用，可延緩瘧原蟲耐藥性的產(chǎn)生[1]。目前臨床常用劑型為復方片劑(規(guī)格為320 mg)，由于PQP臨床劑量較大，不利于小孩或吞咽困難者服用，本研究擬研究開發(fā)為分散片，以提高患者服藥的順應性。PQP原料藥基本理化性質(zhì)研究文獻報道較少[2-4]，本研究測定了PQP的平衡溶解度、油水分配系數(shù)、吸濕性、穩(wěn)定性等參數(shù)，旨在為處方設計及研究提供依據(jù)[5]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀；分析天平(梅特勒-托利多)；優(yōu)普系列超純水器(UPH-II-10T，四川優(yōu)普超純科技有限公司)；超聲波清洗機[致微(廈門)儀器有限公司，功率：900 W，頻率：(40±2) kHz]；藥品穩(wěn)定性試驗箱(上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)；YG120藥物光照試驗箱(上海實驗儀器廠有限公司)；數(shù)顯氣浴恒溫振蕩器(常州普天儀器制造有限公司)。

1.2 試藥

PQP原料藥(江蘇斯威森生物醫(yī)藥工程研究中心有限公司，批號：150806)；PQP對照品(江蘇斯威森生物醫(yī)藥工程研究中心有限公司，批號：161203)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 PQP HPLC測定方法的建立

2.1.1 色譜條件[6]Nu-Analutical(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.1 %三氯乙酸(磷酸調(diào)pH=2，25:75)；流速：1 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長為349 nm；進樣量：10 μL(圖1)。

圖1系統(tǒng)適用性色譜圖
注：A： PQP對照品溶液色譜圖；B：PQP原料藥色譜圖

2.1.2 線性關系考察 精密稱取PQP對照品，加流動相配制1 mg/mL的PQP對照品儲備液。精密量取儲備液適量，加流動相稀釋得2、5、15、20、25、30、40、60、100 μg /mL的一系列對照品溶液。按照“2.1.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為Y=18.394X-4.6748(R2=0.999 9)。結果表明，PQP的質(zhì)量濃度在0.002～0.1 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

2.1.3 檢測限與定量限 取線性研究中所用的PQP對照品的低濃度(2 μg /mL)，進行逐級稀釋，分別按照“2.1.1”項下色譜條件進樣，按信噪比法，在PQPS/N ≥10，確定PQP的定量限，在PQPS/N≥3,確定PQP的檢測限，結果檢測限為檢測限為0.4 ng，定量限為1 ng。

2.1.4 進樣精密度 取25 μg /mL PQP對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，照“2.1.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，考察主峰峰面積變化，結果峰面積RSD為0.36%，進樣精密度良好。

2.1.5 重復性試驗 取同一批PQP原料藥共6 份，用加流動相適量超聲溶解，冷卻后定容至刻度，制成25 μg /mL的PQP供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，結果PQP含量RSD為0.56 %，表明該方法重復性良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取25 μg/mL的供試品溶液，照色譜條件，分別于0、2 、4 、6 、8 、12 、24 h精密量取10 μL注入液相色譜儀，照“2.1.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，結果峰面積RSD為0.30 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 破壞性試驗 精密稱取PQP25 mg置于50 mL量瓶中，加1 mol/L HCl溶液2 mL，在50 ℃水浴中加熱2.5 h，放冷，用1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋并定容至刻度，作為酸破壞溶液；精密稱取PQP25 mg置于50 mL量瓶中，加1 mol/L NaOH溶液2 mL，在50 ℃水浴中加熱2.5 h，放冷，用1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至中性，用流動相稀釋并定容至刻度，作為堿破壞溶液；精密稱取PQP 25 mg置于50 mL量瓶中，加30 %過氧化氫溶液2 mL，在50 ℃水浴中加熱2.5 h，放冷，用流動相稀釋并定容至刻度，作為氧化破壞溶液；將上訴3個破壞性溶液照“2.1.1”項下色譜條件進樣，結果表明該方法能有效檢出各破壞試驗產(chǎn)生的雜質(zhì)，且各雜質(zhì)峰均能與主峰達到基線分離，專屬性較好(圖2)。

圖2 破壞性試驗色譜圖注：A：酸破壞色譜圖； B：堿破壞色譜圖；C：氧化破壞色譜圖

2.2 PQP在不同pH緩沖溶液中的平衡溶解度測定[7]

取過量PQP原料于帶塞塑料管中，分別加入10 mL配制的pH分別為1.0、1.2、1.5、2.0、3.8、4.5、5.8、6.8、7.4、8.0的系列緩沖液中，搖床振蕩8 h至藥物不再溶解。將飽和溶液于12 000 rpm/min離心5 min，離心半徑8.5 cm,取上清液，樣品濃度超過線性范圍時用流動相稀釋一定倍數(shù)，照色譜條件進樣，記錄峰面積，并將結果代入標準曲線方程計算濃度。在37 ℃下， PQP的平衡溶解度隨著緩沖液pH的增大而減小(圖3)。

圖3 PQP不同pH溶液中的溶解度

2.3 PQP油水分配系數(shù)的測定[8]

精密稱取PQP原料藥4 mg，用純水飽和的正辛醇溶解并定容至50 mL，得88 μg/mL PQP的正辛醇溶液母液；取母液適量，用正辛醇定容至25 mL，得10、33、55 μg/mL的正辛醇PQP溶液。準確量取已配制的pH分別為1.0、1.2、1.5、2.0、3.8、4.5、5.8、6.8、7.4和8.0的系列緩沖液各2 mL至5 mL至離心管中，再配制高、中、低濃度PQP水飽和正辛醇溶液2 mL，強力渦旋5 min，然后12 000 r/min離心5 min，離心半徑8.5 cm,分別取正辛醇層、水層 ，照“2.1.1”項下色譜條件進樣，計算油相濃度(Co)和水相濃度(Cw)。結果采用公式P=CO/CW計算PQP表觀油水分配系數(shù)P，并計算其對數(shù)值log P， 高、中、低濃度下PQP的log P值在pH(1.0～4.5)中的油水分配系數(shù)<0，親水性較好；在pH(5.8～8.0)中的油水分配系數(shù)>0，親油性較好(表1)。

表1 PQP在不同pH條件下Log P

2.4 PQP吸濕性測定[9]

將底部盛有氯化銨過飽和溶液的玻璃干燥器放入 25 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫 24 h ，此時干燥器內(nèi)的相對濕度為(80±2)%， 將恒重后的PQP樣品粉末放入已恒重的稱量瓶中，厚度約 2 mm， 精密稱定后置于上述玻璃干燥器內(nèi)，稱量瓶蓋打開于 25 ℃保存，分別于0、2、4、6、12、24、48、72 h 精密稱重，計算吸濕百分率，并以時間為橫坐標，吸濕百分率為縱坐標進行作圖，結果表明PQP樣品在24 h 后吸濕百分率約 0.69 % ，48 h后吸濕達到飽和，說明PQP略有引濕性(表2)。

表2 PQP原料藥吸濕試驗結果

2.5 PQP影響因素實驗

2.5.1 高溫試驗 根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 版[6]，9001 原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則要求，供試品開口置適宜潔凈容器中(培養(yǎng)皿中攤成≤5 mm 厚薄層)，60 ℃溫度下放置 10 d，于第0、5、 10 天取樣，考察其外觀、含量及有關物質(zhì)的變化。

2.5.2 高濕試驗 根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 版第 4 部，9001 原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則要求，供試品開口置適宜潔凈容器中(培養(yǎng)皿攤成≤5 mm 厚薄層)，在 25 ℃于相對濕度(90±5)%條件下放置10 d，于第0、5、10 天取樣，考察其外觀、含量及有關物質(zhì)的變化。

2.5.3 強光照射試驗 根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 版[6]，9001 原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則要求，供試品開口置適宜潔凈容器中(培養(yǎng)皿中攤成≤5 mm 厚薄層)，于照度(4 500±500)Lx 條件下放置10 d，于第0、5、10 天取樣，考察其外觀、含量及有關物質(zhì)的變化。影響因素試驗結果顯示，相對于0 d的樣品，高溫高濕光照條件下單個雜質(zhì)和總雜都沒有明顯增長(表3)。

表3 PQP影響因素試驗結果

3 討論

藥物的溶解度直接影響藥物的吸收與藥物在體內(nèi)的生物利用度，是制備藥物制劑首先應掌握的信息[10]。本研究旨在開發(fā)PQP分散片，在pH 1.0時PQP溶解度最大，說明PQP在胃中溶解度最大，制成分散片后能在胃中迅速溶出。油水分配系數(shù)可預測藥物的親水親脂性[11]，PQP隨著pH值的增大 LogP也增大，說明藥物在胃中快速溶出之后隨著消化道pH值的增大，能夠較容易地透過細胞膜而吸收入血。

影響因素試驗結果表明，PQP在光照條件下相對不穩(wěn)定,濕度和溫度對其影響不大，因此在今后的處方設計及制備工藝中，應適當避免光照，后期考慮進一步研究光照對PQP降解速率的影響，為實驗操作過程避光程度提供更充分的實驗數(shù)據(jù)。