MEK抑制劑PD0325901顯著提高豬胎兒成纖維細胞ssODN介導的HDR效率

歐浩，李國玲，王豪強，黃廣燕，蔡更元,2，李紫聰，吳珍芳,2，張獻偉,2

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MEK抑制劑PD0325901顯著提高豬胎兒成纖維細胞ssODN介導的HDR效率

歐浩1，李國玲1，王豪強1，黃廣燕1，蔡更元1,2，李紫聰1，吳珍芳1,2，張獻偉1,2

1. 華南農業(yè)大學動物科學學院，國家生豬種業(yè)工程技術研究中心，廣州 510642 2. 溫氏食品集團股份有限公司，新興 527400

基因組DNA發(fā)生雙鏈斷裂(double strand break, DSB)后主要通過同源定向修復(homologous-directed repair, HDR)和非同源末端連接(nonhomologous end joining, NHEJ)兩種途徑進行修復，其中單鏈寡聚核苷酸(single-stranded oligodeoxyribonucleotide, ssODN)介導的同源定向修復是動物基因組常用的基因組定點修飾技術，具有較大的科研和應用價值。為提高豬基因組ssODN介導HDR效率，本研究以豬胎兒成纖維細胞(porcine fetal fibroblasts, PFFs)為研究對象，利用絲裂原活化的細胞外信號調節(jié)激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase, MEK)抑制劑PD0325901培養(yǎng)細胞，研究其對HDR效率的影響及作用分子機理。結果顯示，PD0325901能顯著提高PFFs的G2期和S期細胞群百分比，減少G1期細胞群比率，促進HDR修復因子的表達。在最適濃度250 nmol/L時，PD0325901使ssODN介導的GFP報告載體的修復效率提高了58.8%；同時使PFFs基因組位點和定點修飾效率分別提高了48.16%和17.64%。本研究表明，MEK抑制劑PD0325901能顯著提高豬基因組ssODN介導的同源定向修復效率，為高效制備定點基因修飾動物模型提供了新思路。

MEK抑制劑；同源定向修復(HDR)；PD0325901；基因編輯

傳統(tǒng)轉基因技術是將目的基因隨機整合到基因組中并使之表達，無法控制轉基因的整合位點，且伴隨著效率低、表達穩(wěn)定性差等問題，為轉基因動物品系和育種品系的建立帶來諸多不便。隨著鋅指核酸內切酶(zinc-finger endonuclease, ZFN)[1]、類轉錄激活因子效應物核酸酶……