一例豬鏈球菌病的診斷與藥敏試驗(yàn)

張悅

（河北省大廠回族自治縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 065300）

大廠縣某豬場(chǎng)同一批仔豬共30頭，40日齡時(shí)有24頭突然發(fā)病，體溫42℃左右，呼吸困難，拒絕進(jìn)食，眼結(jié)膜潮紅、流淚，有漿液性鼻液，腹部、四肢、耳尖部位有出血性斑塊，接觸有反射性疼痛，四肢共濟(jì)失調(diào)，關(guān)節(jié)、蹄冠腫脹，排水樣糞便。立即采用青霉素鉀注射治療3d，病情未得到控制，12頭仔豬在發(fā)病6d后死亡，通過(guò)對(duì)病死豬解剖可見典型敗血癥變化，胸腹部和四肢內(nèi)側(cè)有出血斑塊，內(nèi)臟器官均有輕重不一的出血，初步診斷為疑似鏈球菌病。為了確診和防止該病的大規(guī)模爆發(fā)，技術(shù)人員進(jìn)行了病原菌分離培養(yǎng)、鑒定，同時(shí)對(duì)分離出的病原菌進(jìn)行了藥敏實(shí)驗(yàn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

在無(wú)菌操作下采取病死豬的心血、肝、脾及淋巴結(jié)；豬鏈球菌診斷血清與平板凝集抗原；藥敏紙片；實(shí)驗(yàn)用家兔；培養(yǎng)基、化學(xué)試劑及微量發(fā)酵管等。

2 方法及結(jié)果

2.1 染色鏡檢

用采集的病料直接接觸片進(jìn)行革蘭氏染色后，在顯微鏡下可見短鏈革蘭氏卵圓形或者陽(yáng)性球形細(xì)菌，有形成的莢膜。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)

先將病料接種于血清肉湯進(jìn)行增菌培養(yǎng)，然后再接種在血液瓊脂平板上，置于37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)及溶血類型，將培養(yǎng)好的菌進(jìn)行革蘭氏染色在顯微鏡下觀察形態(tài)；而后將菌再接種血清肉湯，純化后放置4℃環(huán)境下保存，等待鑒定[1]。結(jié)果顯示，37℃培養(yǎng)24h后在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上形成乳白色、半透明，針尖大小的β溶血的菌落。在血清肉湯中先均勻混濁，后在試管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。鮮血瓊脂、血清肉湯培養(yǎng)物涂片，可見革蘭氏染色陽(yáng)性，多呈長(zhǎng)鏈狀的球菌。

附表 病原菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.3 生化實(shí)驗(yàn)

將病原菌分離培養(yǎng)并接種在不同的生化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。其觀察結(jié)果顯示，分離的病原菌能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麥芽糖、覃糖、綿子糖、果糖和衛(wèi)矛醇，具有典型的豬鏈球菌特性，可以確定該病原菌為豬鏈球菌。

2.4 動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn)

在血清肉湯中放入分離菌24h。選擇8只2.5kg左右的家兔，做兩組對(duì)照，其中4只家兔腹腔注射0.5ml的按比例稀釋的生理鹽水；另外的4只家兔注射生理鹽水。其結(jié)果顯示：接種分離菌的4只家兔體溫升高至41～42℃，有敗血癥，在36～90h內(nèi)死亡，死前出現(xiàn)扭脖的神經(jīng)癥狀，采取無(wú)菌解剖病變組織鏡檢，均見與原來(lái)死亡仔豬病料的細(xì)菌相同[2]，而另外4只家兔無(wú)異常，說(shuō)明分離菌的致病力極強(qiáng)。

2.5 藥敏試驗(yàn)

用常規(guī)紙片擴(kuò)散法。藥敏紙片的種類有18種。挑取15個(gè)菌落24h內(nèi)肉湯純培養(yǎng)菌液，用滅菌的10倍稀釋的生理鹽水后，在無(wú)菌條件下，用細(xì)管吸取0.2ml于血清瓊脂平板上，玻璃棒將其涂布均勻，然后將藥敏紙片用鑷子將其貼在已接種被檢菌株的平板上，兩片之間的斷離以l～2cm，置于37℃溫箱培養(yǎng)18～24h觀察并記錄，結(jié)果見附表。

由此可知，15個(gè)致病菌菌落中，對(duì)阿米卡星(AN)高度敏感的有10個(gè)，占受試菌株的66.7%；對(duì)新霉素(N)高度敏感的為6個(gè)，占受試菌株的40.0%。在中度敏感的藥物中，青霉素(P)為5個(gè)，占受試菌株的33.3%，梭青霉素為6個(gè)，占受試菌株的40.0%。

3 結(jié)論

（1）通過(guò)染色鏡檢、細(xì)菌的分離培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物接種等一系列實(shí)驗(yàn)室診斷方法斷定分離出的病原菌其形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征及理化特性，符合鏈球菌的特點(diǎn)，最終確定為該豬場(chǎng)發(fā)生了鏈球菌病。

（2）藥敏試驗(yàn)證明，鏈球菌對(duì)阿米卡星、新霉素高度敏感；對(duì)青霉素、梭青霉素中度敏感；對(duì)慶大霉素、麥迪霉素、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、鏈霉素、卡那霉素低度敏感；對(duì)氧氟沙星、紅霉素、慶大霉素、氨芐西林、苯唑西林有抗藥性。如果做到選藥合理、用藥及時(shí)，劑量大，療程足，能有效降低發(fā)病率和死亡率；若拖延時(shí)間或療程不足治療效果不佳或轉(zhuǎn)為亞急性和慢性。