加味柴芍六君顆粒對便秘型腸易激綜合征模型大鼠結腸組織5-HT的影響

鄭超偉，李桂賢，李 敏，覃釗蘭

（廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530023）

腸易激綜合征（IBS）是一種功能性腸病，表現為反復發作的腹痛，與排便相關或伴隨排便習慣改變。典型的排便習慣異常可表現為便秘、腹瀉，或便秘與腹瀉交替，同時可有腹脹／腹部膨脹的癥狀[1]。便秘型腸易激綜合征（IBS-C）是其中的一個亞型，其病理生理學基礎主要是胃腸動力學異常和內臟感覺異常，表現為獨立的腸功能紊亂性疾病，其特征是腸道壁無器質性病變，但整個腸道對刺激的生理反應有過度或反常現象[2]。IBS-C的病因和發病機制尚不清楚，可能與多種因素有關。研究表明5-羥色胺（5-HT）作為神經遞質，其表達的升高與IBS-C的發生有重要關系[3]。加味柴芍六君顆粒為我院名老中醫李桂賢教授治療IBS-C的基本方，效果顯著。本實驗旨在研究加味柴芍六君顆粒對大鼠結腸組織中5-HT表達的影響，以探討其對IBS-C治療的作用機制。

1 材料

1.1 實驗動物

清潔級♂SD大鼠72只，體質量（180±20）g，由廣西中醫藥研究所實驗動物中心提供。每只大鼠分籠獨立飼養，正常飼食、飲水，12h／12h晝夜交替。

1.2 實驗藥物

加味柴芍六君顆粒（柴胡10g，白芍15g，陳皮6g，法半夏10g，太子參10g，白術15g，蘇梗10g，牛膝15g，枳實15g，麻子仁15g，甘草6g）用江蘇省江陰天江藥業有限公司生產的免煎中藥，由我院制劑室配制成濃度為0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL的加味柴芍六君顆粒溶液。

枸櫞酸莫沙必利分散片（成都康弘藥業集團有限公司生產，國藥準字H20031110，規格5mg），成人每日常用量為15mg，相當于大鼠1.5mg/kg。

半固體營養糊的制備，取羧甲基纖維素5g溶于125mL蒸餾水中，并分別加入奶粉8g，白糖、淀粉各4g，活性炭末2g，攪拌均勻后配制成約150mL（約1g/mL）的黑色半固體糊狀物。

2 方 法

動物模型的建立。適應性喂養3天后，將72只大鼠隨機分為正常組，模型組，加味柴芍六君顆粒低、中、高劑量組及莫沙必利組各12只。除正常組外其余各組均用冰水灌胃法建立便秘型腸易激綜合征大鼠模型[4]。每只大鼠均用代謝籠分籠獨立飼養，正常飼食、飲水，12h/12h晝夜交替。模型組給予冰水（0℃～4℃生理鹽水）2mL，1日1次灌胃，共14天。正常組不灌胃，正常飼食、飲水。其余各組除冰水灌胃外也給予正常飼食、飲水。為消除生物節律的影響，均于上午8∶00開始灌胃，停止灌胃后各組繼續正常飼食、飲水。共14天。

給藥方法。造模成功后第2天開始給藥治療，模型組除常規喂養飼料外給予0.9%生理鹽水2mL，1日1次灌胃。加味柴芍六君顆粒低、中、高劑量組動物在造模成功后，按低、中、高劑量分別給予加味柴芍六君顆粒溶液0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL（分別相當于成人用量的6、12、24倍灌胃給藥，灌胃量按1mL/100g，每日1次）。莫沙必利組給予莫沙必利片1.5mg／kg灌胃，每日1次。每組均連續灌胃14天。

糞便顆粒數及含水量測定。每日分別收集每只大鼠灌胃后3h內及3～24h間的大便，計大便粒數，電子天平稱濕質量，微波烘烤8min后稱干質量，計算大便含水量百分比。含水率=（濕質量-干質量）/濕質量×100%。

小腸推進試驗。最后一次灌胃給藥后，各組大鼠禁食（不禁水）24h后，每只大鼠用灌胃針灌10%活性炭末混懸液2mL。30min后，2%戊巴比妥鈉溶液以腹腔注射麻醉，隨后打開腹腔，將幽門至回盲部完整取出。在不牽拉的前提下，把腸管平鋪成直線，測量小腸的全長（幽門至回盲部）及炭末混懸液在小腸內推進的距離。推進率=活性炭末混懸液移動距離（cm）/小腸總長度（cm）×100%，評估腸道推進功能。

免疫組化法檢測5-HT的表達。結腸組織標本用10%中性甲醛固定液固定，脫水后常規蠟塊包埋，制作4μm厚石蠟切片，按照SP法免疫組化試劑盒要求操作，同時以PBS代替一抗做陰性對照。光鏡下拍照，應用Image-ProPlus6.0專業圖像分析系統，選取陽性細胞表達的積分光密度、平均光密度等項指標對圖片進行半定量分析。

用SPSS17.0統計軟件進行數據分析。

3 結 果

3.1 一般狀態觀察

正常組大鼠皮毛光澤色白，精神佳，活潑，飲食正常，大小便正常。

模型組大鼠造模初期表現為煩躁不安，易激惹，抓咬模具，不斷嘶叫。3天后活動逐漸減少，精神萎靡不振，困倦嗜臥，反應減慢，納呆，進食量、飲水量減少，體質量增長緩慢。腹脹，皮毛枯黃無光澤，24h排便量減少，糞便干，糞便含水率降低。經加味柴芍六君顆粒治療后，大鼠活動增加，精神好轉，食量增多，體質量增加，抓取時反應靈敏，皮毛恢復光澤，大便正常。

用單因素方差分析（one-way ANOVA）對糞便顆粒數和含水率進行數據統計。各組間糞便顆粒數和含水率差異均有統計學意義（F=4.353，P=0.002；F=4.261，P=0.002）。用LSD（Least-significant Difference）法進行多組均數間的兩兩比較。各組大鼠糞便顆粒及含水率比較見表1。

表1 各組大鼠糞便顆粒及含水率比較 （Mean±SE）

3.2 小腸推進實驗

小腸推進功能用推進率進行比較。小腸推進實驗組間差異的檢驗用單向方差分析（one-way ANOVA），組間比較差異有統計學意義（F=29.431，P=0.000），用LSD（Least-significant Difference）法進行多組均數間的兩兩比較。各組大鼠小腸推進率比較見表2。

表2 各組大鼠小腸推進率比較 （Mean±SE）

3.3 免疫組化法檢測結腸組織中5-HT的表達

模型組大鼠結腸組織中5-HT含量較正常組升高（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組、莫沙必利組大鼠結腸組織中5-HT含量較模型組減低（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組大鼠結腸組織中5-HT含量較正常組升高（P＜0.05），加味柴芍六君顆粒各組之間結腸組織中5-HT含量未見明顯差異（P＞0.05）。各組大鼠結腸組織中5-HT的表達比較見表3。

表3 各組大鼠結腸組織中5-HT的表達比較

4 討 論

5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）信號通路在胃腸疾病的發生中占重要地位，它與多種胃腸道疾病包括炎癥性腸病（IBD）、腸易激綜合征（IBS）和腸內感染等有關。目前，5-HT受體激動劑及拮抗劑等藥物治療胃腸疾病現如今運用較廣泛，但會存在藥物不良反應及藥物依賴性。而中醫藥作為一種綠色療法對胃腸疾病具有適應癥廣，早期起效迅速，遠期療效穩定，多途徑調節，身心共治等優點。目前及今后中醫藥調節胃腸疾病的機制研究備受關注。

IBS-C屬于中醫“便秘”“腹痛”“郁證”等范疇[5]。中醫認為便秘多是由于飲食不節、情志失調、外邪犯胃、稟賦不足等原因引起，如《萬病回春?大便閉》謂：“身熱煩渴，大便不通者，是熱閉也；久病入虛，大便不通者，是虛閉也；因汗出多大便不通者，精液枯竭而閉也；風證大便不通者，是風閉也；老人大便不通者，是血氣枯燥而閉也；虛弱并產婦及失血，大便不通者，血虛而閉也；多食辛熱之物，大便不通者，實熱也。”其為熱結、氣滯、寒凝、氣血陰陽虧虛引起的腸道傳導失司所致。其病位在腸，同時與肺、脾、肝、胃、腎等多臟腑的功能失調有關。李桂賢教授認為其發生與“氣機升降失調”密切相關。情志不舒，肝氣郁結，肝脾（肝胃）失和，氣機阻滯，影響升降，阻礙大腸的傳導功能。由于氣機不暢，氣壅于大腸，使大腸之氣不得疏泄，易致傳導失司，糟粕蓄而不去發為便秘。而糟粕之物不得排出，會致毒邪內生，又加重了腸道失司。

5-HT是一種廣泛分布的神經遞質，具有調節消化道功能作用。胃腸道腺腔底部的神經內分泌細胞（EC）主要合成、分泌并再攝取外周神經系統的5-HT。5-HT幾乎參與所有腸易激綜合征的病理生理過程[6]。5-HT的增加，一方面導致了內臟傳入神經及腸神經系統的高敏感，并激活了多種神經活性物質，使參與腦-腸調節的化學信號異常表達。另一方面5-HT作用其各種受體，引起了腸道感知、運動及分泌的改變[7-8]。由此可見，5-HT在IBS-C發生發展中具有重要意義。本實驗中，加味柴芍六君顆粒能明顯增加模型大鼠糞便含水量，增加小腸推進率，表明加味柴芍六君顆粒能夠促進胃及十二指腸的消化活性，加強胃腸道的排空，加速小腸、大腸的蠕動，從而縮短通過時間。加味柴芍六君顆粒可抑制5-HT在結腸組織中的表達，改善腸道高敏感性及動力異常，可能為其治療IBS-C的機制之一。