白細胞介素1β作為自噬的可觀測相關指標與急性淋巴細胞白血病患兒臨床特征及預后之間的相關性觀察

朱瑩瑩

［鄭州大學附屬兒童醫院（河南省兒童醫院、鄭州兒童醫院） 血液腫瘤科，河南 鄭州 450018］

急性淋巴細胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）是臨床上常見的一類進行性惡性腫瘤[1]，其細胞分化以原始及早幼粒細胞為主，具有發病急、病程短等特點[2]，以發熱及出血等為主要臨床特征[3]。盡管隨著醫學技術地不斷提升，其臨床治療效果和緩解率不斷提高，但對于ALL的研究仍有較大提升空間，其中血清檢測指標的研究越來越引起醫學界的注意，例如白細胞介素、胰島素、基質金屬蛋白酶、前列腺E2、堿性成纖維細胞生長因子等[4-6]。這些血清因子或者酶可能與急性白血病發生、發展存在一定相關性，指導患者的疾病分型診斷和臨床治療。其中炎性因子白細胞介素1β（interleukin 1β, IL-1β）的成熟、分泌與自噬密切關聯，血液中大多免疫細胞都能大量分泌IL-1β（如單核細胞、巨噬細胞、B細胞等），而自噬現象的保護作用在正常情況下可維持細胞的代謝穩態，阻止腫瘤的發生[7]；而一旦腫瘤形成則導致自噬異常，從而影響化療藥物抗腫瘤細胞效應[8]。本文將通過實例研究，觀察IL-1β作為自噬的可觀測相關指標與ALL患兒臨床特征及預后之間的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2014年8月-2016年8月收治的60例ALL患兒作為研究對象，其中男34例，女26例；年齡2～13歲，中位年齡7歲；其中急性B型ALL 40例，急性T型ALL 15例，T/B混合白血病5例。所有入住患者經過免疫分型、核型分析、骨髓細胞形態學、融合基因檢測確診，符合WHO-2008 ALL分類標準[9]，并結合患者初診時年齡、白細胞數（white blood cell, WBC）及早期治療反應［糖皮質激素反應（glucocorticoids,GCs）、微小殘留病（minimal residual disease,MRD）水平等］分為低危、中危和高危，并根據按不同危險度分層治療。其中患兒經糖皮質激素治療的第7天和第8天時外周血中幼稚細胞數小于1 000個/μl則表明GCs反應好，大于1 000個/μl則表明反應差。所有患者均由家長簽署知情同意書，且該方案通過倫理委員會批準。

1.2 檢測方法

血漿收集：取初診時ALL患者的外周血約2 ml于乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA）抗凝管中，并在24 h內于4℃條件下2 000 g離心10 min，收集上清液血漿，每例患者血漿分兩管于-80℃保存待檢測。

IL-1β檢測：每例患者取一管血漿，冰上融化后用IL-1β Human ELISA Kit試劑盒測定IL-1β含量，用Multiskan FC酶標儀（Thermo Scientific）測定450 nm波長下吸光度，并根據標準曲線計算含量。

1.3 評價指標

臨床特征及預后相關性指標：第15天骨髓幼細胞水平、糖皮質激素反應、第15天微小殘留病水平、復發無復發生存率以及死亡患者在入組確診后的生存時間。

1.4 統計學方法

所有數據均采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，獨立資料采用獨立樣本t檢驗或者非參數檢驗；計數資料以百分比（%）表示，采用等級資料的Wilcoxon秩和檢驗或者χ2檢驗對臨床特征與血漿IL-1β含量間的關系進行檢驗。P ＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 血漿IL-1β水平與ALL患兒臨床特征的相關性

60例急性淋巴細胞白血病患兒的血漿IL-1β含量呈正態分布，濃度范圍為2.46～80.23 pg/ml，平均（18.43±16.36）pg/ml。以平均濃度為分界將所有患兒分為高濃度組（26例）和低濃度組（34 例）。血清IL-1β水平與ALL患兒臨床特征的關系如表1所示。兩組患者的血清IL-1β高低水平與性別、年齡、免疫分型以及第15天骨髓幼細胞水平和微小殘留病（minimal residual disease, MRD）水平等預后指標與無顯著相關性（P ＞0.05），與糖皮質激素反應、危險度分級等預后好的臨床指標存在顯著相關性（P ＜0.05）。見表1。

表1 血漿IL-1β水平與ALL患兒臨床特征的相關性 例（%）

續表1

2.2 血漿IL-1β水平與ALL患兒預后的相關性

從入組開始至患者隨訪結束，發現低濃度的IL-1β患者的無復發生存率為88.24%，死亡患者入組后的生存時間為（16.81±4.57）個月，與對照組患者相比差異無統計學意義（P ＞0.05）。見表2。

表2 血漿IL-1β水平與ALL患兒預后的相關性

3 討論

急性淋巴細胞白血病作為一種惡性血液病[10]，主要表現為淋巴癌細胞分化阻滯、增殖失控 、凋亡受抑。關于其具體發病機制尚處于進一步研究確證過程中。有研究表明不管是腫瘤血管新生，還是腫瘤細胞增殖分化凋亡、免疫逃逸都離不開血液中的各種細胞因子的調節。IL-1β是一種具有多功能的細胞因子，在機體內具有調控腫瘤免疫、炎癥反應等多種生物學活性，同時還能刺激多種免疫細胞產生和釋放炎癥因子[11-12]。正常生理狀態下血液細胞僅僅在接受刺激的條件下分泌IL-1β，而白血病細胞則可在無刺激條件下連續大量的分泌，可能導致體內IL-1β處于較高水平。由于IL-1β的分泌具有高度的自噬依賴性，即自噬可以調控多種細胞對IL-1β的分泌，且臨床研究顯示具有調控自噬效應的化合物與抗腫瘤化療藥物聯用可以增加腫瘤的凋亡[13-14]，以及相關研究表明患者緩解期的IL-1β水平較診斷初期稍有降低，因此可將血清IL-1β水平作為ALL細胞自噬的觀測指標，用以評價或反應兒童急性淋巴細胞白血病的臨床特征及預后情況與IL-1β水平是否存在相關性。

此次研究表明，血漿IL-1β水平與ALL患兒的部分臨床特征存在顯著相關性，如糖皮質激素反應、危險度分級，而與ALL患兒的無復發生存率以及確診后的生存時間無顯著相關性。在ALL的治療過程中，糖皮質激素反應敏感性是重要的危險評估指標和自噬調控緊密關聯的刺激因素，由于糖皮質激素可誘導促凋亡基因表達而誘導細胞凋亡，以及促自噬藥物可抑制抗凋亡基因活性而殺傷淋巴癌細胞[15]，兩者聯合作用協同效應，可促進白血病細胞對糖皮質激素敏感性，從而增強白血病細胞自噬。由于IL-1β的分泌具有高度的自噬依賴性，且在無炎性介質刺激下白血病細胞也能大量分泌，因此一旦白血病細胞自噬行為被誘導，細胞結構而被破壞而凋亡[16]，從而抑制IL-1β的生成，血液IL-1β水平呈現一定程度的下降，故而推測糖皮質激素反應敏感性與血液IL-1β水平存在顯著相關性，可能因為自噬作為中間過程而相互作用，共同調控或者反應ALL患兒的疾病進展。

盡管研究報道早期治療反應是ALL預后的重要指標[17]，但此次研究發現血漿IL-1β水平與早期治療反應的危險度分級存在顯著相關性，但與第15天骨髓幼細胞水平和MRD等重要預后指標不存在顯著相關性。臨床上對兒童ALL的危險度分層治療有利于前瞻性的個性化治療方案的開展[18]，不僅可以提高治療有效率，同時避免過度治療引起的不良反應[19-20]。危險程度越高，IL-1β水平相對越高，說明急性淋巴細胞白血病患兒的疾病進展與IL-1β水平存在正相關。盡管IL-1β水平不總與早期治療反應的其他指標存在相關性，甚至可能出現相反的結論，在實際臨床治療過程中，由于腫瘤疾病治療的綜合性、評估的多樣性、進展預后的復雜性以及患者的個體差異，醫護人員應該綜合考量選擇合適的、可靠的評價指標，研究每種指標之間可能存在的相關性時需結合患者的具體病情、病況、生理狀態等，形成針對每一特定患者的特定評價體系，針對具體評估結果開展個性化用藥。因此臨床上對于ALL患兒的疾病進展和預后的評估，仍需結合其他血清學指標，以及考察各指標之間的相關性，用于提高疾病進展評估和疾病治療效率，以及評價患者恢復情況和生理狀態。

綜上所述，IL-1β作為自噬的可觀測相關指標，在一定程度上可以反應ALL患兒的臨床癥狀和預后進展，對于評估患者初期的白血病細胞自噬水平和藥物治療效率需繼續深入研究。