制備靶向相變型載硫化鉍納米粒并用于體外CT/超聲顯像

周 頔，王志剛，文 明，李詠梅，呂發金*

(1.重慶醫科大學附屬第一醫院放射科，重慶 400016； 2.重慶醫科大學超聲影像學研究所，重慶 400010)

研制集顯影和治療為一體的多功能納米粒是近年研究熱點[1]。理想的納米粒應具有特異性聚集、安全無毒及循環時間長等優點[2]，但目前納米粒仍存在非特異性聚集、循環時間短等不足。硫化鉍(bismuth sulfide, Bi2S3)對X線有極高吸收力，是較好的CT成像對比劑[3]。全氟已烷(perfluorohexane, PFH)在一定條件下可發生液氣相變，增強超聲顯像效果[4]。本研究擬構建葉酸靶向相變型載Bi2S3納米粒(folate-targeted phase-transition nanoparticles carrying bismuth sulfide， FBS-PFH-NPs)，觀察其基本特性、體外細胞靶向能力及CT/超聲(ultrasound， US)雙模態顯像效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實驗材料 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dipa lmitoyl phosphatidyl choline， DPPC； Sigma公司)，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇[1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000， DSPE(PEG2000)； Sigma公司]，膽固醇(cholesterol， CH； Avanti公司)，葉酸修飾的DSPE(PEG2000)[DSPE(PEG2000)Folate； Sigma公司]，二棕櫚酰磷脂酰甘油(distearoyl phosphatidylglycerol, DPPG； Sigma公司)，PFH(Avanti公司)，葉酸(Sigma公司)，Bi2S3納米顆粒(中國科學院上海硅酸鹽研究所)，DMEM培養液(Gibco公司)。

1.1.2 實驗儀器 Malvern激光粒徑儀，Olympus IX53光學顯微鏡(簡稱光鏡)，Hitachi H-7600透射電子顯微鏡，KLUKE st18遠紅外測溫儀，Agilent 7500ce電感耦合等離子體發射光譜儀(inductively coupled plasma optical emission spectrometer， ICP-OES)，SONIC VCX-130超聲破碎儀，海扶JC型HIFU治療系統，百勝Mylab 90彩色超聲診斷儀，GE LightSpeed CT掃描儀，DFY圖像定量分析儀(重慶醫科大學超聲影像學研究所自行研發)。

1.2 制備納米粒 將200 μl Bi2S3(10 mg/ml)與 200 mg DPPC、DSPE(PEG2000)Folate、DPPG及CH(4種試劑的體積比為5.0∶3.0∶1.5∶1.5)溶于20 ml三氯甲烷，于45℃下采用旋轉蒸發儀旋蒸2 h(55 r/min)，加入2 ml PBS水化，而后滴加200 μl PFH，冰浴條件下采用超聲波破碎儀振動乳化5 min。將振動乳化后的混合溶液轉移至離心管，洗滌、3 500 r/min離心3次(每次5 min)，棄上清液和底層未包裹Bi2S3，加入少量PBS混勻，獲得FBS-PFH-NPs。按照相同方法……