重慶地區2 850例地中海貧血患者基因分析

伍莎莎，蔣 凡，項貴明，唱 凱，曾東風△

(1.陸軍特色醫學中心血液科，重慶 400042；2.陸軍軍醫大學新橋醫院檢驗科，重慶 431900； 3.陸軍特色醫療中心檢驗科，重慶 400042)

地中海貧血是一類因珠蛋白基因突變或缺失而導致珠蛋白合成障礙的單基因遺傳性疾病,按突變類型不同分為α地中海貧血和β地中海貧血。地中海貧血是影響力最大、患病率最高的遺傳病之一,其基因突變類型具有明顯的人種特征和地域差異。該病高發于熱帶、亞熱帶地區，多見于東南亞、中東、非洲和地中海地區人群。我國地中海貧血高發于廣東省、廣西壯族自治區、貴州省和云南省地區[1]，重慶地區地中海貧血發病率近年來也有所上升。地中海貧血患者由于α-或β-珠蛋白鏈合成明顯減少或缺失而引起的血紅蛋白紊亂，其結果是慢性溶血性貧血，無效的紅細胞生成和骨髓過度刺激[2]。目前對于地中海貧血并沒有有效的治療方法，因此預防是阻斷地中海貧血的首要方法，本研究對重慶地區患者的基因型進行研究，通過對患病人群基因型的分析，明確不同基因型構成比，這對制定重慶地區地中海貧血的防控措施有一定價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2014年1月至2017年9月于陸軍特色醫療中心和陸軍軍醫大學新橋醫院就診的疑似地中海貧血的患者為研究對象，去除未行地中海貧血基因檢測的部分患者，共計6 609例，年齡0～88歲。將研究對象按年齡0～16，>16～49歲，>49～88歲分為兒童組、成人組和老年組，收集其基本信息和基因檢測結果。本研究經陸軍軍醫大學特色醫療中心和陸軍軍醫大學新橋醫院倫理委員會批準。

1.2方法 缺失型α地中海貧血基因檢測采用缺口聚合酶鏈反應法[3]，試劑盒購自深圳亞能生物技術有限公司；點突變型α地中海貧血[3]和β地中海貧血[4]基因檢測采用反向點雜交技術，試劑盒購自深圳益生堂生物有限公司。本研究均使用上述方法對地中海貧血基因進行檢測。

1.3統計學處理 采用SPSS22.00軟件完成，計數資料用百分比表示，組間采用秩和檢驗，檢驗水準α=0.01，以P<0.01為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1α、β地中海貧血基因型調查 共檢測出2 850例(43.12%)地中海貧血患者，其中男707例(24.81%)，女2 143例(75.19%)；兒童組547例(19.19%)，成人組1 994例(69.96%)，老年組309例(10.84%)。α地中海貧血患者1 245例(43.68%)，β地中海貧血患者1 562例(54.81%)，α地中海貧血合并β地中海貧血患者43例(1.51%)。α地中海貧血檢出--SEA/aa、-a3.7/aa、--SEA/a3.7、-a3.7/-a4.2、--SEA/a4.2、-a4.2/aa、aaQS/aa、aaCS/aa、aaWS/aa、--SEA/aaWS、--SEA/aaQS、--SEA/aaCS共計12種基因型，以--SEA/aa基因型(790例)為主，其次為--a3.7/aa(274例)，構成比分別為63.45%、22.01%，將--SEA/aa基因型和-a3.7/aa基因型患者分入兒童組、成人組、老年組，3組患者數量比較差異有統計學意義(c2=12.214，P=0.002)。各組α地中海貧血基因型構成比見表1。突變類型以缺失(94.46%)為主，點突變74例(5.94%)，復合兩種基因突變的患者78例(6.26%)。

表1 重慶地區α地中海貧血患者基因型及其構成比[n(%)]

續表1 重慶地區α地中海貧血患者基因型及其構成比[n(%)]

表2 重慶地區β地中海貧血患者基因型及其構成比[n(%)]

續表2 重慶地區β地中海貧血患者基因型及其構成比[n(%)]

β地中海貧血檢出CD17、CD41-42、Ivs-2-654、-28、CD71-72、βE、CD43、CD27-28、-29、CAP、IVS-1-1、CD14-15、CD17/Ivs-2-654、CD17/βE、CD17/43、Ivs-2-654/βE、-28/βE、CD41-42/17共計18種基因型，以CD17(475例)、CD41-42(466例)、Ivs-2-654(424例)3種基因型為主，將CD17、CD41-42、Ivs-2-654 3類基因型患者分入兒童組、成人組、老年組，3組患者數量無明顯差異(c2=3.938，P=0.415)。突變類型以雜合型為主，純合突變共8例，復合兩種基因突變的患者13例。各組β地中海貧血基因型構成比見表2。

2.2α地中海貧血復合β地中海貧血基因型調查 2 850例地中海貧血患者中，a地中海貧血復合β-地中海貧血患者發現43例(1.51%)。α3.7βCD41-42、α3.7βCD17、α3.7βIVS-II-654、--SEA/aaβCD17 4種復合基因型為主，檢出--SEA/αQSβCD17 3基因復合1例，見表3。

表3 α地中海貧血復合β地中海貧血基因型及其構成比

續表3 α地中海貧血復合β地中海貧血基因型及其構成比

2.3地中海貧血患者年齡與性別分析 將總體按性別分為兩組，利用連續變量分析兩組年齡和地中海貧血基因型的關系，發現男性和女性數量水平均在3歲前有1個高峰，女性25～29歲聚集，有723例。小于3歲的地中海貧血患者共計269例：其中女119例，男150例；α地中海貧血107例，東南亞型地中海貧血75例，α3.7/aa型地中海貧血21例；β地中海貧血159例，CD17型地中海貧血45例，CD41-42型地中海貧血62例，IVS-II-654型地中海貧血39例；α復合β地中海貧血3例(--SEA/aaβCD41-42、--SEA/aaβCD17、--SEA/aaβ IVS-II-654)。25～29歲患者有802例，其中男79例，女723例，女患者中α地中海貧血348例，東南亞型地中海貧血213例，α3.7/aa型地中海貧血68例；β地中海貧血362例，CD37型地中海貧血111例，IVS-II-654型地中海貧血98例，CD41-42型地中海貧血96例；α復合β地中海貧血13例(α3.7βCD17 5例，--SEA/aaβCD17 3例，α3.7βIVS-II-654 3例，α3.7βCD41-42 1例，α4.2βCD17 1例)。

3 討 論

地中海貧血是一種造血系統遺傳疾病，因編碼紅細胞血紅蛋白的基因產生缺失或錯配，引起血紅蛋白合成紊亂，導致貧血的發生。地中海貧血的嚴重程度取決于基因中涉及的突變程度及其相互作用。血紅蛋白分子具有通常被稱為α和β的亞單位，兩個亞單位都需要適當地結合肺部的氧氣，并將其輸送到身體其他部位的組織。16號染色體上的基因負責編碼α亞基，而11號染色體上的基因控制β亞基的編碼，缺少特定的亞基決定了地中海貧血的類型(例如缺少α亞基則導致α地中海貧血)。根據基因和突變的類型，疾病發生、發展可能有不同程度的變化[5]。目前國內外針對地中海貧血的有效根治方法尚未問世，患上重型地中海貧血的孩子必須長期輸血但仍難以活到成年，而異基因造血干細胞移植雖然有概率使該病完全緩解，但因嚴重的并發癥和治療相關病死率而影響了其廣泛應用。目前，針對該病的防治手段更多地集中于優生優育的選擇上，為了降低重型地中海貧血患兒的出生率，有必要開展對地中海貧血高發地區的地中海貧血患者的流行病學調查，分析其基因型組成，明確不同基因型對病情嚴重程度的影響。

本研究發現，確診人群中α地中海貧血共計12種基因型，以--SEA/aa、-a3.7/aa兩種基因型多見，其中--SEA/aa基因型790例，占α地中海貧血患者的63.45%，該結果與福建、廣東、廣西、海南、江蘇、貴州、四川、云南報道的α地中海貧血基因常見基因型一致[6]。該群體中-a4.2/aa占2.73%，在海南等地的地中海貧血基因流行病學調查結果顯示，-a4.2/aa型和-a3.7/aa型突變發生概率接近相等[7]。結果顯示其中-a3.7/aa基因型以成人組為主，兒童組和老年組較--SEA/aa基因型占比更少，分析-a3.7/aa基因型與--SEA/aa基因型群體年齡構成，均在0歲和27歲有一個高峰，和總體分布水平一致。非缺失型α地中海貧血本次檢測出74例，包括aaQS/aa、aaCS/aa、aaWS/aa這3種基因型，占比5.54%，與國內多數文獻報道一致。本研究此次共檢測出18種β-地中海貧血基因型，以CD17、CD41-42、Ivs-2-654這3種基因型為主，與文獻報道的華人地中海貧血基因型分布基本一致[8]。CAP、IVS-1-1、CD14-15這3種基因亞型共有8例，在西南地區人群中較為罕見，這與之前的文獻[6-8]報道結果一致。

在該樣本中，復合兩種以上不同地中海貧血基因的有134例，復合α、β地中海貧血患者共43例，其中有1例3基因復合地中海貧血，其基因型為--SEA/αQSβCD17。本研究檢出α3.7βIVS-II-654患者7例，α3.7βCD41-42患者8例，α3.7βCD17患者7例，--SEA/aaβCD17患者7例，--SEA、CD17、α3.7、CD41-42、IVS-II-654都是本文報道的重慶地區地中海貧血的常見基因。分析該結果，本研究認為在發病率高的地區兩個地中海貧血患者結婚的情況并不罕見，而地中海貧血患者本身可能并不具備相關的醫學常識。盡管復合α、β地中海貧血患者在臨床表現上不一定比單純α地中海貧血或β地中海貧血嚴重[9-11]，但遺傳給下一代的概率更高。

在本研究納入的25～29歲區間的患者中，地中海貧血基因篩查結果顯示女性患者(723例)遠多于男性(79例)。鑒于地中海貧血男女發病率無差異，本研究分析該年齡段女性患者多數為孕婦，醫院產檢時發現貧血遂進行了地中海貧血基因檢查，而育齡期夫婦對孕前篩查地中海貧血基因了解甚少。地中海貧血是一種不完全顯性遺傳或隱性遺傳，父母雙方只要有1個雜合子就有可能生育患病新生兒[12]，母親孕檢僅可避免重型地中海貧血患兒的出生。故此，本研究認為在預防地中海貧血患兒出生方面對男性(父親)的地中海貧血基因檢測也非常有必要，應該多宣傳和提倡孕前夫婦雙方對地中海貧血基因進行篩查。

重慶市地處我國經濟相對落后的西南地區，其中多個轄區是地中海貧血高發區，本研究收集了自2014年1月至2017年9月共計6 609名疑似地中海貧血患者，檢出2 850例地中海貧血患者或地中海貧血基因攜帶者，檢出率為43.1%。患者多數對地中海貧血缺乏基本了解，容易導致下一代再患地中海貧血，因此向廣大人民群眾傳播地中海貧血相關的知識顯得非常重要，尤其是在經濟落后地區，這一任務就更加緊迫。事實上，如果科學地進行基因檢測，地中海貧血患者的后代完全可以擁有正常的基因型。開展地中海貧血的知識宣傳和地中海貧血基因的孕前篩查對促進優生優育、提高人口素質、減輕國家和家庭的負擔有重要的意義。