中藥超微粉穴位敷貼對變應性鼻炎大鼠白三烯水平的影響

陳 靜，陳綺倩，李彥輝，張嘉玲，陳俊琦

(1.南方醫科大學中醫藥學院針灸推拿教研室，廣州 510515;2.南方醫科大學第三附屬醫院康復醫學科，廣州 515630)

變應性鼻炎(AR)是常見的以噴嚏、鼻癢、清水樣涕及鼻塞等不適為主要臨床表現的鼻黏膜慢性炎性反應性疾病，近年發病率逐年上升，現已成為全球性的慢性疾病，嚴重影響著人們的日常生活和工作，造成了巨大的社會經濟負擔[1-2]。目前，AR治療以西醫藥物干預為主，主要有鼻用激素、鼻用抗組胺藥等一線治療藥物[3]，然而療效不夠理想，常常需要聯合用藥。近年，新出臺的《變應性鼻炎診斷和治療指南(2015 年，天津)》指出，AR的治療原則包括環境控制、藥物治療、免疫治療和健康教育[3]，簡而言之，“防治結合，四位一體”，這與傳統醫學的天灸療法，不謀而合。天灸療法對AR的防治已廣泛應用于臨床[4-6]，多選用《張氏醫通》中的“冷哮方”為代表方劑。但其有一定自身的缺陷，本研究為求療效的安全性和最大化，對藥粉形態進行改良創新為超微粉。近年研究發現，白三烯水平與AR的疾病活動度存在相關性，其地位也日益得到重視[7-10]。基于此，本實驗擬觀察中藥超微粉穴位敷貼干預后AR大鼠血清白三烯水平的變化，以完善其可能的作用機制，為臨床進一步應用提供依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 選取購于廣州中醫藥大學實驗動物中心的50只2月齡SD大鼠(許可證號：0074460)，雌雄各半。分籠飼養于廣州中醫藥大學實驗動物中心SPF級實驗室，室溫(20±2)℃，12 h間斷照明，自由攝食飲水。

1.1.2實驗藥物和主要儀器 卵清蛋白(OVA)購自美國Sigma公司；Al(OH)3粉佐劑購自中國天津市福晨化學試劑廠；丙酸氟替卡松鼻噴霧劑購自英國GSK公司。中藥穴位敷貼劑：普通粉由延胡索粉、白芥子粉、甘遂粉和細辛粉均勻混合而成，購自中國廣州致信中藥飲片有限公司(批號：080710)；超微粉成分同上，但由廣東省第二中醫院藥劑科按照粒徑范圍0.10～75.0 μm，粒度分布中心D50<10 μm，達300目以上的標準粉碎成超微粉。大鼠白三烯ELISA試劑盒購自中國上海美旋生物公司。

1.2方法

1.2.1分組 通過隨機數字表法將SD大鼠隨機分為空白對照組(10只)和造模組(40只)，每組雌雄各半。造模成功后的AR大鼠再次隨機分為模型對照組、丙酸氟替卡松組、普通粉敷貼組和超微粉敷貼組，每組10只，同樣雌雄各半。

1.2.2模型制備 造模組SD大鼠適應性喂養3 d后，進行造模：(1)基礎致敏，將OVA 10 mg+Al(OH)3粉末30 mg+生理鹽水1 mL形成混懸液，對大鼠進行腹腔內注射，隔天1次，共7次；(2)激發，第15天給予5%OVA 50 μL滴鼻，每天每側1次，和1%OVA噴霧吸入5 min，每天1次，連續7 d。空白對照組大鼠則予等量生理鹽水代替進行腹腔注射、滴鼻及噴霧吸入刺激，方法同上。

1.2.3治療方法 (1)空白對照組：不進行任何處理措施。(2)模型對照組：進行生理鹽水滴鼻，每天1次，連用10 d。(3)丙酸氟替卡松組：進行丙酸氟替卡松氣霧劑噴鼻，每天1次，每次50 μg，連用10 d。(4)普通粉敷貼組：敷貼前，混合普通藥粉和新鮮姜汁，調勻，并制成0.5 cm×0.5 cm大小的藥塊；取該組大鼠大椎、肺俞和腎俞(定位參考《常用實驗動物穴位定位》)周圍備皮后，用3.0 cm×3.0 cm一次性紙膠布將藥塊固定于上述腧穴，再使用一次性透氣孔膠布纏繞一圈加以固定。每次貼藥4 h，連續10 d。(5)超微粉敷貼組：以超微藥粉代替普通粉對該組大鼠進行貼敷外，其余方法同普通粉敷貼組。

1.2.4外周血白三烯的檢測 治療結束后，采用雙抗體夾心ELISA法進行白三烯水平檢測，具體操作參照說明書，根據標準曲線求得所測樣品的濃度。

2 結 果

各組大鼠血清白三烯水平如下：空白對照組(285.90±237.59)pg/mL，模型對照組(1 327.00±709.65)pg/mL，丙酸氟替卡松組(839.00±171.60) pg/mL，普通粉敷貼組(855.00±436.25)pg/mL，超微粉敷貼組(471.50±171.14)pg/mL。與模型對照組相比，其余組血清白三烯水平均降低，差異有統計學意義(P<0.05)；丙酸氟替卡松組和普通粉敷貼組血清白三烯水平高于超微粉敷貼組、空白對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

穴位敷貼治療AR因其確切的療效在臨床上廣泛應用，但既往研究多選用普通中藥粉進行敷貼，超微粉與傳統制劑相比，能增大比表面積，均勻混合有效成分，促使有效成分更好地經皮吸收，節省材料的同時也提高了藥效。前期有學者對中藥超微粉穴位敷貼的療效和作用機制進行了研究，發現超微粉比普通粉劑更能減輕阿爾茨海默病(AD)模型大鼠的癥狀，降低血清轉化生長因子β1(TGF-β1)與T輔助細胞(Th)17的水平，減緩甚至逆轉鼻黏膜重塑[11-13]。然而，前期實驗有所欠缺，忽略了白三烯的重要性。目前普遍認為免疫球蛋白E(IgE)介導的Ⅰ型變態反應是AR發病的核心機制[14-16]。特異性個體吸入變應原時，可誘導鼻腔局部和區域引流淋巴器官產生IgE。通過與高親和力受體FcεRI相結合，特異性IgE在鼻黏膜嗜堿粒細胞、肥大細胞等效應細胞表面產生致敏，但無臨床癥狀。當機體再次接觸相同變應原時，會誘發速發相反應，即變應原通過橋聯臨近的IgE受體，引起特異性IgE致敏的嗜堿粒細胞和肥大細胞脫顆粒活化，釋放白三烯等炎性介質，刺激鼻黏膜的感覺神經末梢和血管，興奮副交感神經，引起鼻癢、打噴嚏、清水樣涕等臨床癥狀。接著釋放的炎性介質進一步誘發遲發相反應，導致進一步釋放炎性介質，Th2免疫應答占優勢，持續或加重炎性反應，從而出現鼻黏膜組織明顯水腫，引起鼻塞。可見，白三烯在AR發病過程中，對炎性反應起了重要的免疫調節作用，在炎性細胞的存活時間、炎性細胞的活化，以及白細胞的黏附、移行和趨化等方面均發揮了作用，同時可擴張鼻黏膜血管、增加血管通透性，導致局部組織水腫[16]。

本研究中，模型對照組AR大鼠血清中白三烯水平較其余4組大幅升高，說明造模成功；與模型對照組相比，其余組血清白三烯水平均降低，可見白三烯表達水平高低與AR的疾病活動度呈正相關，與楊培培等[7]結果相同，同時也證實各治療組治療均有療效。前期研究證實，中藥穴位敷貼通過減緩甚至逆轉鼻黏膜重塑，減輕炎性反應，以干預AR[11-13]。排除藥物的干預，中藥穴位敷貼干預AR的效果與穴位配伍也密切相關。本研究配伍中，大椎穴為三陽、督脈之會，可提升諸經陽氣，宣通肺氣；肺為氣之主，肺俞穴是肺臟精氣輸注于背部處；腎為氣之根，腎俞穴是腎臟精氣輸注于背部處。肺病日久，遷延及腎，取背俞穴以調養肺氣，補益腎氣，從而宣通鼻竅[17]，這與中醫學對AR病因和病機的認識相切合。

丙酸氟替卡松組和普通粉敷貼組、超微粉敷貼組和空白對照組，組間比較AR大鼠血清中白三烯水平無明顯差異，但超微藥敷貼組和空白對照組均低于丙酸氟替卡松組和普通粉敷貼組，與前期研究HE染色及透射電鏡觀察的結果是相印證的[7]。這提示超微粉敷貼組的療效優于普通粉敷貼組。說明中藥超微粉化能使藥物成分更有效吸收，提高藥物生物利用率，并通過藥物和腧穴刺激的雙重作用，有效降低AR大鼠血清中白三烯水平，在抑制AR免疫應答的過程中發揮著重要的作用，這為臨床治療AR提供了一定的基礎研究參考依據。

綜上所述，治療AR患者，在考慮藥物的有效性和安全性、患者的耐受性、藥物成本效應、患者治療依從性等的同時，為達到控制臨床癥狀、改善生存質量的目的，可以考慮推行超微粉敷貼和普通藥粉敷貼進行日常灸、三伏灸和三九灸，前者效果更好。本研究仍存在樣本量少，未對鼻塞及鼻通氣情況進行觀察，缺乏超微粉敷貼的臨床應用相印證等不足，其作用仍待進一步研究證實。