TLR4對(duì)肺炎鏈球菌誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡的影響

李蓮梅，余博文，畢建朋，王曼華

1)青海省婦女兒童醫(yī)院感染消化科 西寧 810000 2)西寧市城西區(qū)疾病控制中心疾控科 西寧 810000 3)鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 (河南省兒童醫(yī)院；鄭州兒童醫(yī)院)泌尿外科 鄭州 450052 4)河南廣播電視大學(xué)農(nóng)醫(yī)學(xué)院 鄭州 450046

肺炎是5歲以下兒童死亡的重要原因之一[1]。肺炎鏈球菌是兒童社區(qū)獲得性肺炎的主要病原。肺泡上皮細(xì)胞可以合成和分泌多種活性物質(zhì)，參與肺炎發(fā)生過(guò)程。肺泡上皮細(xì)胞可以分為Ⅰ型和Ⅱ型，其中Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞具有維持肺組織正常功能、分泌肺泡表面活性物質(zhì)等作用，與肺炎發(fā)生密切相關(guān)[2-3]。Toll樣受體4(toll-like receptor-4，TLR4)參與介導(dǎo)細(xì)胞凋亡、炎癥、氧化應(yīng)激等多種病理生理過(guò)程，在肺炎引起的肺損傷中發(fā)現(xiàn)肺組織中TLR4高表達(dá)，TLR4在內(nèi)毒素、脂多糖等誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞損傷中表達(dá)上調(diào)[3-5]。本實(shí)驗(yàn)以Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞來(lái)源的A549細(xì)胞作為研究對(duì)象，探討TLR4在肺炎鏈球菌誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用，以期為明確肺炎肺泡上皮細(xì)胞損傷機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1材料肺炎鏈球菌R6購(gòu)自美國(guó)ATCC公司，細(xì)胞色素C(Cytochrome C)抗體購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所，胞漿蛋白提取試劑盒、線粒體蛋白提取試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，qRT-PCR試劑盒購(gòu)自美國(guó)Clontech公司，TLR4 siRNA慢病毒和siRNA陰性對(duì)照慢病毒、TLR4抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

1.2細(xì)胞分組和培養(yǎng)A549細(xì)胞分成4組：對(duì)照組(不用肺炎鏈球菌誘導(dǎo)刺激)、肺炎鏈球菌組(培養(yǎng)細(xì)胞密度為70%時(shí)，在細(xì)胞中添加1×107CFU/L的肺炎鏈球菌進(jìn)行誘導(dǎo)刺激)、siRNA-NC組(肺炎鏈球菌誘導(dǎo)刺激A549細(xì)胞后，感染siRNA陰性對(duì)照慢病毒)和siRNA-TLR4組(肺炎鏈球菌誘導(dǎo)刺激A549細(xì)胞后，感染TLR4 siRNA慢病毒)，每組均設(shè)5個(gè)平行對(duì)照。……