妊娠期糖尿病孕婦血漿及胎盤組織中TNF-α和VCAM-1的表達

楊筱青，趙莉莉,郭華峰，張瑞麗

鄭州市婦幼保健院婦產科 鄭州 450052

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是發生在妊娠期的一種常見的病理狀態，增加了孕產婦和圍產兒并發癥的發生率[1-2]。近年來研究[3]發現GDM的特征是低度炎癥和血管內皮細胞功能障礙，血管內皮損傷可引起胰島素抵抗，誘發妊娠期糖尿病。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)生物學功能廣泛，可促進炎癥細胞聚集和黏附，使血管內皮細胞損傷。血管細胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)是內皮功能障礙的生物標志物[4]，與白細胞表面的極遲抗原-4(VLA-4)配體結合，可促進白細胞黏附于血管內皮細胞和跨內皮遷移，最終導致血管內皮細胞損傷[5]。本研究通過測定正常孕婦和GDM患者血漿、胎盤組織中TNF-α、VCAM-1的表達，探討TNF-α、VCAM-1在GDM血管內皮細胞損傷發病機制中的作用，進而為GDM的治療提供依據。

1 對象與方法

1.1研究對象選取2015年8月至2016年1月在我院產檢和住院分娩的GDM孕婦50例(GDM組)，診斷標準參照第8版《婦產科學》：在妊娠24～28周行75 g空腹葡萄糖耐量試驗，空腹血糖5.1 mmol/L，1 h血糖10.0 mmol/L，2 h血糖8.5 mmol/L，任意一時間點血糖值達到或超過上述標準即可診斷為GDM。另選取同期在我院產檢和住院的無妊娠合并癥和并發癥的正常孕婦50例(正常組)。GDM組年齡21.0～35.0(27.7±3.4)歲，分娩孕周37.0～41.1(38.5±1.2)周；正常組年齡21.0～35.0(26.6±3.8)歲，分娩孕周37.0～41.2(39.1±1.1)周。兩組產婦均為單胎妊娠，均無妊娠期高血壓、心臟病、嚴重肝腎疾病、其他內分泌疾病、血液性疾病、胎膜早破和近期感染病史，無酗酒、抽煙、吸毒及胰島素應用史等。

1.2標本采集入院后治療前抽取空腹靜脈血3 mL用于測定血漿TNF-α、VCAM-1濃度。胎盤娩出后15 min內收取胎盤母體面近臍帶根部直徑3 cm范圍內的約1 cm3大小的組織，生理鹽水沖洗后用濾紙吸干水分，在福爾馬林溶液中固定，常規制片。

1.3觀察指標

1.3.1 一般指標 記錄孕婦年齡、分娩孕周、身高、治療前體重及血壓等指標。

1.3.2 血漿TNF-α、VCAM-1濃度的測定 采用ELISA法測定血漿TNF-α、VCAM-1濃度，試劑盒購自Elabscience公司，操作步驟按試劑盒說明書進行。鼠抗人TNF-α、兔抗人VCAM-1多克隆抗體購自美國Santa Cruz Biotechnology公司。

1.3.3 胎盤組織中TNF-α、VCAM-1的表達 采用免疫組化法測定。胎盤組織常規脫蠟、水化，PBS洗滌3次，高溫高壓抗原修復5 min，自然冷卻后PBS洗滌，滴加一抗50 μL室溫孵育1 h，滴加二抗50 μL室溫孵育15 min，DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明、封片。在光學顯微鏡下觀察胎盤組織，陽性細胞表現為胞質深棕色顆粒狀著色。在鏡下選取典型視野，用Image-pro plus 6.0處理圖片，計算染色區域光密度值。

1.4統計學處理采用SPSS 17.0對數據進行分析。采用兩獨立樣本t檢驗比較兩組各指標之間的差異，血漿TNF-α、VCAM-1濃度的相關性、血漿和胎盤組織中兩者表達的相關性采用直線相關分析，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1兩組一般資料比較見表1。兩組患者年齡、分娩孕周、身高、體重、收縮壓及舒張壓差異均無統計學意義。

2.2兩組血漿TNF-α、VCAM-1濃度的比較及相關性分析GDM組血漿TNF-α、VCAM-1濃度均高于正常組(表2)。GDM組血漿TNF-α與VCAM-1濃度呈正相關(r=0.727，P<0.001)；正常組血漿TNF-α與VCAM-1濃度無相關性(P=0.950)。

表1 兩組一般情況比較

1 mmHg=0.133 kPa

表2 2組血漿TNF-α和VCAM-1濃度的比較

2.3兩組胎盤組織中TNF-α、VCAM-1的表達TNF-α主要表達于胎盤絨毛滋養細胞和血管內皮細胞，蛻膜細胞也可有表達，定位于細胞質。VCAM-1主要表達于胎盤絨毛的合體滋養細胞和血管內皮細胞，定位于細胞質(圖1)。GDM組TNF-α、VCAM-1表達水平高于正常組(表3),且兩者表達水平呈正相關(r=0.772，P<0.001)。GDM組血漿TNF-α、VCAM-1濃度與胎盤中的表達水平均呈正相關(r=0.838、0.693，P均<0.001)。

A、B：正常組、GDM組TNF-α的表達；C、D：正常組、GDM組VCAM-1的表達

組別nTNF-αVCAM-1正常組500.063±0.0220.043±0.020GDM組500.124±0.0240.109±0.025t13.06814.660P<0.001<0.001

3 討論

TNF-α是一種由中性粒細胞、單核巨噬細胞、NK細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞及血管內皮細胞分泌的細胞因子。妊娠后胎盤組織也可分泌TNF-α。有研究[6]發現TNF-α可體外誘導原代人臍靜脈內皮細胞功能障礙。VCAM-1是免疫球蛋白基因超家族的成員，主要功能是介導淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞與血管內皮的黏附，在白細胞-內皮細胞信號轉導中起重要作用，參與血管生成、內皮損傷等過程[7]。GDM孕婦血清和臍帶血中VCAM-1水平高于正常孕婦，其水平升高與不良妊娠結局密切相關[8],推測可能與血管內皮損傷有關。Di Fulvio等[9]的研究結果表明TNF-α能刺激人臍靜脈內皮細胞內VCAM-1、ICAM-1的表達，導致血管通透性增加和血管炎癥性反應，促進內皮細胞功能損傷，提示GDM與炎癥因子的過度表達和血管性白細胞黏附分子表達增高有關，兩者都可導致血管內皮功能障礙和血管疾病，加重胎盤的缺血缺氧狀態。

本研究結果表明GDM孕婦血漿及胎盤組織中TNF-α、VCAM-1的表達均較正常組升高，且TNF-α與VCAM-1的表達呈正相關，血漿TNF-α、VCAM-1的水平分別與胎盤組織中TNF-α、VCAM-1的表達呈正相關。說明TNF-α作為炎癥細胞因子，可刺激VCAM-1的表達，兩者共同作用，導致血管內皮細胞損傷，協同促進了GDM的發生發展。

綜上所述，臨床上可以通過監測GDM孕婦血漿TNF-α、VCAM-1水平來評估宮內環境；通過減輕血管內皮的損傷，減少孕產婦和圍產兒并發癥的發生。