大鼠H9c2心肌細胞中SK2通道和JP2蛋白的表達及定位

羅天霞，樊紅琨，李立人，閆寧寧，章 茜

鄭州大學基礎醫學院生理學教研室 鄭州 450001

Junctophilin2(JP2)位于心肌細胞偶聯膜復合體，是一種膜結合蛋白，可與細胞膜和內(肌)質網膜相互作用，在心肌細胞興奮-收縮偶聯過程中起到至關重要的作用[1]。在肥厚性心肌病和心力衰竭等心臟疾病中JP2蛋白表達下調，可引起心肌細胞興奮-收縮失偶聯[2]。小電導鈣激活鉀通道屬于鈣激活鉀通道家族，參與心肌細胞動作電位復極化末期的構成。而動作電位復極化末期相當于心肌細胞興奮性的相對不應期和超常期，臨床發生的心律失常多見于這一時期。因此SK2通道與心律失常發生的分子機制有關[3-4]。JP2作為參與細胞膜與肌質網膜偶聯膜復合體關鍵蛋白，是否與SK2通道具有相互作用，所知甚少。該實驗主要研究大鼠心肌細胞系H9c2中JP2蛋白與SK2通道是否存在相互作用，為后續研究JP2對SK2通道的功能調控奠定實驗基礎。

1 材料與方法

1.1材料H9c2大鼠心肌細胞系為具有心肌功能的特異心肌樣細胞系，由鄭州大學藥理學系韓圣娜老師惠贈。DMEM高糖培養基和胎牛血清購自美國Gibco公司，蛋白A/G瓊脂糖珠購自美國Sigma公司。兔多克隆抗SK2抗體購自以色列Alomone Labs公司，小鼠單克隆抗JP2抗體購自英國Abcam公司。HRP標記的山羊抗小鼠和山羊抗兔IgG購自美國BioRad公司。TRITC標記的羊抗兔和FITC標記的羊抗鼠IgG購自北京中衫金橋生物技術有限公司。蛋白濃度測定試劑盒和蛋白Marker均購自美國Thermo公司。

1.2H9c2細胞培養H9c2細胞培養在含體積分數90%DMEM高糖培養基、體積分數10%胎牛血清和100 kU/L青霉素、100 mg/L鏈霉素的完全培養基中，放置于37 ℃、體積分數5%CO2的細胞培養箱中。……