膠質瘤致病相關蛋白1對肺癌A549細胞生長及分化的影響

生秀梅，黃新祥， 王正新

1)江蘇大學醫學院生物化學教研室 江蘇鎮江 212013 2)克拉克亞特蘭大大學生物科學系；克拉克亞特蘭大大學癌癥研究與治療發展中心 美國亞特蘭大 30314

肺癌是發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一；目前肺癌的治療仍以手術為主，但術后預后差，生存期短，因此迫切需要找到新的診療方法或研制出新的診療試劑[1-2]。膠質瘤致病相關蛋白1(glioma pathogenesis-related protein 1， GLIPR1)基因是從膠質細胞瘤中克隆出來的新基因[3-4]，屬于富含半胱氨酸分泌蛋白CAP家族[5]。GLIPR1蛋白有一段信號肽和一段跨膜區段，被認為是一種分泌蛋白[5-6]。在前列腺癌和膀胱癌等腫瘤中，GLIPR1具有抑癌作用，受p53調節，其過表達可誘導多種前列腺腫瘤細胞的凋亡[7-9]。有報道[10]指出GLIPR1在正常肺細胞中表達較高，但在肺癌細胞中的表達較低。因此，本研究擬通過慢病毒感染使肺癌A549細胞高表達GLIPR1蛋白或GLIPR1胞外可溶性區段(GLIPR1-S)，探索GLIPR1對A549細胞生長和分化的影響，以期為肺癌藥物的研制提供線索。

1 材料與方法

1.1材料pCDH-FLAG由本室構建(構建所用pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro慢病毒載體系統購自SBI公司)；A549細胞、293T細胞及E.coliXL 10-gold感受態細胞由本室保存。人GLIPR1cDNA克隆 (HsCD00441029) 購自DNASU公司，肺表面活性蛋白C(SPC)抗體購自Millipore公司，anti-β-actin抗體購自Sigma公司，二抗山羊抗大鼠Alexa 595抗體購自Invitrogen公司，anti-GLIPR1抗體購自Abnova公司，細胞染色劑SYTOX GREEN購自美國Molecular Probes公司，Histogel凝膠購自Linaris公司。

1.2GLIPR1、GLIPR1-S重組慢病毒載體的構建根據GLIPR1序列(HQ447422)設計并合成上下游引物，分別在上下游引物的5’端加接EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位點序列；為了增加蛋白的表達，在上游引物GLIPR1起始密碼子AUG前添加ACC堿基[11-13]。……