γ-干擾素的釋放對肺結核的輔助診斷價值分析

蔣麗

結核病是慢性消耗性疾病，感染性較強。我國結核病發病率較高，我國≥15歲人口中有高達499萬的活動性結核病患者[1]。細菌學檢查是活動性肺結核的常用方法，但因結核菌培養時間長，在臨床上會出現誤診或漏診。結核菌素試驗作為輔助診斷肺結核的重要指標，因抗原純蛋白衍生物與卡介苗的抗原有某些相同而引發特異性降低，當人體免疫功能降低時，結核菌素試驗(TST)診斷的敏感性也不斷下降[2]。因此，探尋一種快速、準確的檢測方法，對于結核病的預防尤為重要。γ-干擾素(IFN-γ)是特異性細胞因子，由結核致敏的T淋巴細胞釋放。近年來γ-干擾素釋放試驗(IGRAs)作為一種新型的免疫學診斷方法，已經逐步應用在肺結核的臨床診斷中[3]。本文對IGRAs對肺結核的輔助診斷價值報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2017年5月至2018年5月初次確診為活動性肺結核病患者120例，作為觀察組，均經過病理學確診，男69例，女51例，年齡43～80歲，平均年齡(47.15±7.83)；選取同期非活動性肺結核病患者120例，作為對照組，男63例，女57例，年齡41～82歲，平均年齡(45.48±6.73)歲。兩組均行人類免疫缺陷病毒抗體檢測，均未使用免疫抑制劑或增強劑，結果均顯陰性且無合并妊娠，無心肝腎功能衰竭史，所有受試者均知情同意參與。兩組患者的性別、年齡差異均無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法 兩組研究對象均行IGRAs檢測及TST檢測。

1.2.1 IGRAs檢測 采用Oxford Immunotec公司的IGRAs試劑盒，治療前取5 mL枸櫞酸鈉抗凝靜脈血進行檢測。分離外周血得到單個核細胞，制備成濃度為2.0×106/mL的細胞懸液。細胞培養液和植物血凝素PHA分別作為陰性和陽性對照，結核菌特異性抗原 ESAT-6和CFP-10作為刺激抗原。微孔板中各孔均加入含2.5×105個細胞的細胞懸液，將其放在含5%二氧化碳的培養箱中培養18～20 h，洗板后加入生物素標記的二抗，在2～8℃環境下反應1 h，后加入顯色底物液，室溫靜置7 min，加入去離子水終止反應。采用CTL酶聯免疫斑點系統記錄斑點數。

1.2.2 TST檢測方法 在研究對象左側前臂1/3皮下注射PPD試劑 (北京祥瑞生物制品有限公司生產)，72 h后觀察硬結情況。.

1.3 評判標準 IGRAs檢測評判標準[4]：當空白對照孔內斑點數＜6時，任一試驗孔斑點數減去空白孔斑點數≥6，結果即為陽性；若空白對照孔斑點數≥6，任一試驗孔斑點數≥2倍空白孔斑點數結果也為陽性。

TST檢測評判標準[5]：主要參照《全國結核病防治工作手冊》，患者有直徑≥15 mm紅腫硬結或有水泡或破潰者判為陽性，否則判為陰性。

1.4 觀察指標 觀察靈敏度、特異度、陽性率、陰性率指標。靈敏度＝真陽性/(真陽性＋假陰性)×100%；特異度＝真陰性/(真陰性＋假陽性)×100%；陽性率＝真陽性/(真陽性＋假陽性)×100%；陰性率＝真陰性/(真陰性＋假陰性)×100%

1.5 統計學分析 采用SPSS 18.0分析，兩種檢測方法的診斷準確度采用率表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IGRAs及TST檢測結果陽性率比較 本次研究中，觀察組和對照組經IGRAs確診的結核病患者分別有112例和9例，對應IGRAs對結核病檢測陽性率分別為93.3%(112/120)、7.5%(9/120)；觀察組和對照組經TST確診的結核病患者分別有55例和19例，對應TST對結核病檢測陽性率分別為45.8%(55/120)、15.8%(19/120)，IGRAs對結核病檢測陽性率(93.3%)明顯高于TST(45.8%)，組間比較，差異有統計學意義(P＜0.05，表1)。

表1 IGRAs及TST檢測結果陽性率比較[n(%)]

2.2 觀察組IGRAs及TST試驗在診斷結核病敏感性和特異性上的比較 我們對觀察組患者進行影像學及組織病理學檢查，以其結果為金標準判斷，統計觀察組患者進行IGRAs及TST試驗的敏感性、特異性、陽性率及陰性率。IGRAs試驗中真陽性69例，真陰性41例，假陰性6例，假陽4性例，其對敏感性、特異性、陽性率、陰性率分別為92.0%、91.1%、94.4%、93.8%；TST試驗中真陽性38例，真陰性35例，假陰性37例，假陽性10例，其對敏感性、特異性、陽性率、陰性率分別為50.7%、77.8%、81.9%、79.2%。IGRAs試驗敏感性、特異性、陽性率、陰性率顯著高于TST試驗方法，差異有統計學意義(P＜0.05，表2)。

表2 觀察組IGRAs及TST試驗在診斷結核病敏感性和特異性上的比較 單位：%

3 討論

結核病是一種慢性消耗性疾病，由結核分枝桿菌侵入人體后引起的，具有極強的感染性。我國結核病發病率非常高，我國≥15歲人口中有高達499萬的活動性結核病患者。細菌學檢查是活動性肺結核的金標準，但因結核菌培養時間長，在臨床上會出現誤診或漏診。TST作為輔助診斷肺結核的重要指標，因抗原純蛋白衍生物與卡介苗的抗原有某些相同而引發特異性降低，且當人體免疫功能降低時，TST檢測的敏感度也隨之大幅降低。所以，對于肺結核的控制及預防，準確快速的試驗方法起到了關鍵性作用。

IGRAs是一種診斷結核病的新型檢測方法，其由酶聯免疫斑點演變而來?；颊吒腥痉谓Y核后，結核分枝桿菌可產生CFP-10和ESAT-6兩種特有抗原，抗原刺激T淋巴細胞后，反應產生γ-干擾素使得患者外周血γ-干擾素水平異常，從而來診斷是否感染結核分枝桿菌，此抗原可區分真性結核感染，排除疫苗接種及非結核病感染的干擾[6]。傳統的結核病菌素試驗是基于Ⅳ型反應的臨床檢測方法，其原理是向患者上臂注射結核菌素蛋白衍生物，觀察患者3 d后皮膚反應情況。因結核菌素蛋白衍生物含有CFP-10和ESAT-6特異性抗原，能夠與卡介苗產生反應，如若患者不清楚自己是否打過卡介苗，可能會產生誤診，從而一定程度降低了TST的特異度。我們研究結果顯示，觀察組中120例初診結核病患者通過IGRAs試驗檢查發現陽性112例，陽性率為93.3%；觀察組經TST確診的結核病患者有55例，對應TST對結核病檢測陽性率為45.8%，IGRAs對結核病檢測陽性率(93.3%)明顯高于TST檢測(45.8%)。研究結果表明[7-10]，IGRAs診斷方法表現出較高的敏感性及特異性，對于活動性肺結核可以起到較好的輔助診斷作用。

當患者IGRAs檢測為陽性且具有結核病臨床特征時，IGRAs診斷方法的靈敏度和特異度均明顯提高，為結核病的治療提供參考。此外，我們在關注IGRAs診斷方法在提高診斷效率的同時，也要考慮其降低耗費成本問題。實際臨床治療中，更早期的對結核病做出準確的診斷，可節省部分治療費用，患者可早日康復。

綜上所述，IGRAs診斷方法相比于TST診斷方法，對于肺結核病的診斷具有更高的陽性率、陰性率、敏感性及特異性，且操作簡便，從而有著良好的臨床應用前景。