應用雙抗原夾心法和間接法兩種方法檢測丙型肝炎病毒抗體的結果比較

王俊芳

丙型肝炎是臨床常見的傳染性疾病，是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的[1]。HCV的傳播途徑主要是血液傳播，能通過輸血和血液制品進行傳播，已成為世界性的傳染病。數據統計，全球每年HCV感染導致新發丙型肝炎的人數達到了300萬～400萬人[2-3]。急性丙型肝炎患者可能會進展成肝纖維化、肝癌，嚴重威脅人類健康[4]。為了控制HCV的傳播，丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)已成為血液篩查的重要檢查項目之一[5]。酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法是血液抗-HCV檢測的主要方法，其中又以間接ELISA法應用最為廣泛，但是間接ELISA法檢測由于會受到血清中非特異性IgG等因素的干擾，存在一定的假陽性概率，影響檢測準確性[6]。而雙抗原夾心ELISA法同時對包括IgG、IgM等在內的總抗體進行了檢測，對抗體進行兩次特異性反應，從而減少非特異性的IgG的干擾。近年來雙抗原夾心ELISA法在抗HBsAg抗體、梅毒抗體、抗HIV等抗體的檢測中均取得到了良好的應用效果[7-8]。本次研究收集2017年6月至2018年2月我院檢測的1 300份住院患者傳染病丙肝篩查標本作為研究對象，分別采用雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法進行檢測，以比較兩種ELISA法檢測抗-HCV的結果，現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 收集2017年6月至2018年2月我院檢測的1 300份住院患者傳染病丙肝篩查標本作為研究對象，其中男692例，女608例，年齡21～65歲，平均年齡(43.5±3.7)歲。所有獻血者標本經熒光定量PCR血液篩查，其中檢出抗-HCV陰性標本1 221份，抗-HCV陽性標本79份。

1.2 設備與試劑 采用山東艾德康自動加樣系統、美國熱電酶標儀。血篩間接ELISA試劑盒和雙抗原夾心ELISA試劑盒均由北京萬泰生物藥業股份有限公司提供(批號分別為C20141228、CS20141001)，嚴格按照試劑盒內說明書操作且均在有效期內使用。

1.3 方法 先將收集的所有獻血者標本進行離心，速度3 000 r/min，時間10 min，離心完成后分離血清。然后分別用間接ELISA法試劑盒和雙抗原夾心ELISA試劑盒嚴格按照說明書操作進行檢測，記錄兩種檢測方法的結果。

1.4 評價指標 將熒光定量PCR血液篩查結果作為檢測的金標準，將兩種檢測方法的結果與熒光定量PCR血液篩查結果進行對照，計算兩種檢測方法的靈敏度、特異度、符合率等指標。靈敏度＝真陽性人數/(真陽性人數＋假陰性人數)×100%。特異度＝真陰性人數/(真陰性人數＋假陽性人數)×100%。符合率＝(真陽性人數＋真陰性人數)/總檢查人數×100%。

1.5 統計學方法 應用SPSS 20.0統計軟件進行研究數據的分析統計，靈敏度、特異度等計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法的檢測結果 雙抗原夾心ELISA法檢測出抗-HCV陽性標本1 174份，其中真陽性1 173份，假陽性1份。間接ELISA法檢測出抗-HCV陽性標本1 072份，其中真陽性1 060份，假陽性12份(表1)。

表1 雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法的檢測結果比較(n)

2.2 雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法的診斷效能比較 雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的靈敏度、特異度以及符合率分別為96.07%(1 173/1 221)、98.73%(78/79)、96.23%(1 251/1 300)，間接ELISA法檢測抗-HCV的的靈敏度、特異度以及符合率分 別 為 86.81%(1 060/1 221)、84.81%(67/79)、86.69%(1 127/1 300)，雙抗原夾心ELISA法檢測的靈敏度、特異度以及符合率均明顯高于間接ELISA法，差異有統計學意義(P＜0.05，表2)。

表2 雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法的診斷效能比較 單位：%

3 討論

HCV為單股正鏈RNA病毒，感染初期癥狀不明顯，但極可能造成慢性肝炎、肝功能衰竭甚至肝癌，HCV感染已成為全球范圍內的公共衛生問題[9]。輸血傳播是HCV感染的重要傳播途徑之一。由于HCV感染目前缺乏有效的疫苗，因此早期篩查和診治成為控制丙型肝炎傳染的手段[10]。目前國內采供血機構對抗-HCV血液篩查主要采用間接法酶聯免疫試劑進行。間接ELISA法具有較高的特異性，但由于抗-HCV間接法酶聯免疫試劑主要采用二抗作為酶結合物，而血清中的IgG抗體出現時間要晚于IgM抗體，因此獻血者若在HCV感染早期進行采集血液則容易發生陽性漏檢[11]。另外由于其抗原制備技術特點，血清中的IgG抗體濃度較高，少量非特異性IgG抗體和類風濕因子吸附造成一定比例的假陽性反應，雖然通過稀釋能降低IgG抗體濃度，但操作繁瑣，且假陽性問題仍無法避免[12-13]。近年來，隨著醫療環境的不斷改善，臨床對于供血量和血液安全性均提出了新的需求，對于抗-HCV的血液篩查也急需一種靈敏度和特異度更好的檢測方法。雙抗原夾心ELISA法是重組抗原技術的基礎上發展而來的，它采用酶類標記抗原代替酶類標記二抗，對包括IgG、IgM等在內的總抗體進行了檢測，對抗體進行兩次特異性反應，從而減少非特異性的IgG的干擾，提高檢測的敏感度和特異度，有效彌補了間接ELISA法的缺陷[14-15]。本次研究對雙抗原夾心ELISA法和間接ELISA法兩種方法檢測抗-HCV的檢查結果進行了對比發現，1 221份抗-HCV陽性標本，雙抗原夾心ELISA法檢測出抗-HCV陽性標本1 174份，其中真陽性1 173份，假陽性1份。間接ELISA法則檢測出抗-HCV陽性標本1 072份，其中真陽性1 060份，假陽性12份。雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的靈敏度、特異度以及符合率分別為96.07%、98.73%、96.23%，明顯高于間接ELISA法，差異有統計學意義(P＜0.05)。結果與李亞勤[16]的研究結果一致，表明雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的靈敏度和特異性要優于間接ELISA法，能有效減少假陽性比例，從而降低假陽性血液的報廢量，避免獻血樣本的浪費。

綜上所述，與間接ELISA法比較，雙抗原夾心ELISA法檢測抗-HCV的靈敏度和特異度明顯提高，能提高臨床檢測的準確性，降低假陽性，減少醫療糾紛，可作為臨床血液樣本抗-HCV篩查的首選方法。